李 慧，白利芬，惠玉芬，葉文瑞，雷光星，王興寧(延安大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西延安 716000)

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·論 著·

不同采血管在不同存放條件下對循環(huán)酶法同型半胱氨酸測定結(jié)果的影響*

李 慧，白利芬，惠玉芬，葉文瑞，雷光星，王興寧△
(延安大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西延安 716000)

目的 探討不同的血樣采集管，不同存放時(shí)間及不同存放溫度對同型半胱氨酸(Hcy)測定結(jié)果的影響。方法 選取32例健康體檢者，分別用普通真空采血管、促凝真空采血管、肝素鋰抗凝真空采血管、EDTA-K2抗凝真空采血管各抽取兩管靜脈血，將同一受檢者的相同采血管分別分入室溫組和冷藏組，編號并于室溫放置0.5 h離心，離心后立即將冷藏組置于冰箱，并檢測室溫組Hcy濃度；同時(shí)立刻吸取每例受檢者普通真空采血管及肝素鋰抗凝真空采血管血清及血漿200 μL于1 mL EP管并置于2～8 ℃冰箱冷藏保存，為分離組。在離心后3、6、9 h測定室溫組及冷藏組Hcy濃度，測定完成后選取冷藏組普通真空采血管及肝素鋰抗凝真空采血管繼續(xù)在冰箱中放置為未分離組，并在24、48 h測定分離組與未分離組Hcy濃度。結(jié)果 4種采血管標(biāo)本的Hcy即刻值血清標(biāo)本高于血漿標(biāo)本(P<0.05)。同組相同采血管放置3、6、9 h與各自即刻值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在相同測定時(shí)間比較同種采血管室溫組與冷藏組的Hcy濃度結(jié)果，9 h測定值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。不及時(shí)分離血細(xì)胞層，普通真空采血管血清和肝素鋰抗凝真空采血管血漿中Hcy濃度在2～8 ℃下，48 h結(jié)果與即刻值比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 不同的血樣采集管，不同存放時(shí)間及不同存放溫度都會影響循環(huán)酶法Hcy的測定結(jié)果。

同型半胱氨酸； 穩(wěn)定性； 采血管； 循環(huán)酶法

同型半胱氨酸(Hcy)，又稱高半胱氨酸。近年來發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)Hcy與心血管疾病、糖尿病[1]、老年癡呆和認(rèn)知障礙、妊娠并發(fā)癥等有聯(lián)系[2-4]。所以準(zhǔn)確測定Hcy的濃度有重要的臨床意義。但目前國內(nèi)外都沒有規(guī)定使用哪種血樣采集管能對Hcy準(zhǔn)確測定，而且對于標(biāo)本的存放條件也沒有明確的規(guī)定。本試驗(yàn)針對不同血樣采集管、不同存放條件對循環(huán)酶法Hcy測定結(jié)果的影響進(jìn)行研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月7日延安大學(xué)附屬醫(yī)院32例健康體檢者作為標(biāo)本來源，其中男15例，女17例，清晨空腹采血。

1.2 儀器與試劑 Hcy檢測采用循環(huán)酶法，使用美國Beckman DXC800全自動生化分析儀檢測，檢測試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品均由北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司提供。普通真空采血管、促凝真空采血管、肝素鋰抗凝真空采血管、乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝真空采血管均由上?？迫A檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司生產(chǎn)。

1.3 方法 分別用普通真空采血管、促凝真空采血管、肝素鋰抗凝真空采血管、EDTA-K2抗凝真空采血管各抽取每例體檢者兩管靜脈血，將同一受檢者的相同采血管分別分入室溫組和冷藏組，編號并于室溫放置0.5 h后以3 000 r/min離心15 min；離心后即刻檢測室溫組Hcy濃度，并將冷藏組置于2～8 ℃冰箱；同時(shí)立刻吸取每例受檢者普通真空采血管及肝素鋰抗凝真空采血管血清及血漿200 μL于1 mL EP管并置于2～8 ℃冰箱冷藏保存，為分離組。在離心后3、6、9 h測定室溫組及冷藏組Hcy濃度，測定完成后選取冷藏組普通真空采血管及肝素鋰抗凝真空采血管繼續(xù)在冰箱中放置為未分離組，并在24、48 h測定分離組與未分離組的Hcy濃度。

2 結(jié) 果

2.1 不同采血管、不同溫度放置不同時(shí)間的Hcy濃度測定結(jié)果

2.1.1 4種采血管Hcy濃度的比較 普通真空采血管分別與肝素鋰抗凝真空采血管、EDTA-K2抗凝真空采血管比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，促凝真空采血管分別與肝素鋰抗凝真空采血管、EDTA-K2抗凝真空采血管比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 4種不同采血管，不同溫度放置不同時(shí)間的Hcy濃度測定的比較±s，μmol/L)

注：與使用同一采血管同一測定時(shí)間所測得室溫組數(shù)值比較，*P>0.05，**P<0.05。

2.1.2 測定時(shí)間對Hcy濃度測定的影響(穩(wěn)定性分析) 對4種不同采血管3、6、9 h測定值與使用同種采血管測定的即刻值做F檢驗(yàn)，結(jié)果顯示(1)室溫：普通真空采血管、促凝真空采血管、肝素鋰抗凝真空采血管、EDTA-K2抗凝真空采血管測定結(jié)果差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(2)冷藏：普通真空采血管、促凝真空采血管、肝素鋰抗凝真空采血管、EDTA-K2抗凝真空采血管測定結(jié)果差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。4種不同采血管不同測定時(shí)間的結(jié)果與即刻值的比率結(jié)果見表2，結(jié)果顯示Hcy濃度呈時(shí)間依賴性增加。

2.1.3 存放溫度對Hcy濃度測定的影響 采用配對樣本t檢驗(yàn)，在相同測定時(shí)間比較相同采血管室溫組和冷藏組Hcy測定結(jié)果，結(jié)果在9 h時(shí)，普通真空采血管、促凝真空采血管、肝素鋰抗凝真空采血管、EDTA-K2抗凝真空采血管測定結(jié)果差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

表2 4種不同采血管，不同溫度放置不同時(shí)間測定值與各自即刻值比率結(jié)果(%)

表3 兩種采血管離心后血細(xì)胞分離與未分離在冷藏條件放置不同時(shí)間Hcy濃度比較±s，μmol/L)

注：與使用同一采血管所測即刻值比較，*P>0.05,**P<0.05。

2.2 分離與未分離血細(xì)胞層對Hcy濃度測定的影響 兩種采血管離心后血細(xì)胞分離與未分離在冷藏條件下放置不同時(shí)間的Hcy濃度測定結(jié)果見表3，對普通真空采血管未分離組24、48h測定值與即刻值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，48h測定值與即刻值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對肝素鋰抗凝真空采血管未分離組24、48h測定值與即刻值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),48h測定值與即刻值比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。采用配對樣本t檢驗(yàn)，比較相同采血管在同一測定時(shí)間分離組和未分離組的結(jié)果，24h時(shí)普通真空采血管、肝素鋰抗凝真空采血管的分離組和未分離組測定值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

3 討 論

人體內(nèi)Hcy的水平與心血管疾病密切相關(guān)。據(jù)調(diào)查，相當(dāng)大比例的人群面臨高Hcy血癥的危險(xiǎn)，因此必須要注意Hcy濃度測定的準(zhǔn)確性[5]。本次試驗(yàn)使用循環(huán)酶法測定Hcy濃度，Hcy測定的參考方法是高效液相色譜法(HPLC),但是其操作復(fù)雜，耗時(shí)且費(fèi)用較高[6]。循環(huán)酶法有多種優(yōu)點(diǎn)，能滿足大批量標(biāo)本的自動化檢測，并且與目前臨床上常用的測定Hcy濃度的熒光偏振免疫分析法(FPIA)結(jié)果一致[7]。

本次試驗(yàn)通過對4種不同的采血管比較，結(jié)果顯示使用肝素鋰抗凝真空采血管、EDTA-K2抗凝真空采血管與使用普通真空采血管和促凝真空采血管測定Hcy的結(jié)果之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即血清標(biāo)本測定的Hcy濃度明顯高于血漿標(biāo)本，可能與離心前從血液凝固到離心測定需一定時(shí)間，血細(xì)胞釋放Hcy到血清中有關(guān)[8]，也可能是血液凝固后釋放血小板因子到血清中，對Hcy測定產(chǎn)生干擾而導(dǎo)致假性增高。而血漿標(biāo)本測定的Hcy結(jié)果則與臨床實(shí)際較符合[9]。研究證明，即使是使用最佳方法制備的血清較血漿而言，其值也稍高[10]，并且血清標(biāo)本中可能有纖維蛋白遺留及分離過程中血液有形成分發(fā)生破壞等缺點(diǎn),推薦使用血漿標(biāo)本測定Hcy濃度。目前采用何種標(biāo)本類型測定Hcy濃度爭議較大，也有文獻(xiàn)證明可以用血清標(biāo)本測定Hcy濃度。若實(shí)驗(yàn)室使用血清測定Hcy濃度應(yīng)建立參考范圍。

Hcy可從血細(xì)胞釋放入血清或血漿，室溫下健康人體的Hcy水平每小時(shí)增高 5%～15%，這種增高與血液Hcy原水平無關(guān)[11]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示4種采血管在室溫或冷藏條件放置，3、6、9h測定值與即刻值相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但差異越來越大，9h內(nèi)Hcy濃度呈時(shí)間依賴性增加。臨床工作中應(yīng)盡快測定Hcy濃度，測定時(shí)間越晚，所測Hcy濃度可信度就越低。用相同采血管在3、6h測定Hcy濃度，比較室溫組與冷藏組結(jié)果差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而在9h測定Hcy濃度，比較室溫組與冷藏組結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，若標(biāo)本不能立即測定，需短時(shí)間保存，在2～8 ℃冰箱中存放比室溫條件下存放更穩(wěn)定,但不要超過9h。

對普通真空采血管和肝素鋰抗凝真空采血管，分離血細(xì)胞后48h測定Hcy值與即刻值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不分離血細(xì)胞48h測定Hcy濃度與即刻值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在24h比較相同采血管分離組和未分離組測定值，結(jié)果差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？赡苁且?yàn)椴环蛛x血細(xì)胞，血細(xì)胞中的Hcy逐漸釋放到血清及血漿中[12]。若某些醫(yī)療單位無檢測條件需將標(biāo)本送至專業(yè)檢測機(jī)構(gòu)測定Hcy濃度，或因某些特殊情況在24h以后測定Hcy濃度，建議分離血細(xì)胞層。分離細(xì)胞層后冷藏放置至少可以穩(wěn)定48h，而不分離細(xì)胞層冷藏放置，24h測定Hcy濃度與分離細(xì)胞層后測定結(jié)果比較，差異較大，48h測定Hcy濃度臨床意義已經(jīng)不明顯。

綜上所述，不同的血樣采集管、不同存放時(shí)間及不同存放溫度都會影響Hcy的測定結(jié)果，在測定過程中，應(yīng)積極采取恰當(dāng)措施，防止干擾臨床的診斷。

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Influence of different blood collection tubes and different storage conditions on results of homocysteine detection by enzymatic cycle method*

LIHui,BAILi-fen,HUIYu-fen,YEWen-rui,LEIGuang-xing,WANGXing-ning△
(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedHospitalofYan′anUniversity，Yan′an,Shaanxi716000，China)

Objective To study the influence of different blood sample collection tubes,different storage time and different storage temperatures on the results of homocysteine(Hcy) detection by enzymatic cycle assay.Methods The venous blood sample was collected from 32 individuals undergoing the healthy physical examination.The general vacuum blood collection tubes,procoagulant vacuum blood collection tubes,lithium heparin anticoagulation vacuum blood collection tubes and EDTA-K2anticoagulation vacuum blood collection tubes were respectively adopted to collect 2 tubes of venous blood for each kind of tube.The same blood tubes from the same person were divided into the room temperature group and the cold storage group respectively,centrifuged after giving serial number and storing for 0.5 h at the room temperature,Hcy in the room temperature group was detected at once,while the cold storage group was stored in the fridge;meanwhile 200 μL of serum and plasma were extracted from the general tube and lithium heparin anticoagulation tube and placed into 1 mL EP tube for storage in fridge at 2-8 ℃(separation group).The Hcy levels in the room temperature group and the cold storage group were detected at 3,6,9 h after centrifugation.After detection,the general tube and lithium heparin anticoagulation tube in the cold storage group were continuously placed in fridge(non-separation group).The Hcy levels in the separation group and the non-separation group were detected at 24,48 h.Results The serum Hcy instant values of 4 kinds of blood collection tube for serum specimen were significantly higher than those for plasma specimen(P<0.05).The Hcy levels had no statistically significant differences between the placing for 3,6,9 h by the same collection tube in the same group and the instant values(P>0.05).In the comparison of the Hcy detection results of the same blood collection tube at the same detection time between the room temperature group and the cold storage group,the detection value at 9 h had statistical difference(P<0.05).The Hcy levels at 48 h under 2-8 ℃ in the general tube serum and lithium heparin anticoagulation tube plasma without timely separating blood cell layers had statistical difference compared with the results detected at 48 h(P<0.05).Conclusion Different blood collection tubes,different storage time and different storage temperatures will affect the detection results of Hcy by enzymatic cycle assay.

homocysteine; stability; blood collection tubes; enzymatic cycle assay

國家高新技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)子課題(2011AA02A111)。

李慧，女，主管檢驗(yàn)師，本科，主要從事臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)研究?！?/p>

，E-mail:ydfywxn@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.22.002

A

1672-9455(2015)22-3294-03

2015-06-25

2015-09-10)