蘭亞婷,張洪瑞,向代軍,王成彬(解放軍總醫(yī)院臨床檢驗(yàn)科,北京 100853)

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·論 著·

中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白在慢性腎病新分期中的臨床意義*

蘭亞婷,張洪瑞,向代軍,王成彬△
(解放軍總醫(yī)院臨床檢驗(yàn)科,北京 100853)

目的 探討中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)在不同分期慢性腎病(CKD)中的臨床價(jià)值。方法 選取2012年5月至 2013年12月解放軍總醫(yī)院明確診斷為 CKD的患者 240例，按照美國(guó)腎臟病與透析患者生存質(zhì)量指導(dǎo)指南(K/DOQI)制訂的 CKD分期標(biāo)準(zhǔn)分為6組，即 CKD 1期組、 CKD 2期組、CKD 3a期組、CKD 3b期組、CKD 4期組、CKD 5期組，應(yīng)用膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定血液NGAL(sNGAL)濃度，對(duì)sNGAL在CKD中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行橫斷面研究。結(jié)果 在CKD各分期中，隨著病變程度的增加，eGFR的減少，sNGAL濃度呈明顯升高趨勢(shì)(P<0.01)。sNGAL與 eGFR呈明顯負(fù)相關(guān)(P<0.05)。sNGAL濃度在CKD 3b期組明顯高于CKD 3a期組(P<0.05)。 在ROC曲線分析中，診斷腎功能輕中度損傷時(shí)，血清標(biāo)本 sNGAL同 CysC、sβ2-MG曲線下面積相似(0.903、0.945、0.937)，在診斷腎功能輕度損傷中，血清sNGAL、CysC、sβ2-MG水平ROC曲線下面積相似(0.819、0.899、0.900)。sNGAL在CKD 3～5期的臨床診斷界值為CKD 3a期189.5 g/L、CKD 3b期222.0 g/L、CKD 4期259.0 g/L、CKD 5期317.5 g/L。結(jié)論 NGAL對(duì)CKD患者的腎損傷程度有一定的診斷價(jià)值。

中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白； 慢性腎?。?診斷

慢性腎臟疾病(CKD)已成為當(dāng)今世界日益嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一，多個(gè)流行病學(xué)調(diào)查研究顯示，CKD人群的患病率約為10.3%～16.3%，且呈逐年上升趨勢(shì)[1-3]。中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)最初是在中性粒細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)的一種小分子分泌性糖蛋白，正常生理?xiàng)l件下在人體的一些組織中低水平表達(dá)[4-5]。大量研究已證實(shí) NGAL是最具有應(yīng)用前景的急性腎損傷的早期標(biāo)志物[6-7]。最近有關(guān)NGAL在CKD中的意義也已經(jīng)受到很多學(xué)者的關(guān)注[8-9]，需要通過不斷深入的研究，進(jìn)一步地明確NGAL作為CKD的生物標(biāo)志物。本研究檢測(cè)不同分期的 CKD患者血漿NGAL水平，以明確 NGAL與腎臟損傷的相關(guān)關(guān)系，并評(píng)價(jià)NGAL作為CKD診斷標(biāo)志物的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年5月至2013年12月解放軍總醫(yī)院門診和住院患者中明確診斷為CKD的患者240例，其中男98例、女142例，年齡18～75歲、平均(43±14)歲。所有病例均符合2002年美國(guó)腎臟病與透析患者生存質(zhì)量指導(dǎo)指南(K/DOQI)制訂的 CKD臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)：腎臟損傷(病理學(xué)檢查異常或者有腎損害的指標(biāo)，包括血尿成分、影像學(xué)檢查異常)≥3個(gè)月，或者腎小球?yàn)V過率(GFR)<60 mL·min-1·(1.73 m2)-1持續(xù)3個(gè)月以上，有或無腎臟損傷的其他表現(xiàn)[10]。伴發(fā)肝功能異常、惡性腫瘤、甲狀腺患者、器官移植、免疫抑制治療、妊娠者、嚴(yán)重感染、透析患者排除在入選范圍外。240例CKD患者中慢性腎小球腎炎90例(活檢證實(shí)85例)，慢性間質(zhì)性腎炎44例，多囊腎病37例，糖尿病腎病12例，IgA腎病33例，膜性腎病11例，13例不明病因患者。

1.2 分組 根據(jù)2009 年以Levey等[11]參加的美國(guó)慢性腎臟病教育計(jì)劃(NKDEP)協(xié)作組發(fā)布的基于溯源到同位素稀釋質(zhì)譜法(ID-MS)的血清肌酐估算的腎小球?yàn)V過率(eGFR)估算的新方程，即CKD Epidemiology Collaboration(CKD-EPI)方程。將240例研究對(duì)象按照K/DOQI制定的CKD分期[12]分為6組，即CKD 1期組48例，其中男30例、女18例，平均(38.08±16.6)歲；CKD 2期組55例，其中男33例、女22例，平均(42.0±12.7)歲；CKD 3a期組25例，其中男15例、女10例，平均(42.5±10.4)歲；CKD 3b期組30例，其中男18例、女12例，平均(42.8±10.6)歲；CKD 4期組34例，其中男14例、女20例，平均(47.0±15.6)歲；CKD 5期組48例，其中男32例、女16例，平均(47.4±16.6)歲。

1.3 儀器與試劑 采用邁瑞 BS-380 全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定，試劑均由邁瑞公司提供；采用Roche Cobas 501全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血NGAL(sNGAL)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(Urea)、血清胱抑素C(Cys C)，所用試劑購自上?？迫A生物科技有限公司。使用西門子公司的BN-Ⅱ特種蛋白分析儀測(cè)定血β2-微球蛋白(sβ2-MG)，所用試劑為該公司生產(chǎn)的專用檢測(cè)試劑。

1.4 標(biāo)本采集與處理 清晨取靜脈血5 mL，4 ℃ 218×g離心10 min，取上清液，上清液再次4 ℃ 706×g離心10 min，取上清液，-80 ℃保存。

1.5 病歷資料收集 記錄患者的性別、年齡、身高、體質(zhì)量、住院號(hào)、病因及功能診斷、病程、收縮壓和舒張壓、血紅蛋白、尿量。血壓取患者入院當(dāng)日平靜、臥床所測(cè)數(shù)值(mm Hg)。血常規(guī)和生化指標(biāo)取患者入院后首次清晨空腹所測(cè)數(shù)值。

2 結(jié) 果

2.1 一般臨床指標(biāo)CKD不同分期患者的性別、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、血壓比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在CKD各分期中，隨著病變程度的增加，Scr、Urea、CysC、sβ2-MG、sNGAL濃度呈明顯升高趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 CKD患者一般臨床資料±s)或M(Q1～Q3)]

2.2 腎功能指標(biāo)與eGFR相關(guān)性比較 在單因素分析中，eGFR與sNGAL呈負(fù)相關(guān)(r=-0.739，P<0.01)，Cys C(r=-0.701,P<0.01),sβ2-MG(r=-0.649，P<0.01)，Urea(r=-0.68，P<0.01)。年齡、性別、BMI等與eGFR相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 sNGAL水平與腎功能檢測(cè)指標(biāo)在CKD 2～3期中的對(duì)比分析 CKD 3b期組只有sNGAL、Cys C、sβ2-MG 3個(gè)指標(biāo)的濃度明顯高于CKD2期組(P<0.05)，而這3個(gè)指標(biāo)在CKD 3a期組和CKD 2期組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。只有sNGAL濃度在CKD 3b期組高于CKD 3a期組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而其他指標(biāo)在兩組間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.4 sNGAL在CKD中的ROC曲線分析 ROC曲線分析用來評(píng)估檢測(cè)指標(biāo)在CKD損傷分級(jí)中的診斷性能。結(jié)果顯示，在診斷腎功能輕中度惡化中，即eGFR<60 mL·min-1·(1.73 m2)-1時(shí)，血漿標(biāo)本 sNGAL、 Cys C、sβ2-MG這3個(gè)指標(biāo)在ROC曲線下的面積(AUC)分別為0.908、0.945、0.937；在診斷腎功能輕度損害中，即eGRF 60～89 mL·min-1·(1.73 m2)-1vs.eGFR>90 mL·min-1·(1.73 m2)-1時(shí)，血漿標(biāo)本的 sNGAL、Cys C、sβ2-MG檢測(cè)指標(biāo)表現(xiàn)出相似的診斷性能，ROCAUC均處在0.8～0.9診斷價(jià)值中等階段。見表2。

表2 不同eGFR的NGAL、 Cys C、sβ2-MG的AUC[M(Q1～Q3)]

2.5 sNGAL 在CKD分期中的診斷閾值 以sNGAL水平作ROC曲線分析，結(jié)果顯示在各期中的AUC>0.81，診斷靈敏度大于71%，特異性大于87%，見表3。

表3 sNGAL在CKD分期中的診斷閾值

3 討 論

關(guān)于GFR大小的判斷，國(guó)際上公認(rèn)核素測(cè)量的GFR為“金標(biāo)準(zhǔn)”，但由于其操作極不方便，所以目前絕大部分文獻(xiàn)仍采用多參數(shù)計(jì)算法進(jìn)行計(jì)算GFR。在本研究中采用eGFR用于GFR的判斷，這也是國(guó)際通用的做法。

本研究相關(guān)性分析結(jié)果顯示sNGAL與eGFR呈明顯負(fù)相關(guān)(P<0.05)，這與Cys C、sβ2-MG、Urea與eGFR呈負(fù)相關(guān)一致。分析其原因可能是隨著炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、腎間質(zhì)的纖維化及腎小管上皮細(xì)胞損傷的加重，NGAL可能反饋性升高，以加速炎性細(xì)胞的凋亡、腎小管上皮細(xì)胞再生，減少腎小管上皮細(xì)胞表型的轉(zhuǎn)化，增加對(duì)腎損傷的保護(hù)，減輕病情[14-15]，同時(shí)Scr也會(huì)隨之增高，而GFR會(huì)逐漸下降。

新的國(guó)際腎病分期指南將3期分為3a期與3b期，3b期與心血管事件及腎病的快速進(jìn)展至終末期有較大的相關(guān)性，及時(shí)對(duì)3a、3b期的患者進(jìn)行治療，有利于腎病患者生存質(zhì)量的保障[16-18]。本研究中探討了sNGAL與腎功能檢測(cè)指標(biāo)在CKD 2、3a、3b期中的對(duì)比分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)sNGAL同Cys C、sβ2-MG的濃度在CKD 3b期組明顯高于CKD 2期組(P<0.05)，而這3個(gè)指標(biāo)在CKD 3a期組和CKD 2期組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說明血漿NGAL有可能成為區(qū)分CKD 3a、3b期的重要診斷指標(biāo)。

綜上所述，本次對(duì) NAGL在CKD中的作用進(jìn)行了橫斷面研究，研究表明檢測(cè)CKD患者的sNGAL水平可以反映腎小球?yàn)V過功能、腎小管間質(zhì)損傷程度、腎臟疾病的嚴(yán)重程度，是適用于CKD患者腎損傷程度判斷的診斷標(biāo)志物。

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Clinical significance of neutrophil gelatinase-associated lipocalin in new stages of chronic kidney disease*

LANYa-ting,ZHANGHong-rui,XIANGDai-jun,WANGCheng-bin△
(DepartmentofClinicalLaboratory,GeneralHospitalofPLA,Beijing100853,China)

Objective To explore the clinical value of the neutrophil gelatinase-associated lipocalin(NGAL) in different stages of chronic kidney disease(CKD).Methods According to the criteria of CKD stage formulated by KDOQI/KDIGO,240 patients with CKD in our hospital from May 2012 to December 2013 were divided into 6 groups including the CKD stage 1,2,3a,3b,4 and 5.The serum NGAL level was tested by the latex-enhanced immunoturbidimetric assay.The application value of sNGAL in CKD was performed the cross-sectional study.Results The NGAL level showed the significantly increasing trend with the increase of the CKD severity and the decline of the eGFR(P<0.01).The sNGAL level was negatively correlated with eGFR(P<0.05).The sNGAL level in the CKD 3b stage group was significantly higher than that in the CKD 3a stage group(P<0.05).In the ROC curve analysis,for diagnosing mild and moderate renal function impairment,serum sample sNGAL was similar to the areas under curve(AUC) of CysC and sβ2-MG(0.903,0.945,0.937),for diagnosing mild renal function impairment,serum sNGAL,CysC and sβ2-MG levels had similar AUC of ROC curve(0.819,0.899,0.900).The clinical diagnostic values of sNGAL were 189.5 g/L for CKD 3a stage,222.0 g/L for CKD 3b stage,259.0 g/L for CKD 4 stage and 317.5 g/L for CKD 5 stage.Conclusion NGAL has certain diagnostic value for the renal function impairment degree of CKD.

neutrophil gelatinase-associated lipocalin; chronic kidney disease; diagnosis

國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2013BAI17B05);全軍醫(yī)學(xué)技術(shù)研究“十二五”重大專項(xiàng)研究課題(AWS11Z005-4)。

蘭亞婷，女，主管技師，本科，主要從事臨床檢驗(yàn)工作。△

，E-mail:wangcb301@126.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.22.001

A

1672-9455(2015)22-3291-03

2015-05-13

2015-09-01)