吳金斌，歐嘉文(北京大學(xué)深圳醫(yī)院檢驗(yàn)科，深圳 518036)

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·臨床探討·

VITROS5600分析儀檢測3項(xiàng)心肌損傷標(biāo)志物的性能評價

吳金斌，歐嘉文
(北京大學(xué)深圳醫(yī)院檢驗(yàn)科，深圳 518036)

目的 驗(yàn)證和評價化學(xué)發(fā)光法檢測心肌損傷標(biāo)志物肌鈣蛋白I(cTnI)、肌紅蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶質(zhì)量(CK-MBmass)的分析性能。方法 參考NCCLS發(fā)布的方法學(xué)評價系列文件，對強(qiáng)生VITROS5600分析儀免疫模塊化學(xué)發(fā)光法檢測心肌損傷標(biāo)志物3項(xiàng)的正確度、精密度、線性范圍和參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證與評價。結(jié)果cTnI、Myo和CK-MBmass正確度驗(yàn)證偏倚分別為-3.75%～4.58%、-4.10%～-1.04%和2.90%～1.63%，批內(nèi)精密度分別0.89%～3.33%、0.90%～0.94%和1.10%～1.74%，天間精密度分別為1.53%～6.45%、2.2%～2.80%和1.45%～2.06%，各項(xiàng)目呈一次性線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r)分別為0.999 2、0.998 6和0.999 0(P<0.05)；按性別分組驗(yàn)證各項(xiàng)目的參考區(qū)間，結(jié)果顯示大于95%的檢測值在廠家提供的生物參考區(qū)間范圍內(nèi)。結(jié)論 強(qiáng)生VITROS5600分析儀化學(xué)發(fā)光法檢測3項(xiàng)心肌損傷標(biāo)志物的主要分析性能達(dá)到了廠商聲明的性能和有關(guān)的質(zhì)量要求，能夠滿足臨床需要。

肌鈣蛋白I； 肌紅蛋白； 肌酸激酶同工酶質(zhì)量； 化學(xué)發(fā)光法； 性能評價

急性冠狀動脈綜合征(ACS)是由急性心肌缺血所致的以胸悶、胸痛為主要臨床表現(xiàn)的心血管疾病，它對患者的生命和健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅，早期診斷和及時治療是降低病死率和改善預(yù)后的關(guān)鍵。因此，快速、靈敏、準(zhǔn)確地檢測心肌損傷生化標(biāo)志物對于ACS的診療具有非常重要的意義[1]。為了向臨床提供準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果，本試驗(yàn)依照ISO15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》的要求[2]，參考美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)指南EP15-A2、EP5-A2、EP6-A2和C28-A2文件[3-6]，結(jié)合工作實(shí)際設(shè)計驗(yàn)證方案，對強(qiáng)生VITROS 5600分析儀化學(xué)發(fā)光法檢測肌鈣蛋白I(cTnI)、肌紅蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶質(zhì)量(CK-MB mass)的分析性能進(jìn)行驗(yàn)證和評價。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 試驗(yàn)血漿選取2014年8～9月北京大學(xué)深圳醫(yī)院住院患者符合試驗(yàn)要求且無溶血、黃疸、脂血的標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑 檢測系統(tǒng)使用強(qiáng)生公司VITROS 5600生化免疫分析儀及其配套試劑和校準(zhǔn)品。

1.3 方法

1.3.1 正確度驗(yàn)證 參照EP15-A2文件，對校準(zhǔn)后并且室內(nèi)質(zhì)控在控的試驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行非同一批次的定值校準(zhǔn)品(2份)和衛(wèi)生部臨檢中心發(fā)放2014年第1次心肌損傷標(biāo)志物的質(zhì)評樣品(5份)各測定2次，將測定均值與相應(yīng)校準(zhǔn)品標(biāo)定值、質(zhì)評靶值相比較，以相對偏差小于該項(xiàng)目臨檢中心質(zhì)評允許誤差范圍的1/2(<±15%)為可接受。

1.3.3 線性驗(yàn)證 參考 EP6-A2文件，設(shè)定各項(xiàng)目試驗(yàn)線性的允許誤差范圍為5.0%。分別收集cTnI、Myo、CK-MB mass各項(xiàng)目濃度接近廠商聲明分析測量范圍的下限和上限的低值標(biāo)本(L)和高值標(biāo)本(H)，然后按L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、H配制成6個系列濃度的標(biāo)本，按照從低濃度到高濃度順序測定1次，再從高濃度到低濃度順序測定1次，在重復(fù)測定誤差符合要求的條件下，進(jìn)行多項(xiàng)式回歸分析，將數(shù)據(jù)擬合為一次(Y=b0+b1X)、二次(Y=b0+b1X+b2X2)和三次(Y=b0+b1X+b2X2+b3X3)多項(xiàng)式，根據(jù)t值判斷擬合曲線的非線性系數(shù) (b2和b3)與 0的差異是否有統(tǒng)計學(xué)意義,如果非線性系數(shù)b2和b3與0比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，則認(rèn)為存在線性關(guān)系，否則該組數(shù)據(jù)存在非線性，則要進(jìn)行非線性度的評價。

1.3.4 參考區(qū)間驗(yàn)證 按NCCLS C28-A2推薦的方法，從2014年8～9月在本院體檢的人群中，選取年齡分布在18～70歲，排除心腦血管疾病，并且肝、腎功能正常的男性和女性健康體檢者血清標(biāo)本各20例，按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)要求在VITROS 5600分析儀上進(jìn)行心肌損傷標(biāo)志物3項(xiàng)的檢測，在分組統(tǒng)計中，有95%(≥19例)的檢測結(jié)果在廠商提供的參考區(qū)間內(nèi)即表明該參考區(qū)間適用于本實(shí)驗(yàn)室。

2 結(jié) 果

2.1 正確度驗(yàn)證結(jié)果 檢測cTnI、Myo、CK-MB mass的定值校準(zhǔn)品和衛(wèi)生部臨檢中心2014年第1次心肌損傷標(biāo)志物質(zhì)評樣品，分別將測定均值與標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定值和質(zhì)評靶值相比較。結(jié)果顯示，各項(xiàng)目各濃度水平的偏倚程度均小于臨檢中心質(zhì)評允許誤差范圍的1/2(<±15%),驗(yàn)證通過。見表1、2。

表1 檢測定值標(biāo)準(zhǔn)品正確度驗(yàn)證

表2 檢測質(zhì)評標(biāo)本正確度驗(yàn)證

2.2 精密度驗(yàn)證結(jié)果 3個項(xiàng)目低、高濃度標(biāo)本的批內(nèi)、天間不精密度驗(yàn)證結(jié)果見表3～5，各項(xiàng)目各濃度水平的批內(nèi)和天間精密度均小于廠商標(biāo)示的相應(yīng)濃度水平的CV值。

表3 cTnI批內(nèi)和天間精密度驗(yàn)證

表4 Myo批內(nèi)和天間精密度驗(yàn)證

2.3 線性驗(yàn)證結(jié)果 cTnI、Myo、CK-MB mass的線性范圍和6個系列濃度標(biāo)本重復(fù)測定結(jié)果均值見表6，經(jīng)計算重復(fù)檢測集合方差(SDr)分別為0.48%、0.28%、0.35%，小于實(shí)驗(yàn)室設(shè)定允許誤差范圍5.0%。SSPSS 19.0統(tǒng)計軟件多項(xiàng)式回歸數(shù)據(jù)擬合結(jié)果顯示，項(xiàng)目各指標(biāo)b2、b3與0比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，為一次線性；cTnI線性方程為Y=1.020 8X-0.624 2，R2=0.998 4(P<0.05)；Myo線性方程為Y=1.018 1X+1.228 5，R2=0.997 3(P<0.05)；CK-MB mass線性方程為Y=1.022 4X-2.138 9，R2=0.998(P<0.05)。各項(xiàng)目試驗(yàn)線性范圍與廠家聲明的線性范圍基本一致。

2.4 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果 依NCCLS C28-A2推薦的方法，驗(yàn)證現(xiàn)用廠家提供的生物參考區(qū)間，各項(xiàng)目參考區(qū)間及驗(yàn)證結(jié)果見表7，結(jié)果顯示在不同性別組各20例健康參考個體中，Myo的男性組有1例超出廠商提供的參考區(qū)間(126 ng/mL)，其余各項(xiàng)目各組驗(yàn)證結(jié)果均在廠商提供的參考區(qū)間內(nèi)，各項(xiàng)目參考區(qū)間驗(yàn)證符合率不低于95%，說明廠家提供的生物參考區(qū)間適合于本實(shí)驗(yàn)室使用。

表5 CK-MB mass批內(nèi)和天間精密度驗(yàn)證

表6 心肌損傷標(biāo)志物三項(xiàng)線性范圍及驗(yàn)證值(ng/mL)

表7 3項(xiàng)心肌損傷標(biāo)志物參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

3 討 論

對分析系統(tǒng)的主要檢測性能進(jìn)行驗(yàn)證，是保證檢驗(yàn)質(zhì)量的一個重要措施，也是《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》和醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室ISO15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》的要求。本研究對強(qiáng)生VITROS 5600分析儀檢測cTnI、Myo和CK-MB mass 3個項(xiàng)目的正確度、精密度、線性和參考范圍分別進(jìn)行了驗(yàn)證。

正確度是多次重復(fù)檢測所得量值的平均值與一個參考量值間的一致程度。通常用“偏移”(或偏倚)表達(dá)，是對系統(tǒng)誤差的衡量。本試驗(yàn)按照NCCLS EP15-A2文件執(zhí)行正確度驗(yàn)證，采用廠商提供的可溯源定值校準(zhǔn)品和衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心指定值的質(zhì)評物作為參考物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證。通常生化定量測定項(xiàng)目以美國臨床實(shí)驗(yàn)室修正法規(guī)(CLIA′88)允許總誤差的1/2作為允許偏倚[7]，由于CLIA′88中沒有對cTnI、Myo和CK-MB mass 3個項(xiàng)目的允許總誤差進(jìn)行規(guī)定，因此本試驗(yàn)以小于臨檢中心質(zhì)評允許誤差范圍的1/2作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

精密度是在規(guī)定條件下，對同一被測對象重復(fù)測量所得值間的一致程度，是對隨機(jī)誤差的衡量。檢測系統(tǒng)的精密度是所有分析性能評價的基礎(chǔ)，本試驗(yàn)采用EP5-A2文件驗(yàn)證廠商的精密度聲明，考慮到基質(zhì)效應(yīng)，每個驗(yàn)證項(xiàng)目均采用健康人低值新鮮混合血清稀釋高值樣品，配制濃度范圍包括了廠商聲明的濃度和醫(yī)學(xué)決定水平處的濃度。指定范圍的低濃度標(biāo)本的天間精密度水平反映了檢測系統(tǒng)的功能靈敏度，在cTnI、Myo和CK-MB mass參考范圍上限濃度處，天間精密度驗(yàn)證結(jié)果分別為 6.45%、2.80%、2.06%，符合準(zhǔn)則[8]和共識[9]中對參考范圍上限濃度處功能靈敏度的要求(cTnI 第99百分位值：0.034 ng/mL,CV≤10%；Myo第97.5百分位值：61.5 ng/mL,CV≤5.6%；CK-MB mass第97.5百分位值：61.5 ng/mL,CV≤9.3%)。

線性范圍即分析測量范圍(AMR)，是指標(biāo)本沒有經(jīng)過任何預(yù)處理(濃縮或稀釋)能夠直接測定出待測物的范圍，是反映方法學(xué)性能評價的重要指標(biāo)之一。本試驗(yàn)應(yīng)用NCCLS EP6-A2文件驗(yàn)證廠商聲明的AMR，分析6個基本覆蓋整個預(yù)期測量范圍的系列濃度標(biāo)本，在重復(fù)測量誤差符合試驗(yàn)要求的條件下(≤5.0%)進(jìn)行多項(xiàng)式回歸分析，驗(yàn)證結(jié)果顯示，各項(xiàng)目在試驗(yàn)所涉及的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

本試驗(yàn)按NCCLS C28-A2文件推薦的方法，每個項(xiàng)目按性別分為男、女兩組，各選取了20例符合試驗(yàn)要求的健康體檢者的血清標(biāo)本，驗(yàn)證了cTnI、Myo和CK-MB mass試劑說明書中廠商提供的參考區(qū)間。驗(yàn)證結(jié)果在Myo的男性組中僅有1例超出廠商提供的參考區(qū)間，各項(xiàng)目及其分組參考區(qū)間驗(yàn)證符合率均不低于95%，符合NCCLS C28-A2文件要求，判定廠家提供的生物參考區(qū)間適用于本實(shí)驗(yàn)室。

綜上所述，VITROS 5600分析儀檢測3項(xiàng)心肌損傷標(biāo)志物的主要分析性能驗(yàn)證結(jié)果與廠商聲明的性能參數(shù)基本一致，符合相關(guān)文件規(guī)定和質(zhì)量要求，能夠?yàn)榕R床提供準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果，對ACS的診斷和治療提供重要的參考信息。

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2015-01-13

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