龔 婭，何宗忠，王曉冬，史秋霞，林林東(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院157分院檢驗科，廣州 510510)

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·論 著·

自制混合血漿在血漿糾正試驗中的臨床應(yīng)用初探

龔 婭，何宗忠△，王曉冬，史秋霞，林林東(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院157分院檢驗科，廣州 510510)

目的 通過比較不同溫度保存的自制混合血漿與正?；旌涎獫{對血漿糾正試驗的影響，探討自制混合血漿在血漿糾正試驗中的臨床應(yīng)用價值。方法 收集凝血酶原時間(PT)≥18.0 s和(或)活化部分凝血活酶時間(APTT)≥52.0 s的血漿標本35份，分別與正?；旌涎獫{(A組)、-80 ℃(B組)和-20 ℃(C組)保存的自制混合血漿按體積1∶1混合后做血漿糾正試驗，即混合后立即測定PT和(或)APTT，37 ℃孵育1 h后再次檢測。計算35份標本可被正常混合血漿糾正的比例及3組的糾正率。結(jié)果 88.57%(31/35)可被正?；旌涎獫{立即糾正，4例未被糾正，其中1例孵育后比孵育前測定時間更加延長，占2.86%；3例孵育前后測定結(jié)果不變，占8.57%。在PT延長的血漿糾正試驗中，各組之間糾正率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在APTT延長的糾正試驗中，孵育前A組、B組和C組的糾正率分別為(32.93±16.17)%、(27.56±23.48)%和(13.70±12.87)%，A組和B組之間糾正率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，其余各組之間糾正率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論 -80 ℃保存的自制混合血漿可代替商品化的正?；旌涎獫{進行血漿糾正試驗。

正?；旌涎獫{； 血漿糾正試驗； 凝血酶原時間； 活化部分凝血活酶時間

臨床上常遇到凝血酶原時間(PT)和(或)活化部分凝血活酶時間(APTT)延長(PT延長超過3 s，APTT≥1.3倍正常參考值)的患者，其原因有可能為凝血因子缺乏、存在特異性的抗凝血因子或非特異性抗凝物質(zhì)(如磷脂抗體或副蛋白)等[1-2]。臨床上可表現(xiàn)為以凝血因子缺乏為主的出血傾向和存在狼瘡抗凝物質(zhì)的血栓形成傾向，這2種不同傾向采取的治療方案也不相同。在經(jīng)濟發(fā)達國家或地區(qū)可以采取檢測具體的凝血因子、特異性或非特異性抗凝物質(zhì)等進一步加以確認，但基層單位往往由于費用昂貴而無力開展，為此筆者選取2015年1～3月本院收治的PT≥18.0 s或APTT≥52.0 s且滿足凝血酶時間(TT)正常和纖維蛋白原(FIB)≥2.0 g/L的患者的異常血漿35份，分別與正?；旌涎獫{、-80與-20 ℃保存的自制混合血漿按體積1∶1混合后立即檢測PT和(或)APTT，接著37 ℃孵育1 h后再次檢測，然后統(tǒng)計分析以探討自制混合血漿應(yīng)用于血漿糾正試驗的臨床應(yīng)用價值，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1～3月本院收治的PT和(或)APTT延長的35例血漿標本，其中男15例，女20例；標本來源手術(shù)科室12例，非手術(shù)科室23例；年齡3～88歲，平均(58.31±20.45)歲；其中單獨PT延長10例、單獨APTT延長11例、二者均延長14例。納入標準：PT≥18.0 s 或APTT≥52.0 s且滿足TT正常和FIB≥2.0 g/L。

1.2 方法

1.2.1 采集方法 0.109 mol/L枸櫞酸鈉抗凝真空采血管(BD公司)采血至1.8 mL刻度線，充分搖勻，以3 000 r/min離心10 min，取血漿分別檢測PT、APTT、TT、FIB。

1.2.2 儀器與試劑 全自動血凝分析儀為法國STAGO公司Stago-compact。正?；旌涎獫{(批號111289)、PT(批號112094)、APTT(批號112290)、TT(批號112003)、FIB(批號112342)均為廠家配套原裝試劑，室內(nèi)質(zhì)控品與定標品由STAGO公司提供，均嚴格按照說明書操作，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。所有標本均為室內(nèi)質(zhì)控在控的狀態(tài)下檢測。

1.2.3 自制混合血漿 收集PT、APTT、FIB、TT 4項結(jié)果均處于正常范圍的20份以上無溶血、黃疸及脂濁的非孕婦血漿標本，充分混勻后以3 000 r/min離心10 min，棄底部血漿[3]；取0.8 mL上層血漿測定PT、APTT、FIB、TT，以確保4項結(jié)果均在正常范圍內(nèi)，37 ℃水浴1 h后再次檢測4項指標均正常。取上層血漿分成2份，分別放置-80與-20 ℃冰箱保存以備后續(xù)試驗。

1.2.4 血漿糾正試驗 各取200 μL的異常血漿分別與200 μL的正?；旌涎獫{(A組)、-80 ℃保存的自制混合血漿(B組)、-20 ℃保存的自制混合血漿(C組)充分混合后立即測定PT和(或)APTT，水浴1 h后再次測定PT和(或)APTT。

1.2.5 血漿糾正率的計算 血漿糾正率(%)=(糾正前的測定值-糾正后的測定值)/糾正前的測定值×100%。

2 結(jié) 果

2.1 血漿糾正試驗檢測結(jié)果構(gòu)成比 88.57%(31/35)可被正常血漿立即糾正，提示可能存在凝血因子缺乏；2.86%(1/35)不能被糾正且孵育后較孵育前測定時間更長，提示受檢血漿中可能存在特異性抗凝血因子抗體；8.57%(3/35)不能被立即糾正且孵育前后測定結(jié)果不變，提示血漿中可能有磷脂抗體或副蛋白等非特異性抗凝物質(zhì)。

表1 血漿糾正試驗結(jié)果±s)

注：與A組比較，*P<0.05；與B組比較，#P<0.05。

2.2 正常混合血漿與自制混合血漿在血漿糾正試驗中的結(jié)果比較 在PT延長的血漿糾正試驗中各組之間糾正率差異無統(tǒng)計學意義(P=0.395)。在APTT延長的糾正試驗中，孵育前A組、B組和C組的糾正率分別為(32.93±16.17)%、(27.56±23.48)%和(13.70±12.87)%，A組和B組糾正率接近，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.436)，A組和C組之間及B組和C組之間糾正率差異有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.005和0.028)。見表1。

3 討 論

PT和(或)APTT延長的原因非常多，如采血時抗凝劑與血液標本比例差異、抗凝藥物治療、各種慢性肝病、彌散性血管內(nèi)凝血、凝血因子Ⅻ缺乏、狼瘡抗凝物陽性、蛋白C缺乏、維生素K依賴性因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅺ及Ⅹ的聯(lián)合缺乏等[4-6]。具體的凝血因子、維生素K、蛋白C、狼瘡因子等檢測對判斷出血傾向或血栓形成傾向具有重要臨床意義，但設(shè)備和檢測條件等限制了大多數(shù)的醫(yī)療單位無法開展較為全面的原因分析，影響了臨床應(yīng)用，探索經(jīng)濟實用的方法就尤為重要。分析PT和(或)APTT延長的原因，血漿糾正試驗是一個重要方法，可提示是否缺乏凝血因子、存在特異性的抗凝血因子抗體或非特異性抗凝物質(zhì)(如磷脂抗體或副蛋白)等。

研究結(jié)果表明，88.57%PT和(或)APTT延長的患者可能存在凝血因子缺乏，遠遠高于北京協(xié)和醫(yī)院郭夢妮[1]統(tǒng)計的數(shù)據(jù)，而非特異性抗凝物質(zhì)遠遠低于Chng等[7]報道的數(shù)據(jù)，可能與本次的研究對象中無自身免疫性疾病患者有關(guān)。在PT延長的血漿糾正試驗中，其糾正率的差異在各組之間差異無統(tǒng)計學意義，表明自制混合血漿可以替代正?；旌涎獫{進行PT延長的血漿糾正試驗。在APTT延長的糾正試驗中，-80 ℃冰箱保存的自制混合血漿其糾正率雖低于正常混合血漿，但差異無統(tǒng)計學意義；-20 ℃保存的自制混合血漿其糾正率明顯低于正?；旌涎獫{與-80 ℃保存的自制混合血漿，其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，表明-20 ℃保存的自制混合血漿不能代替正?；旌涎獫{，其糾正效果也不如-80 ℃深凍冰箱保存的自制混合血漿。常規(guī)凝血指標的檢測宜在采血后1 h內(nèi)完成，置-20 ℃下僅能放置2周，-70 ℃條件下可放置6個月，而-80 ℃深凍冰箱保存則可維持新鮮冰凍血漿的凝血性質(zhì)等同于新鮮血漿，保證凝血因子、抗凝物質(zhì)的活性，可至少穩(wěn)定8個月[8]。本研究也證實了保存溫度越低，凝血因子的促凝活性保持時間也越長，與文獻[9]報道一致。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，-20 ℃冰箱保存的自制混合血漿可用于PT的血漿糾正試驗而不能用于APTT的糾正試驗，這可能與Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ因子為內(nèi)源性凝血途徑的關(guān)鍵因子，而這些因子在不同的保存條件下其活性變化也非常大有關(guān)。Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ等因子隨放置溫度升高、時間延長，其活性呈下降趨勢，尤其是Ⅷ因子最不穩(wěn)定[10]。數(shù)據(jù)顯示Ⅷ因子在-80 ℃超低溫保存能維持1個月以上，而-20 ℃條件下僅能保持1 d，室溫僅能維持2 h，置20 ℃的室溫12 h后其活性降至43%，24 h后則僅有30%，極易失去活性[11]。另外，-80 ℃保存的自制混合血漿雖可代替商品化的正?；旌涎獫{進行APTT血漿糾正試驗，但糾正效果不如商品化的正?；旌涎獫{，這可能是-80 ℃超低溫雖然可以有效保持某些因子活性，但不如廠商采用凍干的方式保存更有效。

綜上所述，建議優(yōu)先使用商品化的正?；旌涎獫{用于血漿糾正試驗，其次使用置-80 ℃冰箱保存的自制混合血漿，不建議使用-20 ℃冰箱保存的自制混合血漿?？傊?，-80 ℃保存的自制混合血漿，使用方便，價格低廉，且不需要配置特殊設(shè)備，適合在基層實驗室推廣使用。

[1]郭夢妮.北京協(xié)和醫(yī)院住院患者凝血四項異常原因分析[D].北京:北京協(xié)和醫(yī)學院臨床學院,2013.

[2]彭黎明,鄧承祺.現(xiàn)代血栓與止血的實驗室檢測及應(yīng)用[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2004:146-147.

[3]華麗姿.自制凝血質(zhì)控物穩(wěn)定性及復(fù)融方式探討[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2013,10(10):1299-1301.

[4]白轟,廖君群,賴曉霏.不同比例抗凝劑對凝血4項檢測結(jié)果的影響[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2013,10(23):3174-3175.

[5]孫磊.凝血酶原時間和活化部分凝血活酶時間測定的問題[J].中國醫(yī)藥指南,2013,11(5):177-178.

[6]唐金鳳，陳先春，鐘磊，等.血漿凝血因子Ⅴ、Ⅷ及蛋白C活性與下肢深靜脈血栓形成的相關(guān)性[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2015,33(1):103-105.

[7]Chng WJ,Sum C,Kuperan P.Causes of isolated prolonged activated partial thromboplastin time in an acute care general hospital[J].Singapore Med J,2005,46(9):450-456.

[8]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版．南京：東南大學出版社，2006:211-215.

[9]平竹仙,孫武,蔣紅君,等.自制凝血室內(nèi)質(zhì)控品的使用與評估[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2014,35(20):2841-2842.

[10]叢玉隆,殷宗建,張立文,等.貧血、血栓及遺傳學檢驗技術(shù)與臨床[M].天津：天津科學技術(shù)出版社，2002:156-157.

[11]尚紅，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].4版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2015:86-92.

Preliminary investigation on clinical application of homemade mixed plasma in plasma correcting test

GONGYa,HEZong-zhong△,WANGXiao-dong,SHIQiu-xia,LINLin-dong

(DepartmentofClinicalLaboratory,157BranchHospital,GuangzhouGeneralHospitalofGuangzhouMilitaryRegion,Guangzhou,Guangdong510510,China)

Objective To explore the clinical application value of homemade plasma in the plasma correct test by comparing the influence of normal mixture plasma and homemade plasma storage at different temperatures.Methods 35 plasma samples of prothrombin time(PT)≥18.0 s and/or activated partial thromboplastin time (APTT)≥52.0 s were collected and mixed with the normal mixture plasma(group A),homemade plasma stored at -80 ℃(group B) and -20 ℃ (group C) with the proportion of 1∶1 respectively,then PT and APTT were tested immediately,and retested after 37 ℃ incubating for 1 h,finally the correcting proportion in 35 samples and the correct ratio of these three groups were calculated.Results In the 35 cases of PT and/or APTT prolongation,31 cases (88.57%) could be corrected by the normal mixture plasma and 4 cases were not corrected,among them,the detection time after incubation in 1 case(2.86%) was prolonged than that before incubation,and the detection results before and after incubation in 3 cases were unchanged,accounting for 8.57%.In the PT prolonged correction test,there was no statistical difference in the correct ratio among 3 groups (P>0.05).In the APTT prolonged correction test,the correcting ratios before incubation in the group A,B and C were (32.93±16.17)%,(27.56±23.48)% and (13.70±12.87)% respectively,there was no statistical difference in the correct ratio between the group A and B (P>0.05),which in the other groups had statistical difference(P<0.05).Conclusion The homemade plasma stored at -80 ℃ can replace the commercialization normal mixture plasma for conducting the plasma correcting test.

normal mixture plasma; plasma correcting test; prothrombin time; activated partial thromboplastin time

龔婭，女，主管技師，碩士，主要從事臨床檢驗工作?！?/p>

，E-mail:zongzhong1107@aliyun.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.16.023

A

1672-9455(2015)16-2357-02

2015-02-12

2015-04-15)