駱向麗，付樂凡，付 斌，時(shí)志民，肖艷莉，孫冬霞，席 豐，沈艷峰，王 蕾

(1. 河北省曲周縣婦幼保健院，河北 曲周 057250；2. 河北工程大學(xué),河北 邯鄲 055901；3. 河北省邯鄲市婦幼保健院,河北 邯鄲 055902)

磷酸化ERK-1及磷酸化AKT在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)及意義

駱向麗1，付樂凡2，付 斌2，時(shí)志民2，肖艷莉2，孫冬霞3，席 豐2，沈艷峰2，王 蕾2

(1. 河北省曲周縣婦幼保健院，河北 曲周 057250；2. 河北工程大學(xué),河北 邯鄲 055901；3. 河北省邯鄲市婦幼保健院,河北 邯鄲 055902)

目的 觀察子宮內(nèi)膜癌組織中磷酸化ERK-1(P-ERK-1)及磷酸化AKT(P-AKT)表達(dá)情況。方法 采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測78例子宮內(nèi)膜癌組織、40例正常子宮內(nèi)膜組織中P-ERK-1和P-AKT的表達(dá)情況。結(jié)果 子宮內(nèi)膜癌組織中P-ERK-1和P-AKT表達(dá)定位于細(xì)胞核和細(xì)胞膜，其表達(dá)率分別為74%(58/78)和77%(60/78)，明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織(P均<0.05)；子宮內(nèi)膜癌組織中，P-ERK-1和P-AKT蛋白在組織學(xué)分級(jí)G2、G3級(jí)及病理分期Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ期的表達(dá)率分別高于G1級(jí)和Ⅰ期(P均<0.05)，與肌層浸潤程度有關(guān)(P<0.05);P-ERK-1表達(dá)與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理組織類型無關(guān)(P均>0.05);P-AKT與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與病理組織類型無關(guān)(P>0.05)；相關(guān)性分析顯示，二者之間呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 P-ERK-1和P-AKT在子宮內(nèi)膜癌組織中過度表達(dá)，與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

子宮內(nèi)膜腫瘤；磷酸化ERK-1；P-AKT；免疫組化

子宮內(nèi)膜癌為女性常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于宮頸癌。目前子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生原因不明，但其發(fā)病率呈上升和年輕化趨勢[1-2]，可能由于生活水平提高，肥胖人群、高血壓人群、糖尿病人群增多，還有未孕產(chǎn)人群增多，導(dǎo)致該病具有發(fā)病率高、晚期治愈率低的特點(diǎn)，應(yīng)積極預(yù)防，做到早發(fā)現(xiàn)、早治療?？紤]到子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟、多階段、復(fù)雜的生物學(xué)過程，受細(xì)胞內(nèi)多個(gè)腫瘤相關(guān)基因的調(diào)控，包括多種信號(hào)通路的建立，這些通路上有特有的基因蛋白控制，其中ERK-1是MAPK通路，AKT是PI3K/AKT通路中關(guān)鍵分子。本研究通過檢測正常子宮內(nèi)膜組織、子宮內(nèi)膜癌組織中P-ERK-1和P-AKT蛋白表達(dá)情況，分析了二者在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，旨在為臨床早期發(fā)現(xiàn)、治療該病提供科學(xué)依據(jù)。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取2010年1月—2013年12月邯鄲市婦幼保健院收治子宮內(nèi)膜癌手術(shù)切除標(biāo)本78例，術(shù)前均未行放、化療及激素治療。年齡49～71歲，平均59.34歲；臨床病理分期:Ⅰ期20例，Ⅱ期31例，Ⅲ期15例，Ⅳ期12例；組織分級(jí):G1級(jí)39例，G2級(jí)23例，G3級(jí)16例；病灶局限于黏膜層及浸潤≤1/2肌層50例，浸潤>1/2肌層28例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例；腺癌59例，非腺癌19例。另取子宮肌瘤或子宮脫垂等手術(shù)切除子宮正常內(nèi)膜標(biāo)本40例，年齡50～67歲，平均58.65歲。標(biāo)本均通過病理科制作成病理蠟塊，并由經(jīng)驗(yàn)豐富的病理診斷醫(yī)師對(duì)每一例標(biāo)本進(jìn)行重新診斷。

1.2試劑與方法 采用常規(guī)免疫組化試劑盒、二硝基聯(lián)苯胺(DAB) 顯色劑，以S-P方法嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。子宮內(nèi)膜癌和正常子宮內(nèi)膜均用試劑P-ERK-1和P-AKT為一抗，選取陽性表達(dá)乳腺癌組織切片作為陽性對(duì)照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3結(jié)果判斷 P-ERK-1陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核，P-AKT陽性表達(dá)定位于細(xì)胞漿。陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：參照Parenti等[3]的標(biāo)準(zhǔn)，每張組織切片均隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(×400)，鏡下觀察在細(xì)胞核或胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號(hào)。陽性細(xì)胞數(shù)<5%為陰性，5%～25%為弱陽性(+)，25%～50%為陽性()，>50%為強(qiáng)陽性()，(+)～()視為陽性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)。相互關(guān)系用等級(jí)相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1P-ERK-1和P-AKT在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況 正常子宮內(nèi)膜組織中P-ERK-1蛋白表達(dá)陽性8例(20%)，P-AKT蛋白表達(dá)陽性4例(15%)；子宮內(nèi)膜癌組織中P-ERK-1蛋白表達(dá)陽性58例(74%)，P-AKT蛋白表達(dá)陽性60例(77%)。兩者比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。子宮內(nèi)膜癌中P-ERK-1及P-AKT的表達(dá)情況見圖1和圖2。

圖1 子宮內(nèi)膜癌中P-ERK-1的表達(dá)

2.2P-ERK-1和P-AKT在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 不同組織學(xué)分級(jí)、病理分期、黏膜層浸潤情況與P-ERK-1表達(dá)有相關(guān)性(P<0.05)。不同組織學(xué)分級(jí)、病理分期、黏膜層浸潤、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移與P-AKT表達(dá)有相關(guān)性(P<0.05)。見表1。

圖2 子宮內(nèi)膜癌中P-AKT的表達(dá)

表1 P-ERK-1和P-AKT在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 例

注：①與G1比較；②與Ⅰ期比較。

2.3P-ERK-1和P-AKT在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)相關(guān)性分析 P-ERK-1和P-AKT在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)，共同陽性48例，共同陰性8例，二者表達(dá)呈明顯正相關(guān)(r=0.236，P=0.038)，表明二者在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中起到協(xié)同作用。

3 討 論

腫瘤分子靶向治療作為一種有的放矢的治療方法為腫瘤治療指明了方向[4]，原因是它以腫瘤細(xì)胞的特性為靶點(diǎn)，真正減少對(duì)正常細(xì)胞的毒副作用，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在腫瘤分子靶向治療已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，其中Ras/Raf/MEK/ERK 和磷脂酞肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K/AKT) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在臨床上研究較多，ERK和AKT是這兩條通路的重要激酶，它們處于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的樞紐位置，可以作為Ras/Raf/MEK/ERK通路和PI3K/AKT通路信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中有效的靶點(diǎn)。本研究通過研究子宮內(nèi)膜癌中活化后ERK和AKT表達(dá)情況，探討子宮內(nèi)膜癌中靶向治療的可行性。

Ras/Raf/MEK/ERK級(jí)聯(lián)信號(hào)通路是絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)通路，MAPK是細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，活化前位于胞漿，一旦活化即進(jìn)入核內(nèi)激活靶基因。目前發(fā)現(xiàn)的MAPK信號(hào)通路有ERK、JNK、BMK及P38MAPK4條，其中ERK途徑是一條主要和經(jīng)典的且與人類癌癥關(guān)系最為密切的途徑[5]。ERK-1作為MAPK通路中的代表激酶，可經(jīng)外界刺激被激活為P-ERK，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長、發(fā)育、分化、分裂等多種生理過程，也可促進(jìn)多種癌基因及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡[6]。臨床免疫組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn)P-ERK 在胃癌、肝癌、結(jié)腸癌、直腸癌、口腔鱗狀上皮癌和小細(xì)胞肺癌中表達(dá)與其進(jìn)展相關(guān)聯(lián)[7-11]。本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中P-ERK-1蛋白表達(dá)高于正常子宮內(nèi)膜組織，并且P-ERK-1表達(dá)與病理分期、浸潤深度及組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理組織類型無關(guān)，提示P-ERK-1的過度表達(dá)使MAPK通路在子宮內(nèi)膜癌中被激活。

AKT是PI3K/AKT通路中的關(guān)鍵分子，激活后的AKT(P-AKT)在腫瘤細(xì)胞惡性增殖、血管新生和轉(zhuǎn)移中起著重要作用，在國外被視為癌細(xì)胞存活的首要通路[12]。生理狀態(tài)下，AKT以低活性/失活狀態(tài)存在于細(xì)胞漿，受到刺激后,其發(fā)生磷酸化而被激活，且底物呈多樣性，說明其作用廣泛。研究表明，肝癌、前列腺癌、結(jié)腸直腸癌、濾泡狀甲狀腺癌和肺癌中，P-AKT呈持續(xù)高度活化[13-15]，而且P-AKT的高表達(dá)在促進(jìn)細(xì)胞生長、增殖，促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、侵襲，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)血管生成，抵抗化療和放療中起核心作用[16]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌組織中P-AKT陽性表達(dá)率高于正常子宮內(nèi)膜組織，表明P-AKT與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生有關(guān)。且組織學(xué)分級(jí)較高、肌層浸潤較深、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者P-AKT表達(dá)相應(yīng)增高，這與在卵巢癌[17]和非小細(xì)胞肺癌[18]中的研究結(jié)果一致，P-AKT可促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的進(jìn)展。AKT為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物研究正在蓬勃發(fā)展，如perifosine能夠抑制AKT的膜轉(zhuǎn)位，并可以通過降低AKT的活性抑制腫瘤細(xì)胞的生長，是有開發(fā)前景的化合物，可以成為更有效的抗癌藥物。

P-ERK-1和P-AKT在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)呈明顯正相關(guān)，MAPK通路和PI3K/AKT通路控制著腫瘤發(fā)生發(fā)展中眾多重要的環(huán)節(jié)，包括細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄、代謝、新生毛細(xì)血管以及細(xì)胞周期的調(diào)控，抑制這兩條信號(hào)通路成為腫瘤預(yù)防和腫瘤靶向治療的關(guān)鍵，監(jiān)測P-ERK 和P-AKT的表達(dá)情況，可為將來以AKT和ERK為靶點(diǎn)的藥物在子宮內(nèi)膜癌治療中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

[1] 曾艷華. 子宮內(nèi)膜癌患者的危險(xiǎn)因素Logistic回歸分析[J]. 中國婦幼保健,2012,35(27):5691-5694

[2] 李小毛,劉繼紅,何勉,等. 年輕婦女子宮內(nèi)膜癌626例臨床分析[J]. 實(shí)用婦產(chǎn)科雜志,2012,28(7):541-545

[3] Parenti A,Leo G,Porzionato A,et al. Expression of survivin,p53,and caspase 3 in Barrett’s esophagus carcinogenesis[J]. Hum Pathol,2006，37:16-22

[4] 邱春萍,姜潔. 子宮內(nèi)膜癌的分子機(jī)制和靶向治療進(jìn)展[J]. 婦產(chǎn)與遺傳,2013,3(1):31-35

[5] 鮑偉,蔡斌,楊懿霞,等. 子宮內(nèi)膜癌中ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與雌、孕激素受體的相關(guān)性[J]. 上海交通大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2009,29(1):5-8

[6] Rice PL,Goldberg RJ,Ray EC,et al. Inhibition of extracellular signal-regulated kinase 1/2 phosphorylation and induetion of apotosis by sulindac metabolites[J]. Caneer Res，2001，61(4):1541-1547

[7] 王琦,梁濤,張更棉. ERK-1及相關(guān)蛋白在胃癌中的表達(dá)及相關(guān)性分析[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2013,22(9):916-918

[8] 吳小琴,楊輝,鐘赟,等. 芬維A胺通過抑制ERK-1活化促進(jìn)人肝癌細(xì)胞凋亡[J]. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(18):3006-3008

[9] 馬廣友,朱志圖,陳明子,等. 17-AAG通過抑制ERK信號(hào)通路增強(qiáng)奧沙利鉑誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡[J]. 腫瘤防治研究,2013,40(8):752-757

[10] Lioni M,Noma K,Snyder A,et al. Bortezomib induces apoptosis in esophageal squamous cell carcinoma cells through activation of thep38 mitogen-activated protein kinase pathway[J]. Mol Cancer Ther,2008,7(9):2866-2875

[11] Xie JJ,Xu LY,Xie YM,et al. Roles of ezrin in the growth and invasiveness of esophageal squamous carcinoma cells[J]. Int J Cancer,2009,124(11):2549-2558

[12] 黃海輝,梁后杰,胡紹毅,等. 磷脂酰肌醇3激酶信號(hào)通路影響凋亡在肺腺癌A549細(xì)胞群集耐藥中的作用[J]. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2004,26(9):756-760

[13] Ruggeri BA,Huang L,Wood M,et al. Amplification and overex-pression ofthe AKT2 oncogenein asubsetofhuman pancreatic ductaladenocarcinomas[J]. Molcarcinog,1998,21(2):81-86

[14] Yuan ZQ,Sun M,Feldman RI,et al. Frequent activation of AKT2 and in duction of apoptosis by in hibition of phos phoino sitide-3-OH kinase/Akt pathway in human ovarian cancer[J]. Oncogene,2000,19(19):2324-2330

[15] Roy HK,Olusola BF,Clemens DL,et al. AKT proto-oncogene overexpression is an early event during aporadic colon carcinogenesis[J]. Carcinogenesis,2002,23(1):201-205

[16] Dicholson KM,Anderson NG. The protein kinase B/Akt signaling pathy in human maliganacy[J]. Cell Signal,2002,14(5):381-395

[17] 喬玉環(huán),程佳,郭瑞霞. 卵巢上皮性癌組織中磷酸化蛋白激酶B和PTEN蛋白的表達(dá)及其意義[J]. 中華婦產(chǎn)科雜志,2007,42(5):32-35

[18] Tang JM,He QY,Guo RX,et al. Phosphorylated Akt overexpression and loss of PTEN expression in non-small cell lung cancer confers poor prognosis[J]. Lung Cancer,2006,51(2):181-186

Expression and significance of ERK-1 and AKT in human endometrial carcinoma

LUO Xiangli1,FU Lefan2,FU Bin2,SHI Zhimin2,XIAO Yanli2,SUN Dongxia3,XI Feng2,SHEN Yanfeng2,WANG Lei2

(1.Maternal and Child Health Hospital of Quzhou, Quzhou 057250, Hebei, China; 2.Medical College of Hebei University of Engineering, Handan 055901, Hebei, China；3.Handan City Maternal and Child Health Hospital, Handan 055902, Hebei,China)

Objective It is to investigate the expressions of ERK-1(P-ERK-1) and AKT(P-AKT) in human endometrial carcinoma. Methods Using SP immunohistochemistry method, the expression of P-ERK-1 and P-AKT in the specimens of 78 cases with endometrial carcinoma and 40 cases with normal endometrium were determined. Results The expressions of P-ERK-1 and P-AKT in human endometrial carcinoma were located with the nucleus and the cell membrane. The positive expression rates were 74%(58/78) and 77%(60/78) respecitively, which were significantly higher than that in normal tissue (P<0.05). In the tissue of endometrial carcinoma,the expression of P-ERK-1 and P-AKT inmoderatelypoorly differentiated(G2-G3) and stageⅡ～Ⅲcases was significantly higher than that in well differentiated (G1) and stageⅠcases(P<0.05), and were related with myometrial invasion(P<0.05), and they were not related with pathology pattern of organization(P>0.05); they were positively correlated with each other (P<0.05). Conclusion P-ERK-1 and P-AKT were highly expressed in the endometrial cancinoma and their expressions were related with the development and the metastasis of this cancer.

endometrial carcinoma; P-ERK-1；P-AKT;immunohistochemistry

駱向麗，女，主治醫(yī)師，研究方向?yàn)閶D科疾病診斷及治療。

時(shí)志民，E-mail:shizhimin1980@163.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.08.008

R737.33

A

1008-8849(2015)08-0820-03

2014-10-08