郭繼梅，朱高香，呂玲

(青島市第九人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東 青島 266002)

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宮頸上皮內(nèi)瘤變組織OLFM4和Ki-67表達(dá)及意義

郭繼梅，朱高香，呂玲

(青島市第九人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東 青島 266002)

目的 探討牛嗅素4(OLFM4)、細(xì)胞增殖抗原67(Ki-67)在宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)組織中的表達(dá)及意義。方法 采用免疫組織化學(xué)S-P法分別檢測21例正常宮頸上皮、26例CINⅠ、32例CINⅡ及28例CINⅢ組織中OLFM4、Ki-67蛋白的表達(dá)情況及其與臨床病理特征的關(guān)系，并計算兩種標(biāo)記物診斷的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值及約登指數(shù)。結(jié)果 CIN組織中OLFM4的表達(dá)高于正常宮頸上皮組織中的表達(dá)，差異有顯著性(χ2=9.012～9.463，P<0.05)；而OLFM4在CIN不同級別組織中的表達(dá)差異無顯著性(P>0.05)。OLFM4診斷宮頸上皮內(nèi)瘤變的靈敏度為94.0%，特異度為80.0%，陽性預(yù)測值為95.1%，陰性預(yù)測值為76.2%，約登指數(shù)為0.740。Ki-67在不同級別CIN組織的表達(dá)高于在正常宮頸上皮組織中的表達(dá)，差異有顯著性(χ2=4.24～5.46，P<0.05)；而Ki-67在CIN不同級別組織中的表達(dá)差異無顯著性(P>0.05)。Ki-67診斷宮頸上皮內(nèi)瘤變的靈敏度為60.2%，特異度為50.0%，陽性預(yù)測值為83.3%，陰性預(yù)測值為23.3%，約登指數(shù)為0.102。結(jié)論 OLFM4、Ki-67的表達(dá)隨CIN進(jìn)展而增強，OLFM4的輔助診斷價值高于Ki-67。

牛嗅素4；細(xì)胞增殖抗原67；宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變；免疫組織化學(xué)

宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)與宮頸癌的發(fā)病密切相關(guān)，CIN發(fā)展至宮頸癌一般需要8～10年的時間，若能在癌前病變階段找到預(yù)測病變進(jìn)展的標(biāo)記物，則可以在早期發(fā)現(xiàn)并能預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。牛溴素4(OLFM4)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種糖蛋白，與消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但與宮頸病變關(guān)系的研究很少。細(xì)胞增殖抗原67(Ki-67)用于宮頸病變的診斷已取得共識。本研究采用免疫組織化學(xué)方法分別檢測OLFM4和Ki-67在CIN組織中的表達(dá)，探討兩者在CIN發(fā)生發(fā)展中的作用及其意義?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1材料來源

2009年6月—2012年6月，在我院婦產(chǎn)科經(jīng)宮頸活檢、環(huán)形電切術(shù)及手術(shù)切除的宮頸上皮組織蠟塊標(biāo)本107例。其中正常宮頸上皮組織標(biāo)本21例，CINⅠ組織標(biāo)本26例，CINⅡ組織標(biāo)本(NCE)32例，CIN Ⅲ組織標(biāo)本28例。病人年齡23～66歲，平均43歲。術(shù)前所有參加研究病人均未行放化療。

1.2方法

采用免疫組織化學(xué)S-P方法檢測各種組織中OLFM4、Ki-67的表達(dá)水平。按試劑盒說明步驟操作，OLFM4兔抗人多克隆抗體購于英國Abcam公司，鼠抗人單克隆抗體、SP染色試劑盒及DAB顯色劑均購于北京中山金橋生物技術(shù)有限公司。陽性對照用已知陽性組織切片，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3結(jié)果判定

根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例及染色強度計分。陽性細(xì)胞率計分：無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞占1%～10%為1分，11%～50%為2分，51%～80%為3分，>80%為4分。染色強度計分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。根據(jù)兩者的乘積判斷結(jié)果：0分為陰性(-)，1～4分為弱陽性(+)，5～8分為陽性()，9～12分為強陽性()。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗。

2 結(jié) 果

OLFM4陽性顆粒主要位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，在細(xì)胞核內(nèi)僅見少量著色。CIN組織中OLFM4的表達(dá)高于正常宮頸上皮組織，差異有顯著意義(χ2=9.012～9.463，P<0.05)；OLFM4在CIN不同級別組織中的表達(dá)差異無顯著意義(P>0.05)。OLFM4診斷CIN的靈敏度為94.0%，特異度為80.0%，陽性預(yù)測值為95.1%，陰性預(yù)測值為76.2%，約登指數(shù)為0.740。Ki-67陽性顆粒主要定位于細(xì)胞核。Ki-67在不同級別CIN組織的表達(dá)高于正常宮頸上皮組織，差異有顯著性(χ2=4.24～5.46，P<0.05)；而Ki-67在CIN不同級別組織中的表達(dá)差異無顯著性(P>0.05)。Ki-67診斷CIN的靈敏度為60.2%，特異度為50.0%，陽性預(yù)測值為83.3%，陰性預(yù)測值為23.3%，約登指數(shù)為0.102。見表1。

表1 OLFM4、Ki-67在各種宮頸組織表達(dá)(例(χ/%))

組織類型nOLFM4-+ Ki-67-+ NCE2116(80.0)5(20.0)0011(50.0)7(35.0)1(5.0)2(10.0)CINⅠ263(8.0)19(76.0)4(16.0)014(52.0)5(20.0)4(16.0)3(12.0)CINⅡ323(6.5)9(29.0)15(48.4)5(16.1)15(45.2)3(9.7)8(25.8)6(19.3)CINⅢ282(3.7)3(11.1)16(59.3)7(25.9)7(22.2)2(7.4)5(18.5)14(51.9)

3 討 論

3.1OLFM4在CIN組織中的表達(dá)

OLFM4基因定位于人類染色體13q14.3[1]，主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的線粒體上，小部分在細(xì)胞核上[2]。OLFM4在骨髓、前列腺、乳腺、胰腺、胃、結(jié)腸組織中呈高表達(dá)，特別是在消化系統(tǒng)惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)[3]，其機制是通過抑制cyt-c的釋放及活化caspase 3和caspase 9，從而減弱H2O2、TNFα誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[4]，也可以與促凋亡因子GRIM-19發(fā)生相互作用[5]，從而減弱其介導(dǎo)的相關(guān)凋亡基因Gadd153、PIG12和c-Abl的表達(dá)[6]，達(dá)到抗細(xì)胞凋亡作用。同時，OLFM4通過作用于DNA合成的S期、G2/M期以調(diào)控細(xì)胞周期，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖[5]，這可能是它調(diào)節(jié)cyclin、CDK和其他效應(yīng)分子(如Chk-1)的機制[7]。另外，OLFM4可能作用于PI3K/PKB的下游[8]，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長。OLFM4與胞外黏附分子凝集素、鈣黏素相互作用，對腫瘤細(xì)胞的黏附和轉(zhuǎn)移起重要作用[5]。因此，這種蛋白似乎在細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞的黏附和遷移、細(xì)胞間相互作用及組織構(gòu)建過程中發(fā)揮重要作用，但是在組織構(gòu)建中的作用依靠組織類型。OLFM4已經(jīng)成為胃癌發(fā)生、分化和進(jìn)展的一個標(biāo)記物[3]。DASSEN等[9]研究顯示，OLFM4在人類子宮內(nèi)膜高表達(dá)，并且子宮內(nèi)膜異位癥及子宮內(nèi)膜癌組織中OLFM-4的表達(dá)受雌激素受體-α和EGF-1調(diào)控。本研究結(jié)果顯示，OLFM4在宮頸CIN組織中的表達(dá)高于正常宮頸上皮組織，差異有顯著性，提示OLFM4可作為區(qū)分正常宮頸組織及CIN組織的有效指標(biāo)，并且OLFM4在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中的陽性表達(dá)率隨宮頸病變進(jìn)展逐漸增高，說明OLFM4能較準(zhǔn)確地反映宮頸上皮細(xì)胞的增殖和分化情況。本研究和YU等[10]研究結(jié)果相似之處是都顯示OLFM4是宮頸病變進(jìn)展的標(biāo)記物，和CIN的進(jìn)展密切相關(guān)。但是YU等[10]研究還顯示，OLFM4和宮頸癌的分化密切相關(guān)，提示其表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。這些研究說明OLFM4在女性生殖道腫瘤發(fā)生發(fā)展中起了重要作用。以后有必要進(jìn)一步大樣本研究OLFM4在宮頸癌及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)。

3.2Ki-67在CIN組織中的表達(dá)

Ki-67與細(xì)胞的有絲分裂有關(guān)，貫穿表達(dá)于增殖期的細(xì)胞中，基因定位于人類10號染色體，胞內(nèi)定位于細(xì)胞核。Ki-67蛋白在有絲分裂的G1、S、G2和M期均有合成，在G1期出現(xiàn)，在S、G2期逐漸升高，在M期達(dá)到高峰，而在G0期缺失。由于其半衰期短，不表達(dá)于DNA修復(fù)狀態(tài)的細(xì)胞，因此，可以準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖活性[11]。研究表明，它與很多惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后具有相關(guān)性[12]。牛兆山等[13]研究結(jié)果顯示，Ki-67蛋白與子宮內(nèi)膜腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有學(xué)者報道，Ki-67蛋白可以很好地反映宮頸癌細(xì)胞的增殖情況[14]。楊秀鳳等[15]研究顯示，Ki-67蛋白表達(dá)在宮頸癌化療前后有顯著的變化，從而可用于預(yù)測化療的臨床療效。研究還顯示，Ki-67蛋白表達(dá)與EBV相關(guān)胃癌有一定的關(guān)系[6]。本文結(jié)果顯示，Ki-67在CINⅠ、CINⅡ、CIN Ⅲ組織中的陽性表達(dá)率明顯高于正常宮頸上皮組織，說明正常宮頸上皮處于細(xì)胞增殖活性較低狀態(tài)，而CIN的細(xì)胞處于增殖活性較高的狀態(tài)，提示Ki-67可成為區(qū)分正常宮頸上皮及CIN組織的有效指標(biāo)。

總之，OLFM4與Ki-67可能通過參與調(diào)控細(xì)胞周期，來促進(jìn)細(xì)胞的增殖，并很有可能相互影響。而OLFM4診斷CIN的靈敏度、特異度、約登指數(shù)均高于Ki-67，提示OLFM4對CIN的輔助診斷價值高于Ki-67。本研究為CIN病人的早期診斷、治療提供了監(jiān)測指標(biāo)。

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(本文編輯 厲建強)

THE EXPRESSIONS AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF OLFM4 AND KI-67 IN CERVICAL INTRAEPITHELIAL NEOPLASIA

GUOJimei,ZHUGaoxiang,LüLing

(Department of Gynaecology and Obstetrics, The Ninth People’s Hospital of Qing-dao, Qingdao 266002, China)

ObjectiveTo explore the expressions of OLFM4 and Ki-67 in cervical intraepithelial neoplasia (CIN).MethodsUsing immunohistochemistry S-P method, OLFM4 and Ki-67 in 21 cases of normal cervical epithelium (NCE) and 26 cases of CIN were detected, their association with clinical and pathological features was analyzed, the diagnostic sensitivity and specificity of the two markers, the positive and negative predictive value and Youden index were calculated.ResultsThe expression of OLFM4 protein in CIN was higher than that in NCE, the difference was significant (χ2=9.012-9.463,P<0.05), and the difference of expressions of OLFM4 in different-grade CIN was not significant (P>0.05). The sensitivity of OLFM4 in the diagnosis of CIN was 94.0%, the specificity was 80.0%, the specificity was 80.0%, positive predictive value (PPV) was 95.1%, the ne-gative predictive value (NPV) was 76.2%, and the Youden index was 0.740. The expression of Ki-67 in different-grade CIN was higher than that in NCE (χ2=4.24-5.46,P<0.05), and that between different-grade CIN was not significant (P>0.05). The sensitivity of Ki-67 in the diagnosis of CIN was 60.2%, the specificity was 50.0%, the PPV was 83.3%, the NPV was 23.3%, the Youden index was 0.102.ConclusionThe expressions of OLFM4 and Ki-67 are enhanced with the progress of cervical intraepithelial neoplasia, the value of auxiliary diagnosis of OLFM4 is higher than Ki-67.

olfactomedin 4; cell proliferation antigen 67; cervical intraepithelial neoplasia; immunohistochemistry

2014-04-26;

2014-10-24

郭繼梅(1971-)，女，碩士，副主任醫(yī)師。

呂玲(1973-)，女，碩士，主治醫(yī)師。

R711.14

A

1008-0341(2015)02-0129-03