王麗萍,劉玲玲,褚福祿,張炳昌(山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院檢驗(yàn)科，濟(jì)南 250021)

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·論 著·

Roche Cobas e411檢測(cè)心肌損傷標(biāo)志物和降鈣素原性能驗(yàn)證*

王麗萍,劉玲玲,褚福祿,張炳昌△
(山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院檢驗(yàn)科，濟(jì)南 250021)

目的 驗(yàn)證Roche Cobas e411電化學(xué)發(fā)光免疫分析法(ECLIA)檢測(cè)心肌損傷標(biāo)志物超敏肌鈣蛋白T(hs-cTnT)、肌酸激酶同工酶質(zhì)量(CK-MB mass)、肌紅蛋白(MYO)、腦利鈉肽前體氨基末端(NT-proBNP)和降鈣素原(PCT)的分析性能。方法 參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)相關(guān)文件，對(duì)Cobas e411檢測(cè)hs-cTnT、CK-MB mass、MYO、NT-proBNP和PCT的準(zhǔn)確度、精密度、攜帶污染率、線性范圍進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果 按照EP9-A2、EP5-A2、EP7-A2、EP6-A2文件要求驗(yàn)證得到各檢測(cè)項(xiàng)目精密度的變異系數(shù)(CV)均小于3%，攜帶污染率小于0.1%；所驗(yàn)證項(xiàng)目的相關(guān)系數(shù)(r)>0.99；驗(yàn)證hs-cTnT的功能靈敏度為3 pg/mL；與廠家聲明一致。結(jié)論 Roche Cobas e411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)心肌損傷標(biāo)志物和PCT的主要分析性能與廠家聲明一致，適用于臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室用于這些項(xiàng)目的檢測(cè)。

降鈣素原； 超敏肌鈣蛋白T； 肌酸激酶同工酶質(zhì)量； 肌紅蛋白； 腦利鈉肽前體氨基末端

電化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECLIA)是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫、化學(xué)發(fā)光免疫之后的新一代免疫標(biāo)記測(cè)定技術(shù)，其原理是采用雙抗體夾心法，將形成的抗原抗體復(fù)合物通過生物素與鏈霉素親和素間的反應(yīng)結(jié)合到磁性微粒上，在測(cè)量池中磁性微粒(帶電荷的三聯(lián)吡啶釕)通過磁鐵吸附到電極上，經(jīng)清洗電極加電壓產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，光電倍增管將其測(cè)定到的發(fā)光強(qiáng)度自動(dòng)對(duì)應(yīng)到標(biāo)準(zhǔn)曲線得出結(jié)果。根據(jù)ISO:15189[1](CNAS-CL02，2012)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的條款要求和《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》[2]的要求，為了保證檢驗(yàn)質(zhì)量，本文參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)相關(guān)文件EP9-A2[3]、EP5-A2[4](EP15-A2[5])、EP6-A2[6]等的要求，在新引入儀器設(shè)備或開展新項(xiàng)目或每年需要對(duì)儀器設(shè)備的性能進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，包括準(zhǔn)確度、精密度、攜帶污染率、線性范圍等方面。按照實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化管理的要求，本科對(duì)Cobas e411所開展的超敏肌鈣蛋白T(hs-cTnT)、肌酸激酶同工酶質(zhì)量(CK-MB mass)、肌紅蛋白(MYO)、腦利鈉肽前體氨基末端(NT-proBNP)和降鈣素原(PCT)5個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行了方法學(xué)性能驗(yàn)證?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器 Cobas e411全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀，來自美國(guó)Roche公司。

1.2 試劑 Roche 原裝試劑：hs-cTnT (批號(hào)17949102)、CK-MB mass (批號(hào)17690701)、MYO (批號(hào)17695501)、NT-proBNP (批號(hào)17804801)和PCT (批號(hào)17764104)；心肌質(zhì)控品(批號(hào)17458902)、hs-cTnT質(zhì)控品(批號(hào)17296804)、PCT質(zhì)控品(批號(hào)17764104)。

1.3 標(biāo)本來源 收集50例標(biāo)本，來自2014年6月山東省立醫(yī)院門診患者，溶血、黃疸、脂血等標(biāo)本剔除，均經(jīng)Cobas e411測(cè)定了hs-cTnT、CK-MB mass、MYO、NT-proBNP和PCT，用于線性驗(yàn)證，上述所有標(biāo)本均為常規(guī)檢測(cè)的剩余標(biāo)本，本研究不采集與患者隱私相關(guān)的任何醫(yī)療信息。

1.4 方法

1.4.2 測(cè)定線性范圍 根據(jù)EP6-A2和EP7-A2文件將接近分析儀檢測(cè)上限的高值標(biāo)本和檢測(cè)下限的低值標(biāo)本混合成，6個(gè)不同濃度的標(biāo)本，濃度分別為100%低值，80%低值+20%高值，60%低值+40%高值，40%低值+60%高值，20%低值+80%高值，100%高值?；旌虾髮⒏鳚舛葮?biāo)本分別測(cè)定3次后取均值定為預(yù)期值，采用直線回歸方程進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，直線回歸方程為Y=aX+b，要求a值在0.97～1.03、r≥0.975。

1.4.3 攜帶污染率 根據(jù)EP10-A2文件要求，選取一份接近分析儀檢測(cè)上限的高濃度標(biāo)本(H)和一份檢測(cè)下限的低濃度標(biāo)本(L)，按國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)制定的程序，將高值標(biāo)本連續(xù)測(cè)定3次(H1、H2、H3)，緊接著連續(xù)測(cè)定低值標(biāo)本3次(L1、L2、L3)，攜帶污染率計(jì)算公式為[(L1-L3)/(H3-L3)]×100%，攜帶污染率小于0.5%為合格。

1.4.4 測(cè)定功能靈敏度 檢測(cè)低限驗(yàn)證：以日內(nèi)重復(fù)CV為20%時(shí),對(duì)應(yīng)檢測(cè)限樣品具有的平均濃度，確定為檢測(cè)系統(tǒng)或方法可定量報(bào)告分析物的最低濃度的限值，可用來證明測(cè)量范圍最低限值的可重復(fù)性。取已知濃度的患者標(biāo)本進(jìn)行稀釋，連續(xù)檢測(cè)，最少20次，根據(jù)批間CV≤20%時(shí)的最大稀釋管濃度作為功能靈敏度。本實(shí)驗(yàn)室所開展項(xiàng)目中肌鈣蛋白T屬于超敏系列，根據(jù)臨床實(shí)際需要，只驗(yàn)證hs-cTnT的功能靈敏度。

2 結(jié) 果

2.1 準(zhǔn)確度結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)室參加2014年衛(wèi)生部臨檢中心心肌標(biāo)志物和NT-proBNP的室間質(zhì)評(píng)，各項(xiàng)目質(zhì)評(píng)結(jié)果得分均為100%，當(dāng)前性能解釋為“滿意”，累計(jì)性能解釋為“成功”。PCT參加了2014年朗道RIQAS的immunoassayspeciality1 全球室間質(zhì)評(píng)，12次的結(jié)果均為滿意。

2.2 精密度結(jié)果hs-cTnT、CK-MBmass、MYO、NT-proBNP和PCT5個(gè)項(xiàng)目的精密度結(jié)果如表1所示。

表1 精密度統(tǒng)計(jì)結(jié)果(%)

注：廠方說明書的精密度是按NCCLS的EP5-A2執(zhí)行，采用標(biāo)準(zhǔn)血漿，兩個(gè)濃度水平，每天分別測(cè)定4次，連續(xù)測(cè)定21d。本科室按照實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證的NCCLS-EP5-A2(兩個(gè)濃度水平，每天分別測(cè)定2次或4次，連續(xù)測(cè)定10d或5d)和EP15-A2(兩個(gè)濃度水平，每天分別測(cè)定3次，連續(xù)測(cè)定5d)文件，但EP15-A2驗(yàn)證結(jié)果都偏大于廠商說明，而EP5-A2驗(yàn)證結(jié)果都符合廠商說明。因此，建議實(shí)驗(yàn)室按照EP5-A2文件驗(yàn)證。

2.3 線性范圍驗(yàn)證 經(jīng)計(jì)算得BNP、PCT、MYO、CK-MB、hs-cTnT的回歸系數(shù)分別為0.986 0、0.985 6、1.001 0、0.994 6、1.015 1，r為0.994 1、0.999 4、0.999 9、0.999 6、0.996 1。以BNP項(xiàng)目為例，統(tǒng)計(jì)和分析結(jié)果見表2、圖1。

表2 BNP線性統(tǒng)計(jì)結(jié)果(pg/mL)

2.4 攜帶污染率 經(jīng)統(tǒng)計(jì)得BNP、PCT、MYO、CK-MB、Hs-cTnT的攜帶污染率分別為0.00%、0.00%、0.06%、0.01%、0.02%。以BNP項(xiàng)目為例，攜帶污染率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3。

2.5 功能靈敏度驗(yàn)證 經(jīng)驗(yàn)證，hs-cTnT檢測(cè)靈敏度為3pg/mL,日內(nèi)重復(fù)CV%為18.33%<20%，與試劑說明書要求符合，驗(yàn)證合格。

圖1 BNP的線性分析圖

項(xiàng)目高值測(cè)定結(jié)果H1H2H3低值測(cè)定結(jié)果L1L2L3高值干擾L1-L3低值干擾H3-L3BNP3181432260319737．537．398．63-1．2431964．37

根據(jù)攜帶污染率計(jì)算公式計(jì)算：(L1-L3)/ (H3-L3)×100%=1.24/31 964.37×100%=0.00%。

3 討 論

RocheCobase411分析儀是應(yīng)用ECLIA的原理[7]進(jìn)行腫瘤標(biāo)志物、甲狀腺功能、激素、心肌標(biāo)志物等檢測(cè)，其通過羅氏封閉檢測(cè)系統(tǒng)來完成對(duì)各檢測(cè)項(xiàng)目的檢測(cè)，說明書中提供的所有參數(shù)都是廠家在國(guó)外的最佳條件下完成的，這與本科室的水質(zhì)、電壓的穩(wěn)定性、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度、實(shí)驗(yàn)室操作人員的素質(zhì)等實(shí)際的外部條件存在差異，因此，對(duì)本科在Cobase411上開展的hs-cTnT、CK-MBmass、MYO、NT-proBNP和PCT共5個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行了的方法學(xué)性能驗(yàn)證。

3.1 精密度 由表1可以看出，按照NCCLS的EP5-A2文件所有5個(gè)項(xiàng)目的批內(nèi)及批間精密度都能滿足廠家聲明的性能，與蘇維等[8]結(jié)論一致，但與楊蘋等[9]的結(jié)論不一致，可能與檢測(cè)項(xiàng)目不同，試劑盒性能也有差異有關(guān)。按照EP15-A2驗(yàn)證的精密度不能滿足廠家聲明的性能，與歐陽能良等[10]結(jié)論相似。因此，建議實(shí)驗(yàn)室按照EP5-A2文件驗(yàn)證。通過驗(yàn)證結(jié)果可以看出，在精密度驗(yàn)證上，CK-MBmass驗(yàn)證結(jié)果偏差最大，可能與CK-MB屬于酶類，易受很多因素影響而活性改變有關(guān)，而本試驗(yàn)驗(yàn)證過程使用的非同一試劑盒，該試劑的瓶間差較其他4種試劑偏大。

3.2 線性范圍 由表2可以看出，本研究驗(yàn)證的5個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的線性范圍與廠家聲明的一致，與蘇維等[8]結(jié)論一致。

3.3 攜帶污染Cobase411在加入標(biāo)本和試劑前，會(huì)自動(dòng)沖洗加樣針，且標(biāo)本檢測(cè)時(shí)，一個(gè)標(biāo)本一個(gè)吸頭，一個(gè)項(xiàng)目一個(gè)杯子，攜帶污染率低及抗干擾能力強(qiáng)，由表3可以看出，本次驗(yàn)證的5個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目與廠家聲明的一致，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

3.4 功能靈敏度 根據(jù)臨床實(shí)際應(yīng)用需要，本研究只進(jìn)行了hs-cTnT功能靈敏度的驗(yàn)證，結(jié)果與廠家聲明的一致。Rochecobase411是全自動(dòng)、隨機(jī)的異相免疫分析系統(tǒng)。該系統(tǒng)采用最先進(jìn)的電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù),具有高靈敏度、高特異性、高親和力、高準(zhǔn)確度、線性范圍寬、自動(dòng)化程度高、無放射線污染、操作簡(jiǎn)便快速等特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示RocheCobase411全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)hs-cTnT、CK-MBmass、MYO、NT-proBNP和PCT的主要分析性能良好，與廠家聲明一致，能夠滿足臨床檢測(cè)的性能要求，適用于臨床標(biāo)本的檢測(cè)。

[1]ISO15189.Medicallaboratories-Requirementsforqualityandcompetence[S].Geneva,Switzerland：InternationalOrganizationforStandardizaion,2012.

[2]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法[S].2006-02-27.

[3]NCCLS.EP9-A2.Methodcomparisionandbiascitimationusingpatientsamples.ApprovedGuideline-secondedition[S].Wayne，PA，USA：NCCLS，2002.

[4]NCCLS.EP5-A2.Evaluationofprecisionperformanceofquantitativemeasurementmethods;approvedguideline-secondedition[S].Wayne,PA,USA:NCCLS,2004.

[5]CLSI.EP15-A2.Userverificationofperformanceforprecisionandtrueness;approvedguideline-secondedition[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2005.

[6]NCCLS.EP6-A2.Evaluationofthelinearityofquantitativemeasurementprocedures[S].Wayne,PA,USA:NCCLS，2003.

[7]董偉.新型的電化學(xué)發(fā)光免疫分析及臨床應(yīng)用[M].標(biāo)記免疫分析與臨床，2001,8(1):31-32.

[8]蘇維,李明,王淑仙,等.羅氏CobasE601檢測(cè)糖原抗原的方法學(xué)性能評(píng)價(jià)[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(6)：716-718.

[9]楊蘋,周愛娥,張莉萍,等.羅氏MODULARE170全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀性能驗(yàn)證[J].重慶醫(yī)學(xué)，2013,38(19)：2395-2397.

[10]歐陽能良,王偉佳,李飛,等.應(yīng)用CLSIEP15-A2文件評(píng)價(jià)BNP和NT-proBNP的精密度性能[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011,32(5)：538-540.

Performance verification of Roche Cobas e411 ECLIA analyzer in detecting biomarkers of myocardial injury and PCT*

WANGLi-ping,LIULing-ling,CHUFu-lu，ZHANGBing-chang△
(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedProvincialHospital,ShandongUniversity,Jinan,Shandong250021,China)

Objective To verify the analytical performance of the electrochemiluminescence immunoassay (ECLIA) system in the Roche Cobas e411 analyzer for detecting hs-cTnT,CK-MB mass,MYO,NT-proBNP and PCT.Methods The accuracy,precision,contamination carryover rate and linear range of ECLIA system in the detection of hs-cTnT，CK-MB mass，MYO,NT-proBNP and PCT were analyzed according to the NCCLS evaluation protocols related guidelines.Results CV of precision of each item was all less than 3% according to the requirements of EP9-A2,EP5-A2,EP7-A2 and EP6-A2 documents.The contamination carryover rate of each item was less than 0.1%.rof each item was more than 0.99.The functional sensitivity of hs-cTnT was 3 pg/mL,which was consistent with manufacturer′s claim.Conclusion The main analytical performance of the Roche Cobas e411 analyzer in the detection of hs-cTnT，CK-MB mass，MYO,NT-proBNP and PCT is consistent with manufacturer′s claim,applicable to clinical laboratory routine testing.

myocardial injury biomarkers; PCT; performance verification

山東省臨床重點(diǎn)?？平ㄔO(shè)項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)資助項(xiàng)目(魯衛(wèi)醫(yī)字[2013]26號(hào))。

王麗萍，女，檢驗(yàn)師，本科，主要從事臨床檢驗(yàn)工作?！?/p>

，E-mail:707154036@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.21.006

A

1672-9455(2015)21-3147-03

2015-03-13

2015-08-17)