施城東，樊 衛(wèi)(江蘇省淮安市淮安醫(yī)院檢驗(yàn)科 223200)

?

·臨床探討·

ATM蛋白在早期食管癌中的表達(dá)及其臨床意義*

施城東，樊 衛(wèi)
(江蘇省淮安市淮安醫(yī)院檢驗(yàn)科 223200)

目的 通過檢測ATM蛋白在早期食管癌和正常食管組織的表達(dá)水平，探討ATM蛋白對于早期食管癌的臨床診斷價值。方法 選取40例食管癌患者及40例健康體檢者作為研究對象，并收集腸鏡下食管組織活檢標(biāo)本；應(yīng)用免疫組化(SP)法檢測食管癌ATM蛋白表達(dá)水平，并以健康體檢者食管組織ATM蛋白表達(dá)水平作對照；分析ATM蛋白表達(dá)水平與癌細(xì)胞分化程度、癌變分期及淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果ATM蛋白在40例食管癌組織中的陽性率為85.0%，在40例健康體檢者食管組織中的陽性率為17.5%，兩組ATM蛋白陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；高、中、低分化食管癌的ATM蛋白陽性率分別為62.6%、81.8%和100.0%，低分化食管癌的ATM蛋白陽性率明顯高于中、低分化食管癌的ATM蛋白陽性率(P<0.05)；早期食管癌的ATM蛋白陽性率為72.2%，進(jìn)展期食管癌的ATM蛋白陽性率為90.9%，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；ATM蛋白在淋巴轉(zhuǎn)移性患者中的陽性率為95.8%，在非淋巴轉(zhuǎn)移性患者中的陽性率為68.8%，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論ATM蛋白表達(dá)水平與早期食管癌病變及發(fā)展呈正相關(guān)，并與癌細(xì)胞分化程度、腫瘤分期及癌細(xì)胞淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示ATM蛋白參與早期食管癌的癌變發(fā)展機(jī)制。

ATM蛋白； 食管癌； 淋巴轉(zhuǎn)移

隨著不良生活方式、飲食習(xí)慣及環(huán)境污染廣泛流行，導(dǎo)致食管癌發(fā)病率逐年遞增。食管癌是指患者長期受危險因素刺激導(dǎo)致癌基因、抑癌基因及生長因子調(diào)控食管鱗狀上皮細(xì)胞或其他腺體細(xì)胞增殖和凋亡平衡紊亂，從而誘發(fā)縱向或浸潤性惡性腫瘤發(fā)生[1]。有關(guān)研究報道，我國主要以食管鱗癌為主，呈持續(xù)性發(fā)展，病死率高，與多危險因素、多基因突變密切相關(guān)。食管癌的臨床療效較差、患者生存率低及生活質(zhì)量差，這歸根于腫瘤確診期較晚、錯過最佳治療期、易通過淋巴循環(huán)轉(zhuǎn)移及癌變復(fù)發(fā)。隨著分子生物學(xué)從基礎(chǔ)水平上對食管癌的診斷研究發(fā)現(xiàn)ATM蛋白介導(dǎo)著食管癌的病發(fā)。ATM蛋白是共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張性癥突變基因，作為腫瘤抑制基因的修復(fù)因子，具有檢驗(yàn)DNA復(fù)制、修復(fù)損傷DNA及調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的增殖與凋亡[2]。對此，本研究將通過檢測ATM蛋白在早期食管癌和健康體檢者食管組織中的表達(dá)水平，探討ATM蛋白對于早期食管癌的臨床診斷價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2013年12月本院腫瘤科收入院治療的40例食管癌患者，其中男23例(57.50%)，女17例(42.50%)；年齡39.5～75.4歲，平均(48.4±6.1)歲；根據(jù)癌細(xì)胞分化程度分為高分化食管癌11例(27.50%)、中分化食管癌22例(55.00%)、低分化食管癌7例(17.50%)；根據(jù)癌組織浸潤程度，分為早期食管癌18例(45.00%)和進(jìn)展期食管癌22例(55.00%)；根據(jù)癌細(xì)胞淋巴轉(zhuǎn)移情況，分為轉(zhuǎn)移性食管癌24例(60.00%)和非轉(zhuǎn)移性食管癌16例(40.00%)。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重的心腦血管疾病，其他組織器官腫瘤、呼吸、免疫及內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病。另外選擇同期在本院進(jìn)行健康體檢的健康者40例作為對照，其中男22例(55%)，女18例(45%)；年齡39.8～75.1歲，平均(48.6±6.0)歲。兩組研究對象的性別、年齡等一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化法檢測 收集所有研究對象腸鏡下食管組織活檢標(biāo)本，應(yīng)用免疫組化法檢測食管癌組織及健康體檢者食管組織ATM蛋白表達(dá)水平。具體如下：所有標(biāo)本均經(jīng)脫蠟、水化、磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗；用新鮮配制的4%H2O2封閉滅活15 min，PBS沖洗后進(jìn)行微波修復(fù)；切片滴加家兔血清封閉液，于室溫靜置30 min后甩干剩余液；切片滴加一抗液每片50 μL，于4 ℃環(huán)境下放置10 h后利用二氨基聯(lián)苯胺(PBS)沖洗；切片滴加二抗液每片50 μL，于室溫靜置30 min后利用PBS沖洗，并切片滴加三抗液，于室溫靜置30 min后利用PBS沖洗；利用DAB顯色，并在顯微鏡下觀察顯色反應(yīng)，以蒸餾水沖洗終止反應(yīng)；Mayer蘇木素重復(fù)染色及蒸餾水洗，脫水、透明、封片、觀察及照相。

1.2.2 陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) ATM蛋白陽性反應(yīng)染色位于細(xì)胞核；顯微鏡觀察細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號。染色強(qiáng)度分為0～3分，其中細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核無著色評為0分，淺棕色評為1分，棕色評為2分，深棕色評為3分。胃黏膜細(xì)胞陽性率分為0～3分，其中無陽性細(xì)胞評為0分，<30%評為1分，30%～70%評為2分，>70%評為3分。染色強(qiáng)度與胃黏膜細(xì)胞陽性率的免疫組化法評分乘積總計分為0～6分，0～1分為陰性(-)，2～6分為陽性(+)；其中2～3分為(+)、4分為(++)、5～6分為(+++)[3]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以率表示，組間比較使用χ2檢驗(yàn)；以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ATM蛋白在食管癌和健康體檢者食管組織的表達(dá) ATM蛋白在40例食管癌組織中陽性率為85.0%，健康體檢者食管組織中陽性率為17.5%，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=35.675，P=0.003)。見表1。

2.2 ATM蛋白表達(dá)水平與癌細(xì)胞分化程度、癌變分期及淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系 高、中、低分化食管癌的ATM蛋白陽性率分別為62.6%、81.8%和100.0%，低分化食管癌的ATM蛋白陽性率顯著高于中、低分化食管癌的ATM蛋白陽性率(P<0.05)；早期食管癌的ATM蛋白陽性率為72.2%，進(jìn)展期食管癌的ATM蛋白陽性率為90.9%，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；ATM蛋白在淋巴轉(zhuǎn)移性患者中的陽性率為95.8%，在非淋巴轉(zhuǎn)移性患者中的陽性率為68.8%；兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 ATM蛋白在食管癌和健康體檢者食管組織的表達(dá)水平

注：與健康者食管組織相比，*χ2=35.675，P=0.003。

表2 ATM蛋白表達(dá)水平與癌細(xì)胞分化程度、癌變分期及淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系

3 討 論

早期食管癌的發(fā)生、發(fā)展與基因及蛋白質(zhì)的表達(dá)水平密切相關(guān)，食管癌抑癌基因表達(dá)水平降低，而癌基因表達(dá)水平升高，是導(dǎo)致食管病生發(fā)及發(fā)展的直接原因[4]。ATM蛋白作為抑癌基因復(fù)制增殖障礙的修復(fù)因子，屬于磷酸肌醇激酶的核心成員，其結(jié)構(gòu)調(diào)控著生理活性。王秋等[5]研究發(fā)現(xiàn)ATM 蛋白結(jié)構(gòu)受損則喪失對復(fù)制障礙DNA的修復(fù)能力，使受損DNA侵入食管鱗狀上皮細(xì)胞或其他腺體細(xì)胞，最終導(dǎo)致癌變腫瘤的發(fā)生。劉小群等[6]認(rèn)為ATM 蛋白結(jié)構(gòu)異常及活性降低，可顯著增加受檢者罹患食管癌的風(fēng)險。夏文進(jìn)等[7]研究ATM蛋白與惡性腫瘤發(fā)生的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，子宮癌組織 ATM 蛋白陽性率顯著高于健康體檢者的表達(dá)水平。本研究中，ATM蛋白在40例食管癌組織中陽性率為85.0%，健康體檢者食管組織中陽性率為17.5%，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；表明ATM蛋白表達(dá)水平與食管癌病變及發(fā)展呈正相關(guān)。李軍[8]研究發(fā)現(xiàn)，ATM蛋白表達(dá)水平與癌細(xì)胞分化程度、癌變分期及淋巴轉(zhuǎn)移存在臨床聯(lián)系。本研究顯示，低分化食管癌的ATM蛋白陽性率明顯高于中、低分化食管癌的ATM蛋白陽性率(P<0.05)；表明ATM蛋白表達(dá)水平與食管癌分化程度呈負(fù)相關(guān)。進(jìn)展期食管癌的ATM蛋白陽性率為90.9%，顯著高于早期食管癌的72.2%，提示ATM蛋白作為早期食管癌病變及發(fā)展的激動因子。ATM蛋白在淋巴轉(zhuǎn)移性患者中的陽性率為95.8%，明顯高于非淋巴轉(zhuǎn)移性的68.8%，提示 ATM蛋白表達(dá)水平具有介導(dǎo)食管癌細(xì)胞通過淋巴循環(huán)轉(zhuǎn)移的作用。

綜上所述，ATM蛋白表達(dá)水平與早期食管癌病變及發(fā)展呈正相關(guān)，并與癌細(xì)胞分化程度、腫瘤分期及癌細(xì)胞淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示ATM蛋白參與早期食管癌的癌變發(fā)展機(jī)制。

[1]樊衛(wèi)，韓笑，祁金友，等.ATM 蛋白在早期食管鱗癌組織中的表達(dá)及意義[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35(18):2430-2431.

[2]黃山麗.早期食管癌的臨床及病理分析和CXCL12、VEGF在食管鱗癌中的表達(dá)及意義[D].合肥：安徽醫(yī)科大學(xué)，2010.

[3]宋建元.ATM對AT細(xì)胞抗氧化損傷能力及細(xì)胞周期影響的研究[D].蘇州：蘇州大學(xué)，2007.

[4]祁金友，樊衛(wèi)，施成東，等.ATM基因單核苷酸多態(tài)性與食管癌易感性的研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8(11):1308-1309.

[5]王秋，折虹.ATM蛋白在宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2010，32(3):220-222.

[6]劉小群，陳偉，袁素娟，等.ATM蛋白激酶依賴性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究進(jìn)展[J].復(fù)旦學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2012，39(4):433-437.

[7]夏文進(jìn)，蘇丹，劉鵬，等.ATM基因單核苷酸多態(tài)性與非小細(xì)胞肺癌易感性的研究[J].中國癌癥雜志，2010，20(2):121-124.

[8]李軍.食管鱗癌外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測及臨床意義[D].廣州：南方醫(yī)科大學(xué)，2012.

江蘇省淮安市科學(xué)技術(shù)局支撐計劃發(fā)展(社會發(fā)展)項目(HAS2012017)。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.22.035

A

1672-9455(2015)22-3383-03

2015-03-25

2015-07-25)