呂雪城

[摘要] 目的 探討高效液相色譜測(cè)定人體托吡酯血藥濃度的方法與效果。 方法 選擇Agilent 1100高效液相色譜儀測(cè)定人體血漿中的托吡酯的濃度。 結(jié)果 托吡酯的線性方程為Y=6.25×10-4X+1.08×10-2，線形范圍為0.05～10.00?g/mL，提取回收率為92.1%，在血漿中的平均濃度為0.260?g/mL。 結(jié)論 高效液相色譜測(cè)定人體血漿中的托吡酯的濃度方法簡(jiǎn)單、可行、靈敏度高，具有良好的回收率。

[關(guān)鍵詞] 托吡酯；血藥濃度；高效液相色譜

[中圖分類(lèi)號(hào)] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）24-81-02

The blood concentration monitoring for antiepileptic medicine- topiramate

LV Xuecheng

Shangqiu City First People's Hospital， Shangqiu 476000，China

[Abstract] Objective To investigate the ways and effects of HPLC for detecting human plasma concentration of topiramate. Methods Used the Agilent 1100 HPLC to detect human plasma topiramate concentrations. Results Topiramate linear equation was Y=6.25×10-4X+1.08×10-2， the linear range was 0.05-10.00μg/mL， extraction recovery was 92.1%， while the average plasma concentration was 0.260 μg/mL. Conclusion HPLC determination of human plasma topiramate is simple， practical， high sensitivity that has good recovery.

[Key words] Topiramate； Plasma concentration； HPLC

癲癇是最常見(jiàn)的神經(jīng)疾病之一，患病率為6‰左右，當(dāng)前隨著我國(guó)癲癇發(fā)病率的增高，越來(lái)越多的人被癲癇困擾，長(zhǎng)期不治愈可伴隨有嚴(yán)重的身心后果，其常伴有記憶、學(xué)習(xí)、行為等認(rèn)知功能障礙[1]。在藥物治療中，當(dāng)前應(yīng)用比較多的是托吡酯，托吡酯可增強(qiáng)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)作用來(lái)發(fā)揮治療效果[2]。不過(guò)在托吡酯被吸收后，如何進(jìn)行血藥色譜濃度測(cè)定就值得探討[3]。本研究采用高效液相色譜測(cè)定了人體血漿中托吡酯的濃度，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 試劑與儀器

1.1 試劑

托吡酯及內(nèi)標(biāo)金剛烷胺的標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自西安楊森制藥有限公司和中國(guó)藥品生物制品檢定所，純度均大于99%；甲醇、乙腈為色譜純（北京化工分公司），水為雙蒸超純水，乙腈、乙酸、丙酮、三乙胺等其他試劑均為分析純，血漿樣品來(lái)自健康受試者，血漿樣品保存在-40℃的冰箱。

1.2 儀器

超級(jí)恒溫水浴鍋購(gòu)自本地區(qū)儀器廠，HHS型不銹鋼電熱恒溫水浴鍋（武漢市琴臺(tái)醫(yī)療器械廠），CS101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（重慶試驗(yàn)設(shè)備廠）。Agilent 1100高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司），TG16G臺(tái)式高速離心機(jī)（上海生物工程有限公司），BS110型電子天平（北京三博醫(yī)藥有限公司），RE52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海生物工程儀器廠），WH-2微型渦旋混合儀（滬西分析儀器廠有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜與質(zhì)譜條件

選擇Ultimate C18分析色譜柱（250mm× 4.6mm，5?m）；流動(dòng)相：乙腈-磷酸鹽緩沖液（pH=5）；柱溫25℃；流速是1.0mL/min；柱溫：35℃；熒光檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)為315nm，激發(fā)波長(zhǎng)為260nm。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

托吡酯標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取0.50g托吡酯標(biāo)準(zhǔn)品，置于50mL容量瓶中，用1∶1的甲醇-水溶解并定容至刻度，從而得到10.0mg/mL托吡酯標(biāo)準(zhǔn)溶液。內(nèi)標(biāo)溶液：稱(chēng)取金剛烷胺12.0mg，溶解方法同托吡酯標(biāo)，得240.0?g/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 樣品的制備

移取血漿樣品0.5 ～ 1.5mL的EP管中，加入0.5mL丙酮和10?L內(nèi)標(biāo)金剛烷胺，混合后以12 000r/min離心10min，轉(zhuǎn)移上清液0.8mL至另外的EP管中，加入10?L異硫氰酸苯酯和5?L三乙胺，混勻后進(jìn)行60℃的恒溫水浴中衍生反應(yīng)1h，然后吹干，再用200?L的流動(dòng)相重復(fù)上述步驟，進(jìn)樣20?L分析。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將托吡酯標(biāo)準(zhǔn)溶液用血漿進(jìn)行梯度稀釋成托吡酯濃度分別為0.10、0.20、0.50、1.00、2.00?g/mL的樣品，然后以托吡酯的峰面積與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值（Y）為縱坐標(biāo)，以濃度（X）為橫坐標(biāo)作加權(quán)線性回歸，計(jì)算得到托吡酯的線性方程為：Y=6.25×10-4X +1.08×10-2，線形范圍為0.05～10.00?g/mL。

2.5 回收率計(jì)算

分別用空白血漿和水配制兩組低、中、高三個(gè)濃度水平的托吡酯，每種濃度平行制備3份，然后計(jì)算得到的托吡酯和內(nèi)標(biāo)的提取回收率分別為92.1%和85.2%。

2.6 準(zhǔn)確度與精密度計(jì)算

采用同樣方法配制低、中、高三種濃度水平，每個(gè)濃度水平下平行處理3份，其中日間緊密度則要連續(xù)考察3d，日內(nèi)精密度將配制的低、中、高溶液連續(xù)進(jìn)樣分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示日內(nèi)和日間精密度的RSD分別為4.4%和4.5%。endprint

2.7 濃度計(jì)算

分別精密吸取不同的血漿樣品，制備樣品溶液，每批樣品進(jìn)樣3次，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算3批血漿樣品中的托吡酯的含量，結(jié)果見(jiàn)表1。其平均濃度為0.260?g/mL。

3 討論

癲癇患者常伴有認(rèn)知功能損害，是多因素綜合作用的結(jié)果。雖然癲癇預(yù)后比較差，但是治療方法比較多[4-5]。多選擇抗癲癇藥物來(lái)控制癲癇，目前臨床上常用抗癲癇藥物都是經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期大量反復(fù)臨床試驗(yàn)的來(lái)的，每種藥物有效率都在70%～80%以上[6-7]。其中托吡酯是結(jié)構(gòu)全新的新一代抗癲癇藥，臨床應(yīng)用安全有效。其可以增強(qiáng)部分電壓門(mén)控及鈣門(mén)控鉀離子通道電流；增加非苯二氮類(lèi)γ-氨基丁酸α受體亞型介導(dǎo)的氯離子內(nèi)流；阻斷電壓門(mén)控鈉離子通道，阻斷L型高電壓門(mén)控鈣離子通道[8-9]。

在生物樣品的血藥濃度分析中，高效液相色譜具有高精確性、高靈敏度、高選擇性的特點(diǎn)，已成為當(dāng)代最重要的分離分析方法之一[10-13]。本研究托吡酯在240nm和260nm處均有最大吸收，但240nm處干擾物質(zhì)比較多，故本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)為260nm。本研究經(jīng)過(guò)液相色-質(zhì)譜聯(lián)用分析，得到托吡酯的線性方程為Y=6.25×10-4X+1.08×10-2，線形范圍為0.05～10.00?g/mL。托吡酯的提取回收率為92.1%，在日內(nèi)和日間精密度的RSD分別為4.4%和4.5%，在血漿中的平均濃度為0.260?g/mL。

總之，高效液相色譜測(cè)定血人體漿中托吡酯的濃度方法簡(jiǎn)單、可行、靈敏度高，具有良好的回收率、準(zhǔn)確度和精密度。

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（收稿日期：2014-10-17）endprint