楊 雪，趙東豪，于 洋，周宇峰，時(shí) 偉，方炳虎，劉雅紅

（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510642）

喹賽多（Cyadox）屬喹噁啉類藥物，是一種新型的飼料添加劑，由于它具有較低的毒性和良好的促生長作用，因此應(yīng)用前景廣闊[1-2]。喹賽多在動(dòng)物體內(nèi)可迅速代謝成多種化合物，已有喹賽多的主要代謝途徑及代謝物的相關(guān)報(bào)道[3-5]。其中脫二氧喹賽多（1，4-bisdesoxycyadox）是喹賽多的主要代謝產(chǎn)物之一，已有研究認(rèn)為其可能為喹賽多的殘留標(biāo)志物[6]，但目前針對脫二氧喹賽多在大鼠血漿及組織的藥動(dòng)學(xué)研究尚未開展。因此了解脫二氧喹賽多在動(dòng)物體內(nèi)的處置過程非常重要。Yan 和He 等建立了高效液相串聯(lián)質(zhì)譜檢測喹賽多及脫二氧喹賽多的方法[7-8]。國內(nèi)外相繼報(bào)道了喹賽多及其代謝物在豬、雞、魚的藥動(dòng)學(xué)及殘留消除研究[9-14]，為藥物在動(dòng)物上的合理使用奠定了基礎(chǔ)。本研究探討了單劑量口服喹賽多后，其主要代謝物脫二氧喹賽多在健康大鼠血漿及各組織中的藥物動(dòng)力學(xué)過程，通過分析藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，掌握其藥動(dòng)學(xué)特征，深入了解脫二氧喹賽多在大鼠體內(nèi)的分布和消除情況。

1 材料與方法

1.1 主要材料 藥品：喹賽多原料藥，含量98%，由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)獸藥研究所合成。脫二氧喹賽多，含量98%，由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)藥理研究室提供。儀器：Agilent 1200 高效液相色譜儀，購自美國安捷倫公司；API 4000 電噴霧-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜儀，購自美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司；試驗(yàn)動(dòng)物：Wistar 雌性大鼠150 只，體重250±30 g，購自南方醫(yī)科大學(xué)。150 只大鼠被隨機(jī)分為15 組，每組10只，其中1 組為空白對照組，其他14 組口服喹賽多（200 mg/kg 體重）后，分別在預(yù)設(shè)的14 個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集樣品。

1.2 給藥及樣品采集 大鼠在給藥前稱重和編號。取喹賽多原料藥，用0.5%羧甲基纖維素鈉配成50 mg/mL 的混懸液，現(xiàn)用現(xiàn)配。大鼠保定好后，以200 mg/kg 體重的劑量口服給藥。給藥后分別在0.25、0.5、1、2、3、5、6、7、8、10、12、16、24 h 和48 h 將對應(yīng)的大鼠處死，采集血液及組織，同時(shí)從空白組采集空白樣品。將收集的1.5～2.0 mL 血液，置于含肝素鈉的塑料離心管中，3 000 r/min 離心10 min，分離血漿。采集的組織樣品重2 g 左右，經(jīng)生理鹽水清洗后，用濾紙吸干，裝入已編號的樣品袋中。所有樣品均在-20 ℃保存，并予1 周內(nèi)檢測完畢。

1.3 血漿及組織樣品處理[7-8]取血漿樣品0.25 mL，置于離心管中，加入0.25 mL乙腈，旋渦振蕩1 min后于12 000 r/min離心10 min，上清液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后，備檢。取組織樣品0.5 g，用5 mL乙酸乙酯提取兩次，合并上清液于40 ℃下N2吹干，殘留物用6 mL甲醇/水（1/5）復(fù)溶，過Oasis MAX固相萃取小柱，最后用1 mL甲酸/乙腈（2/98）進(jìn)行洗脫。洗脫液12 000 r/min離心5 min，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，上機(jī)檢測。

1.4 色譜及質(zhì)譜工作條件 色譜柱：Luna C18（150×2.0 mm id，5 μm），購自美國Phenomenex 公司。流動(dòng)相包括0.1%甲酸水（A）和乙腈（B），流速0.2 mL/min。梯度洗脫程序如下：0～4.5 min 98～20%A，4.5～5.9 min 20%A，5.9～6.0 min 20～98%A，6.0～14.0 min 98%A；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：5 μL。采用多反應(yīng)監(jiān)測掃描模式；電噴霧離子源；負(fù)離子掃描；噴霧電壓-4.2 kV，霧化氣壓力50 psi，輔助氣流速55 L/min，氣簾氣壓力20 psi，離子源溫度600 ℃，碰撞室壓力7 psi。監(jiān)測離子對為238.0→65.9，238.0→142.9，其中238.0→65.9 以其較高的靈敏性被選作定量離子對。

1.5 數(shù)據(jù)處理 血漿和組織樣品中脫二氧喹賽多的濃度經(jīng)液質(zhì)聯(lián)用儀的Analyst 1.5 軟件處理得到。所有的藥物濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)WinNonlin 6.1（美國Pharsight 公司）軟件的非房室模型擬合，計(jì)算脫二氧喹賽多在血漿及各組織中的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，同時(shí)以藥物濃度平均值對時(shí)間作藥-時(shí)曲線圖。

2 結(jié)果

2.1 色譜分析 通過測定不同濃度脫二氧喹賽多的信噪比（S/N），確定該代謝物的檢測限（S/N=3）為1 μg/L，定量限（S/N=10）為2 μg/L。在5～500 ng/mL 的范圍內(nèi)，脫二氧喹賽多的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于0.999。血漿和各組織的脫二氧喹賽多的回收率為86.40%-99.20%，批內(nèi)變異系數(shù)為2.80%-13.80%，批間變異系數(shù)為3.51%-9.60%。

2.2 藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征 大鼠口服200 mg/kg體重的喹賽多后，不同時(shí)間點(diǎn)的血漿及組織藥時(shí)曲線如圖1。采用非房室模型法計(jì)算血漿及組織中的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，結(jié)果如表1。

圖1 大鼠口服喹賽多（200mg/kg體重）后血漿及各組織的藥物濃度-時(shí)間對數(shù)曲線

表1 大鼠單劑量口服喹賽多（200mg/kg體重）脫二氧喹賽多在血漿及各組織中的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

3 結(jié)論與討論

3.1 脫二氧喹賽多在血漿中的藥動(dòng)學(xué)特征 從藥時(shí)曲線上可以看出，除了肝臟，其他組織均在2 h后檢測出較高濃度的脫二氧喹賽多，這表明喹賽多在動(dòng)物體內(nèi)生成代謝產(chǎn)物的過程相對較慢。血漿藥動(dòng)學(xué)結(jié)果表明，脫二氧喹賽多在大鼠體內(nèi)的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)適合用非房室模型擬合，其T1/2β為4.63 h，稍低于Zhao[12]報(bào)道的豬（40 mg/kg體重）的T1/2β（5.77 h），而稍高于郭軍朋[11]報(bào)道的豬（40 mg/kg 體重）的T1/2β（3.85 h），說明脫二氧喹賽多在大鼠體內(nèi)的消除速率在種屬間的差異較小。本研究中脫二氧喹賽多在血漿中的Tmax 為7.00 h，略大于邱銀生[10]報(bào)道的豬（40 mg/kg 體重）的Tmax（6.30 h），而與Zhao[12]報(bào) 道的豬的Tmax（7.25 h）相近，說明脫二氧喹賽多的達(dá)峰時(shí)間在種屬間差異較小。本研究中脫二氧喹賽多的AUC0→∞為9937.08 h*μg/L，高于Zhao[12]報(bào)道的豬的AUC0→∞（1380.00 h*μg/L）、殷居易[9]報(bào)道的鯉（40 mg/kg 體重）的AUC0→∞（1890.00 h*μg/L），這說明AUC0→∞在種屬間有一定的差異。大鼠口服喹賽多后脫二氧喹賽多的血漿清除率Cl/F 為20.13 L/h·kg，表觀分布容積V/F 為134.35 L/kg，說明脫二氧喹賽多在大鼠體內(nèi)分布廣泛，清除緩慢。

3.2 脫二氧喹賽多在各組織中的藥動(dòng)學(xué)特征本研究中脫二氧喹賽多在各組織內(nèi)T1/2β的順序?yàn)椋焊闻K＞腎臟＞肌肉＞脂肪。T1/2β的數(shù)值表明化合物在各組織中的消除速率較慢，其中腎臟T1/2β高于顏丹丹[14]報(bào)道的雞（50 mg/kg 體重連續(xù)多劑量灌服給藥7 d）腎臟T1/2β（3.71 h），與Li[13]報(bào)道的豬（20 mg/kg 體重連續(xù)多劑量灌服5 d）的各組織T1/2β（肝臟、腎臟、肌肉和脂肪分別為29.84、26.55、20.00 h 和19.52 h）有一定的差異，這可能和動(dòng)物的種屬差異和不同的給藥方式有關(guān)。本研究中脫二氧喹賽多在各組織內(nèi)的AUC0→∞順序?yàn)榧∪猓靖闻K＞腎臟＞脂肪，說明脫二氧喹賽多在大鼠肌肉中的殘留水平較高，在脂肪中較低，該結(jié)果和Li[13]報(bào)道的腎臟＞肝臟＞脂肪＞肌肉有一定的差別。本研究中脫二氧喹賽多在各組織內(nèi)的平均MRT 大小順序?yàn)楦闻K＞肌肉＞腎臟＞脂肪，其中腎臟MRT稍高于顏丹丹[14]報(bào)道的雞的腎臟MRT（6.48 h），該結(jié)果可以為臨床上喹賽多休藥期的制定提供參考。

3.3 總結(jié) 本文研究了大鼠單劑量口服喹賽多后，其代謝產(chǎn)物脫二氧喹賽多在血漿及組織中的藥動(dòng)學(xué)，通過與其他種屬藥動(dòng)學(xué)特征的比較，可以看出，喹賽多代謝為脫二氧喹賽多的過程比較緩慢、消除速率低、達(dá)峰濃度高、在大鼠體內(nèi)分布廣泛。本文填補(bǔ)了喹賽多單劑量給藥下各組織藥物濃度變化的研究空白，為今后關(guān)于喹賽多及其代謝物的藥動(dòng)學(xué)研究提供參考，也可作為建立生理模型并外推至其他動(dòng)物的前期工作。目前關(guān)于喹賽多在動(dòng)物體內(nèi)的殘留標(biāo)志物和殘留靶組織仍沒有確切的規(guī)定，本研究的結(jié)果可以為其他動(dòng)物的殘留消除研究提供借鑒，為休藥期的制定提供參考，從而在生產(chǎn)中更合理的使用該藥物。

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