黃文明，尕松代吉，李增魁

（1.青海省同德縣畜牧獸醫(yī)工作站，青海 同德813200 ；2.青海省玉樹州畜牧獸醫(yī)工作站，青海 玉樹 815000；3.青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，青海 西寧 810016）

布魯菌?。˙rucellosis）簡稱“布病”，是由布魯菌（Brucella spp）引起的以家畜為主要傳染源的人畜共患傳染病。本病呈世界范圍流行，在全球的200 多個(gè)國家和地區(qū)中，大約170 多個(gè)國家和地區(qū)報(bào)告了人、畜間布魯菌病不同程度的流行，給畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來嚴(yán)重危害并嚴(yán)重威脅人類健康。布魯菌病呈人、畜雙重性危害，對于家畜生產(chǎn)來說，主要表現(xiàn)為產(chǎn)肉、產(chǎn)奶、使役能力降低等生產(chǎn)性能損害；同時(shí)還直接影響家畜優(yōu)良品種的改良和推廣，感染家畜表現(xiàn)為流產(chǎn)、不孕、空懷、繁殖力降低、仔畜存活率降低，從而致使牲畜的數(shù)量減少[2]。人的感染途徑主要因吃未煮熟的肉、奶或接觸染有布魯菌的畜產(chǎn)品所致；此外，人感染該病后常因誤診而轉(zhuǎn)為慢性，反復(fù)發(fā)作長期不愈，影響身體健康[1-3]。

布魯菌病曾猖獗一時(shí)，然而由于世界各國均采取了有力的防制措施，截至20 世紀(jì)80 年代布魯菌病疫情已經(jīng)趨于平穩(wěn)，甚至美國、瑞典、丹麥等國家和地區(qū)達(dá)到消除的狀態(tài)。我國的人畜布魯菌病疫情于20 世紀(jì)80 年代末期下降到有史以來的最低點(diǎn)，且北京市、天津市、上海市、陜西省、遼寧省、吉林省、寧夏回族自治區(qū)和甘肅省等8 個(gè)省市區(qū)先后達(dá)到我國規(guī)定的人畜布魯菌病控制標(biāo)準(zhǔn)[2]。然而出乎意料的是自20 世紀(jì)90 年代開始，我國人畜布魯菌病疫情開始逐年上升，特別是在1995 年后幾乎所有的過去有布魯菌病流行的省區(qū)皆出現(xiàn)了疫情反彈，在東北和西北的近10個(gè)省區(qū)內(nèi)尤為突出[3]。據(jù)衛(wèi)生部2011 年報(bào)告，人布魯菌病發(fā)病數(shù)38 151 例，相比2010 年增加12.45%，有逐年上升趨勢，且動物發(fā)病數(shù)更達(dá)到驚人數(shù)目，這給人類健康和畜牧業(yè)帶來嚴(yán)重危害和造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此我國的布魯菌病現(xiàn)況與結(jié)核病相似，均被列為再度肆虐的傳染病。青海省地處我國西北地區(qū)，畜牧業(yè)生產(chǎn)條件得天獨(dú)厚，全省牧區(qū)均以草原牧業(yè)為主，擁有較大的牛羊存欄量，同時(shí)由于牛布魯菌病疫情又有上升趨勢，因此進(jìn)行布魯菌病的流行病學(xué)調(diào)查和防制措施分析研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料與方法

1.1 血液樣本采集 2012 年5 月至2013 年8 月選取青海省海西蒙古族藏族自治州（HX）、海南藏族自治州（HAN）、黃南藏族自治州（HUN）、果洛藏族自治州（GL）和玉樹藏族自治州（YS）5 個(gè)市縣的大型牛場、規(guī)?；B(yǎng)殖戶及農(nóng)戶飼養(yǎng)的未經(jīng)免疫牛進(jìn)行血液采樣。采血針采取牛頸靜脈血5 mL 置于滅菌離心管中，待血液凝固析出血清后，以2 500 r/min 離心5 min，分離血清，-20 ℃保存?zhèn)錂z。

1.2 牛布魯菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）分析我們對采集的牛血液進(jìn)行血清分離后，根據(jù)《動物布魯菌病診斷技術(shù)》（GB/T18646—2002）進(jìn)行布魯菌病的血清學(xué)分析[4]。我們首先用虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）進(jìn)行初篩，在陰、陽性血清對照成立的條件下，對被檢血清進(jìn)行判定。受檢血清在4 min 內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者判為陽性（+），無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性（-）。布魯菌病RBT 抗原，購自中國疾病預(yù)防控制中心傳染病研究所；布魯菌病標(biāo)準(zhǔn)陰、陽性血清，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.3 牛、羊布魯菌病動物布病試管凝集試驗(yàn)（SAT）分析 采用動物布病試管凝集試驗(yàn)（SAT）對牛血清進(jìn)行定量復(fù)篩診斷，參照比濁管，按各試管上層液體清亮度進(jìn)行結(jié)果判讀：（1）++++菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；（2）+++菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮；（3）++菌體凝集顯著，液體50%清亮；（4）凝集物有沉淀，液體25%清亮；（5）凝集物無沉淀，液體均勻混濁。我們以牛1∶100血清稀釋出現(xiàn)“++”以上凝集現(xiàn)象時(shí)，受檢血清及判定為陽性；牛1∶50 血清稀釋出現(xiàn)“++”以上凝集現(xiàn)象時(shí)，受檢血清判定為可疑反應(yīng)。對于可疑反應(yīng)家畜經(jīng)3～4 周后重檢，如果仍為可疑，該牛判為布魯菌病血清學(xué)陽性。SAT 抗原，購自中國疾病預(yù)防控制中心傳染病研究所；布魯菌病標(biāo)準(zhǔn)陰、陽性血清，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.4 數(shù)據(jù)分析 不同地區(qū)間布魯菌病患病率差異采用SPSS16.0 軟件進(jìn)行Chip-Square統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；P＜0.01 表示差異極顯著，P＜0.01、P＜0.05 表示差異顯著，P＞0.05 表示沒有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 牛布魯菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）檢測結(jié)果 我們于2012 年5 月至2013 年8 月對青海省5 個(gè)市縣的大型牛場、規(guī)模化養(yǎng)殖戶及農(nóng)戶飼養(yǎng)的未經(jīng)免疫牛進(jìn)行了血清學(xué)流行病調(diào)查，共采集牛血液樣品2 734 份，虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）調(diào)查結(jié)果顯示，青海省牛的布魯菌病陽性率為3.51%（96/2734）；海西蒙古族藏族自治州（HX）、海南藏族自治州（HAN）、黃南藏族自治州（HUN）、果洛藏族自治州（GL）和玉樹藏族自治州（YS）地區(qū)牛的布魯菌感染率分別為2.87%，2.78%，2.20%，6.13%和2.98%，不同地區(qū)間的布魯菌病患病率經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著性差異（P＞0.05）（表1）。

2.2 牛布病試管凝集試驗(yàn)（SAT）檢測結(jié)果 虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）作為《動物布魯菌病診斷技術(shù)》（GB/T18646—2002）規(guī)定的牛布魯菌病診斷方法具有快速、簡單及易操作的優(yōu)點(diǎn)，然而為了進(jìn)一步確診復(fù)查牛的布魯菌病，我們采取《動物布魯菌病診斷技術(shù)》（GB/T18646—2002）規(guī)定的動物布病試管凝集試驗(yàn)（SAT）對牛血清進(jìn)行定量復(fù)篩診斷，結(jié)果顯示，5 個(gè)不同地區(qū)的牛血清樣品布魯菌陽性率分別為2.29%，2.62%，2.20%，5.00%和2.46%，平均感染率為3.00%（82/2734）。經(jīng)Chip-Square 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同地區(qū)間的布魯菌血清陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）（表1）。

表1 青海省不同地區(qū)牛布魯菌病感染率

3 討論

布魯菌病是一種呈世界性分布的人獸共患病，20 世紀(jì)80 年代末期，我國的布魯菌病疫情下降到有史以來的最低點(diǎn)，甚至多個(gè)省、市、區(qū)達(dá)到我國規(guī)定的布魯菌病控制標(biāo)準(zhǔn)。但是20 世紀(jì)90年代以后，我國的布魯菌病人畜感染率逐年上升，特別是在1995 年后幾乎所有的過去有布魯菌病流行的省區(qū)皆出現(xiàn)了疫情反彈，在東北和西北的近10 個(gè)省區(qū)內(nèi)尤為突出[3、5-6]。2011 年衛(wèi)生部報(bào)告人布魯菌病發(fā)病率相比2010 年增加12.45%，呈逐年上升趨勢。此外，動物發(fā)病數(shù)更達(dá)到驚人數(shù)目，給畜牧業(yè)發(fā)展帶來嚴(yán)重危害和巨大的經(jīng)濟(jì)損失，并嚴(yán)重威脅人類健康，因此布魯菌病被列為再度肆虐的傳染病。

青海省的布魯菌病流行于解放前，危害嚴(yán)重。解放后全省對于牛、羊布魯菌病的防治先后經(jīng)歷了檢疫、免疫、免疫效果考核及疫情監(jiān)測4 個(gè)階段，截至1997 年青海省牛、羊布魯菌病的陽性率逐漸下降至0.32%和0.33%，顯著低于建國初期的22.89%和17.88%，疫情達(dá)到可控狀態(tài)，促進(jìn)了青海全省的畜牧業(yè)發(fā)展及經(jīng)濟(jì)發(fā)展[7]。然而，我們的調(diào)查結(jié)果顯示，青海省牛的布魯菌血清陽性率為3.00%～3.51%，顯著高于1997 年的布魯菌感染率，提示我們青海省牛的布魯菌病患病率出現(xiàn)了顯著的反彈?，F(xiàn)代化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，牲畜流動和交易的頻繁等可能是布魯菌病患病率出現(xiàn)反彈的原因。

我們采用布病試管凝集試驗(yàn)(SAT)對青海省的5 個(gè)市、縣及區(qū)進(jìn)行布魯菌病的血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）青海省牛的布魯菌病患病率為3.51%（96/2734）；布病試管凝集試驗(yàn)（SAT）的復(fù)篩分析結(jié)果顯示，青海省牛的布魯菌病患病率為3.00%（82/2734）。上述結(jié)果表明，虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）檢測到的布魯菌血清陽性率高于動物布病試管凝集試驗(yàn)（SAT），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并沒有顯著性的差異，提示我們作為我國使用最廣泛的標(biāo)準(zhǔn)布魯菌病診斷方法，可信度較高。但是，有研究報(bào)道，在布魯菌病的流行病學(xué)調(diào)查中采用OIE 標(biāo)準(zhǔn)方法iELISA和cELISA與RBPT 和SAT 同時(shí)進(jìn)行檢測，OIE 標(biāo)準(zhǔn)方法的檢出陽性率均低于國標(biāo)方法，提示我們RBPT 和SAT檢測的特異性和敏感性可能低于iELISA和cELISA，有假陰性及假陽性結(jié)果的出現(xiàn)[4]。然而，由于RBPT 和SAT 作為我國的官方布魯菌標(biāo)準(zhǔn)診斷方法，在我國的布魯病診斷調(diào)查中依然是具有參考性的。

我們的調(diào)查結(jié)果顯示，青海省牛的布魯菌病患病率出現(xiàn)了顯著的反彈，布魯菌陽性率顯著高于布病可防可控的標(biāo)準(zhǔn)，因此為了更好防制本病今后要加強(qiáng)疫情監(jiān)測，制定綜合防制措施。

[1]衛(wèi)生部地方病防治司，農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)司.布魯菌病防治手冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1989：3-4.

[2]農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)司.中國動物疫病志[M].北京：科學(xué)出版社，1993：106-118.

[3]尚德秋.布魯菌病再度肆虐及其原因[J].中國地方病防治雜志，2001，16（1）：29.

[4]Mangalgi S，Sajjan A.Comparison of three blood culture techniques in the diagnosis of human brucellosis[J].JLab Physicians，2014，6（1）：14-17.

[5]Xulong L，Hailong Q，Zhaoyang B，et al.Seroprevalence of Brucella infection in yaks（Bos grunniens）on the Qinghai-Tibet plateau of China [J].Trop Anim Health Prod，2011，43（2）：305-306.

[6]Chen Z，Zhang W，Ke Y，et al.High-risk regions of human brucellosis in china：implications for prevention and early diagnosis of travel-related infections[J].Clin Infect Dis，2013，57（2）：330-332.

[7]傅義娟.青海省海東地區(qū)牛羊布魯菌病流行病學(xué)調(diào)查及防治效果分析[D].蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005 .