張美華，黃建偉，溫 凌，王巧瑜，潘 潔(廣州市第十二人民醫(yī)院消化內(nèi)科，廣州 510620)

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骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)肝衰竭患者生存預(yù)后的影響

張美華，黃建偉，溫 凌，王巧瑜，潘 潔(廣州市第十二人民醫(yī)院消化內(nèi)科，廣州 510620)

目的 探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)對(duì)肝衰竭患者生存預(yù)后的影響。方法 將60例肝衰竭患者按隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組和對(duì)照組，每組30例。對(duì)照組給予標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)科護(hù)肝、退黃(促肝細(xì)胞生長素、復(fù)方甘草酸苷、思美泰等)等綜合治療，1個(gè)月為1個(gè)療程。觀察組在標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)科綜合治療基礎(chǔ)上加用BMSCs移植治療，5 d為1個(gè)療程。測定并觀察2組血清中肝功能指標(biāo)[谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、白蛋白(ALB)]，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL-1β等細(xì)胞因子水平及凝血功能指標(biāo)[凝血酶原時(shí)間(PT)，部分凝血活酶時(shí)間(APTT)]的變化，對(duì)2組患者的療效進(jìn)行比較。結(jié)果 觀察組治療后ALT、TBIL、PT、APTT、TNF-α及IL-1β均明顯低于對(duì)照組，ALB明顯高于對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)。觀察組總有效率為96.67%，對(duì)照組總有效率為73.33%，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 BMSCs移植治療對(duì)于肝衰竭患者的生存預(yù)后具有重要意義。

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞； 肝衰竭； 生存預(yù)后； 影響

肝衰竭是多種因素引起的嚴(yán)重肝臟損害，導(dǎo)致其合成、解毒、排泄和生物轉(zhuǎn)化等功能發(fā)生嚴(yán)重障礙或失代償，出現(xiàn)以凝血機(jī)制障礙、黃疸、肝性腦病及腹水等為主要表現(xiàn)的一組臨床癥候群。肝衰竭可在急性或慢性肝病、中毒及其他器官衰竭等過程中發(fā)生，臨床表現(xiàn)有意識(shí)障礙、黃疸、呼氣有肝臭以及出血傾向等[1-3]。肝衰竭病情危重，必須及早救治，否則轉(zhuǎn)歸預(yù)后不良。臨床上常采用護(hù)肝、退黃等標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)科綜合治療。本研究對(duì)30例肝衰竭患者在標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)科治療的基礎(chǔ)上進(jìn)行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植，探討B(tài)MSC對(duì)肝衰竭患者生存預(yù)后的影響。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2011年10月至2014年5月在廣州市第十二人民醫(yī)院住院治療的肝衰竭患者60例，均符合《肝衰竭診治指南》[1]的診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中男42例，女18例，年齡28～70(51.37±9.82)歲，病程 1～18(6.8±2.52)個(gè)月。將60例患者按隨機(jī)數(shù)字表法分為觀察組和對(duì)照組，每組30例。2組患者在性別、年齡以及病情程度及病程等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法

2組患者均給予標(biāo)準(zhǔn)護(hù)肝、退黃(促肝細(xì)胞生長素、復(fù)方甘草酸苷、思美泰等)等內(nèi)科綜合治療。觀察組在標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)科綜合治療基礎(chǔ)上，通過外周靜脈輸注 BMSCs，1次·d-1，每次移植(1×106)·kg-1，5 d為1個(gè)療程。

1.3 BMSCs的分離、純化、擴(kuò)增

無菌條件下采集患者骨髓1～2 mL，采用密度梯度離心法，反復(fù)貼壁純化分離 BMSCs?？鼓撬铇?biāo)本置于Percoll 分離液梯度離心，吸取中間單個(gè)核細(xì)胞(MNC)白膜層，以1×106·mL-1的密度接種于培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)體系為含10%FBS 的DMEM 培養(yǎng)基，于37 ℃、5%CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)。48 h 后去除未貼壁細(xì)胞，3～4 d換液1次，當(dāng)瓶底貼壁細(xì)胞達(dá)到90%以上融合時(shí)，以0.25%胰酶消化進(jìn)行傳代，記錄每一代的傳代時(shí)間并進(jìn)行比較。傳至3～4 代時(shí)，觀察細(xì)胞形態(tài)均一、BMSCs純度達(dá)90%時(shí)即可進(jìn)行移植治療。

1.4 觀察指標(biāo)

測定觀察2組患者血清中肝功能指標(biāo)[谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、白蛋白(ALB)]，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL-1β等細(xì)胞因子水平及凝血功能指標(biāo)[凝血酶原時(shí)間(PT)，部分凝血活酶時(shí)間(APTT)]的變化。

1.5 療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)預(yù)后效果使用醫(yī)院自擬評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)分，總分為100分。顯效：評(píng)分結(jié)果>90分，或生存時(shí)間在3年以上；有效：評(píng)分結(jié)果為60～89分，或生存時(shí)間>1年；無效：評(píng)分結(jié)果<60分，或死亡[4]?？傆行?(顯效+有效)病例數(shù)/總病例數(shù)×100%。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組患者治療后肝功能、凝血功能指標(biāo)變化的比較

觀察組治療后ALT、TBIL、PT、APTT、TNF-α及IL-1β均明顯低于對(duì)照組，ALB明顯高于對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)。見表1。

組別n肝功能指標(biāo)凝血功能指標(biāo)ALBρ/(g·L-1)TBILc/(μmol·L-1)ALT/(U·L-1)PTt/sAPTTt/sTNF-αρ/(ng·L-1)IL-1βρ/(ng·L-1)觀察組3028．5±4．2160．2±53．445．67±5．613．5±2．630．5±3．413．29±7．178．80±6．0對(duì)照組3023．8±3．4302．1±62．6102．73±7．318．7±3．243．6±2．820．12±8．7219．50±15．0t2．2802．02513．1116．90813．8033．2237．526P0．0260．0310．0000．0000．0000．0220．000

2.2 2組患者療效的比較

觀察組治療后總有效率為96.67%，對(duì)照組總有效率為73.33%，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組療效的比較

3 討論

肝衰竭是臨床上的危重急癥，病死率較高，且預(yù)后不良，單純常規(guī)護(hù)肝退黃等內(nèi)科綜合治療效果尚不十分理想。本研究通過對(duì)30例肝衰竭患者(觀察組)在標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)科治療的基礎(chǔ)上加用 BMSCs移植治療，結(jié)果顯示：觀察組肝功能和凝血功能均較對(duì)照組明顯改善，且TNF-α、IL-1β等細(xì)胞因子的水平較對(duì)照組明顯減少(P<0.05或P<0.01)，預(yù)后明顯優(yōu)于對(duì)照組。究其原因，筆者認(rèn)為可能是： BMSCs 移植操作簡便，其在體外培養(yǎng)能夠維持多向分化潛能，且其遺傳基因穩(wěn)定，植入到患者體內(nèi)不易出現(xiàn)免疫排斥反應(yīng)。原代肝細(xì)胞很難在體外進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，并且不能將自身正常的生理功能予以維持。將 BMSCs進(jìn)行分化擴(kuò)增后，其能夠進(jìn)行大量擴(kuò)增，還能分化為肝細(xì)胞或肝樣細(xì)胞，具有肝細(xì)胞合成、分泌以及解毒功能，很好地代替正常肝細(xì)胞在科研及臨床上的應(yīng)用[5]。在 BMSCs橫向分化為肝樣細(xì)胞時(shí)，使多種因子共同作用，在平板培養(yǎng)中誘導(dǎo)單層細(xì)胞得以實(shí)現(xiàn)。但是這樣使得細(xì)胞難以維持正常生物學(xué)作用。最終經(jīng)過研究，使用基質(zhì)等進(jìn)行聚集培養(yǎng)，給細(xì)胞創(chuàng)造良好的培養(yǎng)環(huán)境，延長細(xì)胞存活時(shí)間，維持其自身特異性功能。所以臨床上使用 BMSCs在患者體外進(jìn)行培養(yǎng)以及擴(kuò)增后將 BMSCs重新輸回至患者體內(nèi)，可有效地緩解患者肝衰竭的病情。此外， BMSCs還具有一定的免疫調(diào)節(jié)功能，通過細(xì)胞間的相互作用及產(chǎn)生細(xì)胞因子抑制T細(xì)胞的增殖及其免疫反應(yīng)，從而發(fā)揮其免疫重建的功能，有效地減少炎癥因子的數(shù)量，最終緩解病情[6]。

綜上所述， BMSCs對(duì)于肝衰竭患者的生存預(yù)后具有重要的意義，安全性較高，值得臨床推薦應(yīng)用。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)肝衰竭與人工肝學(xué)組,中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)重型肝病與人工肝學(xué)組.肝衰竭診治指南:2012年版[J].中華肝臟病雜志,2013,21(3):177-183.

[2] 李小鵬，張倫理.慢加急性肝衰竭研究新進(jìn)展[J].內(nèi)科急危重癥雜志,2014,20(3):157-158.

[3] Lee W M，Stravitz R T，Larsin A M，et al.Introduction to the revised american association for the study of liver diseases position paper on acute liver failure 2011[J].Hepatology，2012，55(3):965-967.

[4] 陳菲菲,楊麗華,陳苑莉,等.慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者行異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植的護(hù)理[J].中國實(shí)用護(hù)理雜志,2014,30(18):1-4.

[5] 范敬靜.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其向肝樣細(xì)胞分化的潛能[J].中國組織工程研究,2014,18(28):4578-4582.

[6] Yagi H,Parekkadan B,Suganuma K,et al.Long-term superior performance of a stem cell/hepatocyte device for the treatment of acute liver failure[J].Tissue Eng part A,2009,15(11):3377-3388.

(責(zé)任編輯：周麗萍)

Effect of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell Transplantation on Survival Prognosis of Patients with Liver Failure

ZHANG Mei-hua,Huang Jian-wei,Weng Ling,Wang Qiao-yu,Pan Jie
(DepartmentofGastroenterology,GuangzhouTwelfthMunicipalPeople’sHospital,Guangzhou510620,China)

Objective To study the effect of transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs) on survival prognosis of patients with liver failure.Methods Sixty patients with liver failure were randomly divided into two groups,with 30 patients in each group.Patients in control group were given standard liver protection,jaundice elimination(hepatocyte growth factor,compound glycyrrhizin,transmetil,etc.) and other comprehensive treatments for 1 month in each course.Patients in observation group were treated with the transplantation of BMSCs for 5 day in each course,based on the comprehensive treatment.The levels of alanine transaminase(ALT),total bilirubin(TBIL),albumin(ALB),tumor necrosis factor-α(TNF-α),interleukin-1β(IL-1β),prothrombin time(PT) and partial thromboplastin time(APTT) were measured in both groups.In addition,the curative efficacy was compared between the two groups.Results Compared with control group,levels of ALT,TBIL,PT,APTT,TNF-α and IL-1β decreased and levels of ALB increased in observation group(P<0.05 orP<0.01).Furthermore,the total effective rate in observation group was higher than that in control group(96.67% vs 73.33%,P<0.05).Conclusion The transplantation of BMSCs is of great significance for survival prognosis of patients with liver failure.

bone marrow mesenchymal stem cells; liver failure; prognosis; effect

2014-11-25

張美華(1979—)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事肝病的臨床研究。

R575.3

A

1009-8194(2015)06-0015-03

10.13764/j.cnki.lcsy.2015.06.005