何亞利，梁順容，鐘一梅

（江門市五邑中醫(yī)院檢驗科，廣東江門 529000）

T淋巴細(xì)胞亞群與炎性因子在評估再生障礙性貧血病情及預(yù)后中的應(yīng)用

何亞利，梁順容，鐘一梅

（江門市五邑中醫(yī)院檢驗科，廣東江門 529000）

目的研究T淋巴細(xì)胞亞群與炎性因子檢測在再生障礙性貧血（AA）病情及預(yù)后評估中的價值。方法選取本院收治的40例AA患者作為AA組，并進(jìn)一步分為急性再生障礙性貧血（AAA）組和慢性再生障礙性貧血（CAA）組；同時選取同期于本院體檢的40例健康者作為對照組。比較兩組患者的血常規(guī)指標(biāo)、外周血T淋巴細(xì)胞亞群百分率和血清炎性因子水平。結(jié)果AA組患者外周血輔助性T淋巴細(xì)胞（Th）Th1、Th17細(xì)胞百分率及Th1/Th2、Th17/調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞（Treg）比例均高于對照組（P＜0.05），Th2、Treg細(xì)胞百分率低于對照組（P＜0.05）；AAA組外周血Th1、Th17細(xì)胞百分率及Th1/Th2、Th17/Treg比例高于CAA組，Th2、Treg細(xì)胞水平低于CAA組（P＜0.05）。AA組患者血清白細(xì)胞介素（IL）-2、IFN-γ、IL-17水平高于對照組，IL-4、IL-6、IL-10水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；AAA組血清中IL-2、干擾素-γ（IFN-γ）、IL-17水平高于CAA組，IL-4、IL-6、IL-10水平低于CAA組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；血紅蛋白（Hb）水平、PTL與Th1、Th17細(xì)胞水平及IL-2、IFN-γ、IL-17水平呈負(fù)相關(guān)，與Th2、Treg細(xì)胞水平及IL-4、IL-6、IL-10水平呈正相關(guān)。結(jié)論AA患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群百分率及血清炎性因子水平存在異常，而且與反映病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的指標(biāo)具有良好的相關(guān)性。

再生障礙性貧血； 輔助性T淋巴細(xì)胞； 調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞； 炎性因子

再生障礙性貧血（AA）是血液系統(tǒng)的常見疾病，是骨髓造血功能衰竭所致的全血細(xì)胞減少綜合征，臨床主要表現(xiàn)為貧血、出血、感染，無肝脾淋巴結(jié)腫大，該病的發(fā)生與細(xì)胞免疫功能異常密切相關(guān)［1］。T淋巴細(xì)胞是調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能的重要細(xì)胞，不同的T淋巴細(xì)胞亞群在細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮了不同的作用［2］。筆者分析了T淋巴細(xì)胞亞群與炎性因子在評估AA病情及預(yù)后中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年4月至2014年9月本院收治的40例AA患者作為AA組，所有患者均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》中AA的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］；選取同期于本院進(jìn)行體檢且合格的40例健康者作為對照組。兩組人群均在告知研究事項后簽署知情同意書。AA組：男24例、女16例，年齡（36.92± 5.52）歲，再按照病情嚴(yán)重程度分為急性再生障礙性貧血（AAA）和慢性再生障礙性貧血（CAA）亞組。AAA組：20例，其中男13例、女7例，年齡（37.12±5.61）歲；CAA組：20例，其中男11例、女9例，年齡（36.86±5.48）歲。對照組：共40例，男23例、女17例，年齡（37.20±4.93）歲。各組人群性別比、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 血常規(guī)檢測 采集兩組患者的外周靜脈血，采用Sysmex XE-5000血常規(guī)分析儀檢測血紅蛋白（Hb）和血小板計數(shù)（PLT），Hb檢測采用SLS-血紅蛋白測定法，PLT采用RF/DC測定法。

1.2.2 T淋巴細(xì)胞亞群檢測 采集兩組患者的外周血5 mL，肝素抗凝后加入淋巴細(xì)胞分離液，3 000 r/min離心10 min后分離得到外周血單核淋巴細(xì)胞后首先孵育FITC標(biāo)記的CD4抗體，PBS洗滌后加入破膜劑，破碎細(xì)胞后加入PE標(biāo)記的干擾素γ（IFN-γ）、白細(xì)胞介素（IL）10、IL-17及CD25抗體，分別用于檢測輔助性T淋巴細(xì)胞（Th）Th1、Th2、Th17、調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞（Treg）；室溫孵育30 min后用流式細(xì)胞儀檢測不同T淋巴細(xì)胞亞群的百分率。

1.2.3 炎性因子的檢測 采集兩組患者的外周靜脈血5 m L，室溫靜置30 min后于3 000 r/min離心10 min，收集血清后采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清干擾素（IFN-γ）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17水平。試劑盒均為美國Biomedical公司產(chǎn)品，檢測方法為酶聯(lián)免疫法。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS18.0軟件錄入和分析數(shù)據(jù)，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，相關(guān)性分析采用一元線性回歸，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 外周血T淋巴細(xì)胞亞群 AA組患者外周血中Th1、Th17細(xì)胞百分率及Th1/Th2、Th17/Treg比例均高于對照組，而Th2、Treg細(xì)胞百分率低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；AAA組外周血Th1、Th17細(xì)胞百分率及Th1/ Th2、Th17/Treg比例均高于CAA組，而Th2、Treg細(xì)胞百分率均低于CAA組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組受試者外周血T淋巴細(xì)胞亞群百分率或比值的比較（±s）

*：P＜0.05，與對照組比較；△：P＜0.05，與CAA組比較。

組別 n Th1（%） Th2（%） Th1/Th2 Th17（%） Treg（%） Th17/Treg AA組 40 25.48±2.98* 10.87±1.48* 2.34±0.32* 1.84±0.25* 8.84±0.95* 0.21±0.03*AAA組 20 27.32±3.45*△ 8.78±1.21*△ 2.54±0.42*△ 2.02±0.21*△ 7.65±0.75*△ 0.25±0.05*△CAA組 20 24.12±2.62* 11.32±1.54* 2.26±0.06* 1.73±0.23* 9.54±1.02* 0.19±0.04*對照組40 18.45±2.14 16.63±1.97 1.11±0.13 1.14±0.15 14.78±1.92 0.08±0.01

2.2 血清炎性因子水平 AA組患者血清IL-2、IFN-γ、IL-17水平高于對照組，IL-4、IL-6、IL-10水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；AAA組血清IL-2、IFN-γ、IL-17水平高于CAA組，IL-4、IL-6、IL-10水平低于CAA組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2各組受試者血清炎性因子水平比較（pg/mL，±s）

*：P＜0.05，與對照組比較；△：P＜0.05，與CAA組比較。

IL-2 IL-4 IL-6 IL-10 IL-17 AA組 40 17.52±2.04*205.52±27.72* 4.74±0.22* 11.38±1.52* 13.49±1.85* 17.91±2.15組別 n IFN-γ * AAA組 20 19.12±3.21*△215.14±32.25*△4.52±0.14*△ 10.21±1.35*△12.12±1.65*△19.21±3.21*△CAA組 20 15.68±2.54*185.94±26.54* 5.12±0.23* 13.12±1.46* 14.65±2.01* 16.35±2.65*對照組40 10.48±1.28 127.48±17.58 7.58±0.92 17.79±2.34 22.29±2.58 7.85±0.94

2.3 血常規(guī)指標(biāo)與T淋巴細(xì)胞百分率及炎性因子水平的相關(guān)性 Hb水平、PTL計數(shù)與Th1、Th17細(xì)胞百分率及IL-2、 IFN-γ、IL-17水平呈負(fù)相關(guān)，與Th2、Treg細(xì)胞百分率及IL-4、IL-6、IL-10水平呈正相關(guān)，見表3。

3 討 論

細(xì)胞免疫功能紊亂是造成AA發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)；而CD4+T淋巴細(xì)胞作為體內(nèi)最為重要的Th，是機(jī)體免疫功能調(diào)控的中心。Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞是最早被認(rèn)識的兩類Th細(xì)胞亞群，正常條件下，體內(nèi)Th1和Th2細(xì)胞的數(shù)目和功能互相影響并處于動態(tài)平衡的狀態(tài)，維持機(jī)體正常的細(xì)胞免疫功能和體液免疫功能［4］；當(dāng)Th1/Th2細(xì)胞發(fā)生極化時，Th細(xì)胞不同亞群的平衡被打破、細(xì)胞免疫功能亢進(jìn)，進(jìn)而抑制造血干細(xì)胞的功能［5］。Th17細(xì)胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類Th細(xì)胞，主要分泌IL17、IL-21、IL-23等細(xì)胞因子。在體內(nèi)，Th17細(xì)胞與Treg互相調(diào)節(jié)并維持平衡；Treg的細(xì)胞表面表達(dá)CD4、CD25及CD39，經(jīng)T細(xì)胞抗原受體（TCR）介導(dǎo)的信號激活后能夠抑制效應(yīng)T淋巴細(xì)胞、維持免疫耐受［6］。Th17細(xì)胞功能增強(qiáng)、Treg的免疫抑制功能減弱會導(dǎo)致造血功能損傷［7］。AA組患者外周血Th1、Th17細(xì)胞百分率高于對照組，Th2、Treg細(xì)胞百分率低于對照組，且AAA組與CAA組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

如前所述，不同的T淋巴細(xì)胞亞群可以分泌不同的炎性細(xì)胞因子，進(jìn)而通過細(xì)胞因子來發(fā)揮對細(xì)胞免疫功能的調(diào)控作用。Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、IFN-γ并增強(qiáng)細(xì)胞免疫反應(yīng)［8］；Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-6并主導(dǎo)體液免疫反應(yīng)、抑制細(xì)胞免疫反應(yīng)［9］。Treg細(xì)胞主要分泌IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）β，兩者均是免疫系統(tǒng)中十分重要的抑制因子，不僅可以直接抑制效應(yīng)T細(xì)胞的功能，還能夠抑制Th17細(xì)胞的分化和成熟［10］；IL-17是Th17細(xì)胞分泌的最重要的炎性因子，能夠通過活化下游信號分子絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、NF-κB來造成炎性細(xì)胞募集、抑制造血功能、破壞造血組織［11］。本研究分析了血清中T淋巴細(xì)胞分泌產(chǎn)生的炎性因子水平，AA組患者血清IL-2、IFN-γ、IL-17水平高于對照組，IL-4、IL-6、IL-10水平低于對照組，而且AAA患者與CAA患者間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。這提示AA患者體內(nèi)存在Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞的功能亢進(jìn)，Th2和Treg細(xì)胞的功能減弱，而且與病情嚴(yán)重程度有關(guān)。

AA最主要臨床表現(xiàn)是嚴(yán)重的貧血、感染和出血征象，細(xì)胞免疫異常對骨髓造血功能的抑制直接表現(xiàn)為Hb水平和PLT減少。在臨床實踐中，Hb水平和PLT是判斷AA患者病情及預(yù)后的常用指標(biāo)［12］。為了明確T淋巴細(xì)胞亞群及炎性因子水平對AA病情及預(yù)后的評估價值，筆者分析了血常規(guī)指標(biāo)與T淋巴細(xì)胞及炎性因子水平的相關(guān)性，結(jié)果顯示：Hb水平、PTL計數(shù)與Th1、Th17細(xì)胞百分率及IL-2、IFN-γ、IL-17水平呈負(fù)相關(guān)，與Th2、Treg細(xì)胞百分率及IL-4、IL-6、IL-10水平呈正相關(guān)，與國內(nèi)外文獻(xiàn)報道基本一致［13-14］。

本研究表明，AA患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群百分率及血清炎性因子水平存在異常，與反映病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的指標(biāo)具有良好的相關(guān)性。本研究的局限性在于選擇樣本量較少，缺少對相關(guān)性的深入研究，有待于今后擴(kuò)大樣本加以完善。

［1］ 齊薇薇，付蓉，王化泉，等.重型再生障礙性貧血患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量異常及其臨床意義［J］.中國實驗血液學(xué)雜志，2014，22（4）：1043-1046.

［2］Mavroudi I，Papadaki HA.Genetic associations in acquired immune-mediated bone marrow failure syndromes：insights in aplastic anemia and chronic idiopathic neutropenia［J］.Clin Dev Immunol，2012，2012：123789.

［3］張之南，沈悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)［M］.3版.北京：科學(xué)出版社，2007：19-23.

［4］張磊，薛軍，蘇愛玲，等.再生障礙性貧血血清IL-2、TNF-α、sFas、IFN-γ及外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化研究［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38（24）：5135-5136.

［5］Ge M，Zheng Y，Li X，et al.Differential expression profile of Th1/ Th17/Th2-related chemokines and their receptors in patients with acquired bone marrow failure syndromes［J］.Hum Immunol，2013，74（2）：176-180.

［6］孫豫蘭，路叢，何廣勝，等.m TOR信號途徑分子在再生障礙性貧血患兒T淋巴細(xì)胞中表達(dá)的意義［J］.中華實用兒科臨床雜志，2014，29（15）：1166-1169.

［7］童來根，吳文忠，周志剛，等.再生障礙性貧血外周血Th17和CD4+CD25+Treg細(xì)胞表達(dá)情況研究［J］.中國實驗血液學(xué)雜志，2013，21（4）：974-978.

［8］Qian L，Shen J，Cai J.Hydrogen therapy May be an effective and specific novel treatment for aplastic anemia［J］.Med Sci Monit，2012，18（6）：19-22.

［9］童勇，馬莉，曾小菁.再生障礙性貧血患者Th及NKT細(xì)胞IFN-γ和IL-4的表達(dá)及意義［J］.中國免疫學(xué)雜志，2011，27（9）：840-843.

［10］Solomou EE，Keyvanfar K，Young NS.T-bet，a Th1 transcription factor，is up-regulated in T cells from patients with aplastic anemia［J］.Blood，2006，107（10）：3983-3991.

［11］李軍，黃可欣，陸培信，等.再生障礙性貧血患者外周血和骨髓中IL-17、IL-23及TGF-β表達(dá)水平及其臨床意義［J］.吉林大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2014，40（1）：146-149.

［12］董琪娥，付蓉，劉春燕，等.他克莫司對重型再生障礙性貧血患者效應(yīng)T細(xì)胞抑制作用的研究［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2013，93（20）：1541-1545.

［13］Babushok DV，Li Y，Roth JJ，et al.Common polymorphic deletion of glutathione S-transferase theta predisposes to acquired aplastic anemia：Independent cohort and meta-analysis of 609 patients［J］. Am J Hematol，2013，88（10）：862-867.

［14］陸雯萍，林贈華，劉紅，等.重型再生障礙性貧血模型小鼠脾臟CD4+CD25+T細(xì)胞凋亡影響及機(jī)制研究［J］.中華血液學(xué)雜志，2013，34（11）：931-935.

Application of T lymphocyte subsets and inflammatory factors in evaluating severity and prognosis of aplastic anemia

He Yali，Liang Shunrong，Zhong Yimei

（Department of Clinical Laboratory，Jiangmen Wuyi Traditional Chinese Medicine Hospital，Jiangmen，Guangdong 529000，China）

ObjectiveTo study the application value of T lymphocyte subsets and inflammatory factors in evaluating severity and prognosis of aplastic anemia.Methods40 patients with aplastic anemia in the hospital were enrolled in the study as AA group，which was further divided into acute aplastic anemia（AAA）subgroup and chronic aplastic anemia（CAA）subgroup.In addition to that，40 healthy people who

physical examination in the hospital during the same period were enrolled in the study as control group.Then blood routine tests were performed，T lymphocyte subsets content in peripheral blood and serum inflammatory factor content were detected and the results were compared.ResultsTh1，Th17 contents and Th1/Th2，Th17/Treg ratio in AA group were higher than those in control group（P＜0.05），while Th2，Treg contents were lower（P＜0.05）；Th1，Th17 contents and Th1/ Th2，Th17/Treg ratio in AAA group were higher than those in CAA group（P＜0.05），while Th2，Treg cells contents were lower. Serum IL-2，IFN-γ，IL-17 contents in AA group were higher than those in control group（P＜0.05），while IL-4，IL-6，IL-10 contents were lower（P＜0.05）；serum IL-2，IFN-γ，IL-17 contents in AAA group were higher than those of CAA group，while IL-4，IL-6，IL-10 contents were lower.Hb，PTL contents were negatively correlated with Th1，Th17 contents and serum IL-2，IFN-γ，IL-17 contents，while positively correlated with Th2，Treg cells contents and serum IL-4，IL-6，IL-10 contents.ConclusionPeripheral blood T lymphocyte subsets and serum inflammatory factors contents in aplastic anemia are abnormal and are correlated with the severity and prognosis related indicators.

aplastic anemia； helper T cell； regulatory T cells； inflammatory factor

10.3969/j.issn.1673-4130.2015.17.026

A

1673-4130（2015）17-2516-03

2015-01-08）

何亞利，主管檢驗技師，主要從事臨床血液學(xué)與檢驗的研究。