景贊 劉超

（樂山市食品藥品檢驗檢測中心，四川樂山 614000）

LC-MS/MS法測定酒中罌粟殼生物堿

景贊 劉超

（樂山市食品藥品檢驗檢測中心，四川樂山 614000）

本文建立了高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蒸餾酒及配制酒中罌粟殼生物堿（嗎啡、蒂巴因、罌粟堿、那可?。┑姆椒?。蒸餾酒采取直接進樣，配制酒經(jīng)PCX固相萃取柱凈化后分析，以乙腈（含0.1%乙酸）-10mmol/L乙酸銨為流動相梯度洗脫，液相柱為ODSC18柱，質(zhì)譜選擇正離子多反應監(jiān)測模式，以外標法定量。該方法嗎啡、蒂巴因、罌粟堿、那可丁的檢出限為20ng/mL、5ng/mL、5ng/mL、5ng/mL，回收率范圍91.1%～101.4%，本方法樣品處理簡便，定性定量準確，適用于酒中罌粟殼生物堿含量的檢測。

酒；液質(zhì)聯(lián)用；罌粟殼生物堿成分

罌粟殼為植物罌粟干燥成熟的果殼，主要含有罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因等多種生物堿。罌粟殼加工入藥，有斂肺、澀腸、止咳、止痛和催眠等功效，可以治久咳、久瀉、脫肛、心腹、筋骨等諸痛[1]，在本草綱目中也有記載，是治療久痢不止的良藥，現(xiàn)代醫(yī)學上，從罌粟殼中提取嗎啡用于鎮(zhèn)痛，有良好的藥用價值[2,3]。但近年來，罌粟殼卻被利欲熏心的不法之徒，用來添加在調(diào)味料、尤其是火鍋底料中，以使消費者“百吃不厭”，但長期食用含有罌粟殼的食品，會讓人產(chǎn)生生理依賴性，嚴重時會危害神經(jīng)和消化系統(tǒng)[4,5]。

白酒作為大宗消費品，在國內(nèi)占有很大的市場，但近年來其質(zhì)量安全狀況也不容樂觀[6-7]，不法商販為謀取利益不擇手段，酒中也有罌粟殼生物堿的檢出，長期低劑量飲用含有罌粟殼成分的酒類會有致癮性，大劑量服用甚至危及生命。因此，建立一種檢測酒中罌粟殼生物堿的方法顯得迫在眉睫。目前檢測罌粟殼生物堿的方法有分光光度法、氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法等，而前4種方法前處理復雜，大量消耗乙醚、氯仿，對環(huán)境和實驗人員都有傷害，對于復雜基質(zhì)的樣品分離結(jié)果不甚理想；相比之下，液質(zhì)聯(lián)用法前處理方法簡便，尤其適用于分離復雜基質(zhì)樣品，無論定性還是定量都更為準確[11-14]，所以本文選擇液質(zhì)聯(lián)用法檢測蒸餾酒及配制酒中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因，而關(guān)于檢測酒中上述物質(zhì)的方法還未有報道，本方法填補了此項空白，擴大了食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的檢測范圍。

近幾年食品違法添加非食用物質(zhì)呈上升態(tài)勢，食品監(jiān)管形式依然嚴峻，面對此種情況，我們更應該加強風險意識和檢驗技術(shù)能力建設，將食品安全事件的發(fā)生率降到最低限度，也是建立該方法的意義所在。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

20個樣品采購自本市各零售網(wǎng)點及餐飲店，在售或自制的蒸餾酒及配制酒。

嗎啡、蒂巴因、罌粟堿、那可丁均購于中國藥品生物制品研究所。乙腈、甲酸，色譜純。乙酸銨，優(yōu)級純。

1.2 儀器與設備

高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜儀，API3200，AB SCIEX公司；

超純水機，UPT-Ⅱ-10T，四川優(yōu)普超純科技有限公司；

SPE固相萃取裝置，Agela；

PCX固相萃取柱，500mg/6mL，Agela。

1.3 標準溶液配制

配制嗎啡、蒂巴因、罌粟堿、那可丁混合標準溶液，蒂巴因、罌粟堿、那可丁濃度為0、20、40、60、80、100ng/mL；嗎啡濃度為0、50、100、200、300、400ng/mL。

1.4 樣品前處理

蒸餾酒：經(jīng)0.22μm有機濾膜過濾后備用。

配制酒：取10mL樣品于PCX固相萃取柱（事先用5mL甲醇和5mL純水活化）中，以小于1mL/min的速度過柱，分別用5mL甲醇和5mL純水淋洗，棄去所有淋洗液，再用10mL含5%氨水的甲醇溶液洗脫，收集洗脫液，氮氣吹至近干后，加入1mL乙腈（含0.1%乙酸）-10mmol/L乙酸銨溶液（體積比1:9）[8,9]，溶解后備用。

1.5 儀器條件設置

1.5.1 液相色譜條件

色譜柱：ODS-C18（2.1mm×150mm，5μm）；柱溫：40℃；進樣體積：10μL；流速：0.3mL/min；流動相A：乙腈（含0.1%乙酸）、B：10mmol/L乙酸銨溶液[10]。梯度洗脫條件見表1。

表1 梯度洗脫條件Table 1Condition of gradient elution

1.5.2 質(zhì)譜條件

離子源：正離子模式（ESI+）；離子化方式：電噴霧電離；CUR：30；CAD：3；IS：5500；TEM：400；GS1：50；GS2：50，多反應監(jiān)測條件見表2。

表2 多反應監(jiān)測條件Table 2Condition of MRM

2 結(jié)果與分析

2.1 標準溶液的線性關(guān)系和檢出限

以峰面積為縱坐標，以標準溶液濃度為橫坐標，計算線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)，得到檢出限，結(jié)果見表3。

表3 線性范圍和檢出限Table 3Linear range and detection limit of alkaloids of pericarpium papaveris

2.2 加標回收率

在酒樣中加入嗎啡、蒂巴因、罌粟堿、那可丁標準溶液分別使其最終濃度嗎啡為50、150、300ng/mL 3個水平濃度，蒂巴因、罌粟堿、那可丁為20、50、80ng/mL 3個水平濃度，每個濃度設定6個平行，在儀器最優(yōu)條件下測定，計算回收率和精密度，結(jié)果見表4。

表4 加標回收率及其相對標準偏差（n=6）Table 4Recoveries and relative standard deviation of samples（n=6）

2.3 精密度

表5 精密度（n=6）Table 5Precision of samples（n=6）

在空白樣品中加入標準溶液，使嗎啡最終濃度達到50、150、300ng/mL 3個水平，蒂巴因、罌粟堿、那可丁達到20、50、80ng/mL 3個水平，每個樣品進樣6次，計算RSD，結(jié)果見表5。

2.4 樣品檢測結(jié)果

將樣品按照前處理方法凈化后上機分析，結(jié)果均未檢出嗎啡、蒂巴因、罌粟堿、那可丁。未檢出的原因可能有以下幾個方面：本地零售店及各餐飲店進貨渠道正規(guī)，生產(chǎn)加工過程嚴格按照食品安全國家標準及食品安全法要求執(zhí)行，不存在違法添加行為；本次采購樣品主要集中在市區(qū)，各區(qū)縣尚未覆蓋到，樣本數(shù)需加大。

3 結(jié)論

本文建立了酒中嗎啡等四種罌粟殼生物堿的檢測方法，該方法具有前處理簡單，有機試劑消耗少，縮短檢測周期等優(yōu)點；通過驗證方法回收率、精密度等方面，證明該方法準確、可靠；同時也填補了酒中罌粟殼生物堿的檢測方法空白，為監(jiān)督檢驗工作提供了依據(jù)。

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Investigation of Alkaloids of Pericarpium Papaveris in Wines by LC-MS/MS

JING ZanLIU Chao
(Leshan Center for Food and Drug Control,Leshan 614000,China)

To develop a method for alkaloids of pericarpium papaveris(morphine,thebaine,papaverine and narcotine)in distilled wines and mixed wines by LC-MS/MS.The wines were separated in ODS-C18 column with acetonitrile-ammonium acetate solution after purificatied by PCX solid-phase extraction column.The data was quantified by external standard method under the positive ion mode.The limits of detection for morphine,thebaine,papaverine and narcotine were 20ng/mL, 5ng/mL,5ng/mL and 5ng/mL,the average recoveries between 91.1%～101.4%.This method was accurate and reliable with simple sample prepatation,and could be used for the determination of alkaloids of pericarpium papaveris in wines.

Wines;LC-MS/MS;alkaloids of pericarpium papaveris

book=22,ebook=28

TS207.3

A

1008-1038(2015)12-0022-04

2015-08-12

景贊（1985—），男，助理工程師，研究方向為食品安全及檢測