王珊珊，羅海忠，李偉業(yè)

(1．浙江海洋學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，浙江舟山316022;2．舟山市水產(chǎn)研究所，浙江舟山316003)

棘頰雀鯛(Premnas biaculeatus)，隸屬鱸形目(Perciformes)、雀鯛科(Pomacentridae)、棘頰雀鯛屬(Premna)，俗名透紅小丑，體長(zhǎng)10～15 cm，全身紫褐色，與?？采４祟愻~身上有1條或2條白色條紋，好似京劇中的丑角，所以俗稱“小丑魚”，大多生活在印度洋和太平洋較溫暖的水域，因其美麗的外觀而被人們列為觀賞魚類。

目前已知小丑魚有28種，1種來(lái)自棘頰雀鯛屬(Premnas)，其余來(lái)自雙鋸魚屬(Amphiprion)，棘頰雀鯛為棘頰雀鯛屬中唯一的一個(gè)種［1］。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者主要對(duì)二線小丑［2］、紅小丑［3］、眼斑雙鋸魚［4］、克氏雙鋸魚［5－6］等的生理生態(tài)、人工繁育及卵徑與季節(jié)變化之間的關(guān)系、幼魚人工養(yǎng)殖中飼料投喂［7］及規(guī)?；庇?］等進(jìn)行研究。國(guó)內(nèi)對(duì)棘頰雀鯛的研究報(bào)道并不多，鮑鷹等［1］研究光照、溫度和餌料等對(duì)棘頰雀鯛的人工繁育的影響，但關(guān)于棘頰雀鯛胚胎發(fā)育的形態(tài)學(xué)觀察迄今尚未見報(bào)道。筆者研究了棘頰雀鯛的胚胎發(fā)育過(guò)程，以期掌握其發(fā)育特點(diǎn)和生理生態(tài)條件，為棘頰雀鯛人工育苗生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 親魚的飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在舟山市水產(chǎn)研究所進(jìn)行，試驗(yàn)所用親魚從印尼引進(jìn)并配對(duì)成功，親魚在循環(huán)水過(guò)濾系統(tǒng)魚缸中飼養(yǎng)，鹽度為20‰～25‰，每天換水20%，缸中放有瓦罐供親魚的受精卵附著，親魚養(yǎng)殖水溫為(26±1)℃，水溫通過(guò)循環(huán)系統(tǒng)中的加熱棒控制。每天光照14 h，黑暗10 h，每天8:00、10:00、14:00、16:00 投喂鮮蟶肉糜4 次。

1．2 胚胎發(fā)育觀察 親魚通常于上午9:00～11:00產(chǎn)卵，約15～21 d產(chǎn)卵1次，親魚出現(xiàn)產(chǎn)卵行為時(shí)，進(jìn)行不間斷觀察，待親魚產(chǎn)卵結(jié)束后立即將附有受精卵的瓦罐拿出放在另一個(gè)循環(huán)水系統(tǒng)中放入氣石，模擬親魚孵化環(huán)境，水質(zhì)水溫條件與親魚孵化環(huán)境一致。產(chǎn)卵當(dāng)天每0．5 h取樣1次，每次隨機(jī)取樣10粒，其發(fā)育期以超50%胚胎達(dá)到該發(fā)育時(shí)期的時(shí)間為準(zhǔn)。囊胚期前每隔20 min取樣1次，囊胚期以后每2 h觀察1次，原腸期以后每隔5 h觀察1次。測(cè)量胚胎發(fā)育各階段的卵徑，記錄胚胎發(fā)育各階段的時(shí)間和主要特征。

2 結(jié)果與分析

棘頰雀鯛胚胎發(fā)育在水溫26℃，鹽度20‰條件下歷時(shí)154 h，初孵仔魚全長(zhǎng)(3．66±0．11)mm。據(jù)其胚胎發(fā)育過(guò)程的形態(tài)特征可分為10個(gè)階段:卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原腸期、神經(jīng)胚期、體節(jié)期、翻轉(zhuǎn)期、血管形成期、器官形成期、孵化期(表1)。

2．1 卵裂前期 棘頰雀鯛受精卵呈橢圓形，受精卵內(nèi)有1個(gè)大小油球不均勻分布。棘頰雀鯛受精卵呈橢圓形，屬于黏性卵，呈橙紅色，卵徑1．99 mm，卵膜有彈性，顯微鏡下可見受精卵動(dòng)物極一端有纖維狀附著絲，附著在瓦罐上。卵內(nèi)無(wú)數(shù)個(gè)油球，大小油球呈不規(guī)則分布，油球接近于植物極一端。受精1 h后胚盤形成于動(dòng)物極，可見靠近動(dòng)物極的細(xì)小油球向植物極移動(dòng)，顯微鏡下可見胚盤如帽狀(圖1a)。

2．2 卵裂期 受精后2 h開始進(jìn)入細(xì)胞分裂期，細(xì)胞分裂于動(dòng)物極，胚盤頂部中央產(chǎn)生裂痕，裂痕逐漸加深成為一道裂溝，并能見到細(xì)胞分裂為二，此時(shí)為2細(xì)胞期(圖1b)。受精2 h后胚盤又一道裂溝出現(xiàn)，并與第一道裂溝垂直，胚盤被分成4份，形成4個(gè)大小相似的細(xì)胞，此時(shí)為4細(xì)胞期(圖1c)。2．5 h后胚盤處出現(xiàn)與第1次分裂溝平行的又一分裂溝，胚盤分裂成為8個(gè)細(xì)胞，此時(shí)進(jìn)入8細(xì)胞期(圖1d)。3 h后進(jìn)行第4次卵裂，分裂溝與第2次分裂溝平行形成，將胚盤分成16個(gè)細(xì)胞，為16細(xì)胞期，此時(shí)各細(xì)胞大小一致(圖1e)。進(jìn)入32細(xì)胞期后各細(xì)胞隨著分裂的增多而逐漸變小并不規(guī)則排列，逐漸分辨不清細(xì)胞個(gè)數(shù)。達(dá)到64細(xì)胞期后細(xì)胞多至重疊，排列為2層。此時(shí)卵裂期結(jié)束，即將進(jìn)入囊胚期(圖1f)。

表1 棘頰雀鯛胚胎發(fā)育的各時(shí)期特征

2．3 囊胚期 受精卵受精4 h后，細(xì)胞分裂至無(wú)法計(jì)數(shù)呈帽狀堆積在胚盤上，逐漸與卵黃頂部形成腔，為囊胚腔。囊胚腔的高度約為卵黃的1/4，各細(xì)胞間隙還可分辨出。此時(shí)為囊胚早期(圖1g)。隨著細(xì)胞的繼續(xù)分裂，囊胚高度降低。囊胚腔逐漸向卵黃部分降低，至囊胚腔內(nèi)見無(wú)數(shù)小細(xì)胞的界限無(wú)法分清，當(dāng)受精卵發(fā)育至5．5 h時(shí)囊胚腔向卵黃部分降低的囊胚開始下包(圖1h)，囊胚期結(jié)束。

2．4 原腸期 受精后12 h胚盤部分逐漸向卵黃下部包裹，當(dāng)下包至卵黃1/4位置時(shí)可見胚環(huán)，此時(shí)已達(dá)到原腸早期(圖1i)。此時(shí)胚層繼續(xù)下包并內(nèi)卷，當(dāng)下包達(dá)至卵徑的1/3時(shí)可見胚環(huán)，胚環(huán)的一側(cè)出現(xiàn)胚盾，顯微鏡下從側(cè)面觀看猶如膠囊般，油球數(shù)量也明顯減少(圖1j)，胚體外觀由橙紅色變?yōu)槌赛S色，為原腸中期。當(dāng)胚層下包至3/5或3/4時(shí)，植物極卵黃被包圍，形成外胚膜，進(jìn)入原腸晚期(圖1k)。

2．5 神經(jīng)胚期 受精20 h后，胚層下包至卵黃4/5胚體背面神經(jīng)板形成，可見一條脊索在中央緊貼在卵黃上(圖1l)，胚盤逐漸下包收縮形成胚孔，隨后胚層繼續(xù)下包，當(dāng)植物極大部分被包裹，僅末端一小部分露在外面，卵黃上部形成腦泡(圖1m)，胚體頭部出現(xiàn)在動(dòng)物極。當(dāng)卵黃全部被包圍，胚孔閉合，胚體在卵黃上清晰可見，頭部出現(xiàn)雛形，，但未有體節(jié)出現(xiàn)(圖1n)，此時(shí)受精卵外觀呈紅棕色。

2．6 體節(jié)期 受精后22 h，視泡出現(xiàn)，體節(jié)出現(xiàn)，體節(jié)最先出現(xiàn)在胚體中部(圖1o)，隨后慢慢增多，同時(shí)也在漸漸清晰，觀測(cè)較為容易(圖1p)，當(dāng)體節(jié)達(dá)到25對(duì)時(shí)胚體外膜出現(xiàn)少量黑色素細(xì)胞，素點(diǎn)較小，因此受精卵外觀開始變成深紅棕色，同時(shí)卵黃開始變小，油球數(shù)量繼續(xù)變小。

2．7 翻轉(zhuǎn)期 受精后28 h胚體尾部清晰可見，胚體變長(zhǎng)，有尾鰭形成，尾部漸漸離開卵黃，尾后端偶爾出現(xiàn)微弱肌肉收縮，胚體頭部開始由動(dòng)物極向植物極翻轉(zhuǎn)趨勢(shì)，視杯形成，眼囊可見，眼珠形成但不透明。受精后42 h出現(xiàn)心跳，心跳頻率為80次/min，胚體頭部翻轉(zhuǎn)至卵黃1/3處(圖1q)，黑色素增多、變大，此時(shí)受精卵外觀呈棕色，外觀上可見黑色素。受精后45 h，胚體頭部翻轉(zhuǎn)至卵黃3/5處，尾部與卵黃游離，游離部分達(dá)胚體的1/4，胚體在卵膜內(nèi)不斷抽動(dòng)，卵黃變小，卵黃油球數(shù)量繼續(xù)變少，剩下部分較大油球(圖1r)。受精后48 h胚體頭部轉(zhuǎn)向植物極，標(biāo)志著翻轉(zhuǎn)期結(jié)束(圖1s)。

2．8 血管形成期 此時(shí)心跳達(dá)到150次/min左右，視泡變大，眼囊中出現(xiàn)黑色晶體，胚體黑色素明顯增多，受精卵外觀呈深棕色，此時(shí)在顯微鏡下可見到血液循環(huán)，卵黃外血管較粗，胚內(nèi)血管較細(xì)。血液由心臟流出經(jīng)腦部至尾基，再由尾基反流回胚體，由于胚體與卵黃連接，因此血液流經(jīng)卵黃囊表面的血管，然后到卵黃囊表面半周，最后再流回心臟(圖1t)。

2．9 器官形成期 受精后72 h，眼鏡、肌節(jié)、耳石、腦泡和心臟等器官已見雛形，眼睛發(fā)亮，心跳加快，卵黃迅速變小，胚體在卵內(nèi)扭動(dòng)次數(shù)頻繁，黑色素細(xì)胞在逐漸消失(圖1u)，因此受精卵外觀顏色逐漸變淺，由深棕色變?yōu)樽攸S色，個(gè)別卵粒有破膜現(xiàn)象，破膜多半是通過(guò)尾部掙脫卵膜而出，破膜后12 h內(nèi)死亡。通過(guò)對(duì)破膜卵粒的觀察所見胸鰭、臀鰭、尾鰭和背鰭都已發(fā)育完全。

2．10 孵化期 孵化前1 d，黑色素細(xì)胞已消失剩下很小的色素點(diǎn)，因此受精卵外觀由之前的棕黃色變?yōu)橥该鳎l(fā)亮的眼睛在受精卵外觀可明顯看出，胚體在卵內(nèi)占據(jù)大部分空間(圖1v)，心跳達(dá)到180次/min。孵化一般在天黑后進(jìn)行，胚胎分泌孵化酶將卵膜溶解，胚體破膜而出。仔魚全長(zhǎng)3．60～3．80 mm，身體透明(圖1w ～x)。

3 討論

3．1 受精卵的胚胎發(fā)育特征 棘頰雀鯛受精卵屬端黃卵盤狀分裂，同大多數(shù)真骨骨魚類類似［9］。受精卵屬黏性卵，較光滑呈橢圓形，具有油球，油球大小不一，不均勻分布在受精卵內(nèi)，有附著絲，附著于產(chǎn)卵基上，其特征同慈鯛科盤麗［10］、七彩神仙魚［11］的受精卵比較相似。棘頰雀鯛受精卵徑1．99 mm，比棘鯛科黑棘鯛［9］(0．84 ～0．98 mm)和鯛科金頭鯛［12］(0．82 ～0．92 mm)卵徑長(zhǎng)，比麗魚科的尼羅羅非魚［13］受精卵卵徑(2．06 ～ 2．40 mm)短，較慈鯛科盤麗［10］(1．02 ～ 1．14 mm)和七彩神仙魚［11］(1．51 ±0．3 mm)相似，導(dǎo)致棘頰雀鯛受精卵與慈鯛科魚類相似的原因有待研究。

圖1 棘頰雀鯛胚胎發(fā)育的各時(shí)期特征

3．2 受精卵的顏色變化 受精卵外觀顏色在體節(jié)期、器官形成期和孵化期的變化較為明顯，因?yàn)榕唧w在發(fā)育至體節(jié)期時(shí)胚體黑色素細(xì)胞不斷沉積［14］，導(dǎo)致受精卵外觀顏色加深，變?yōu)榧t棕色。胚體在翻轉(zhuǎn)的同時(shí)眼的黑色素也在增多，因此受精卵在血管形成期胚體已完全翻轉(zhuǎn)至植物極，眼的黑色素已形成，此時(shí)受精卵外觀變至深棕色。當(dāng)器官發(fā)育完全后，胚體中的黑色素逐漸消失，受精卵內(nèi)卵黃在減小，此時(shí)其顏色又逐漸轉(zhuǎn)變成棕黃色。在孵化期，一方面卵黃大部分被吸收并急劇減小，受精卵內(nèi)被膨大的胚體充盈，另一方面胚體眼部發(fā)育成熟，晶體出現(xiàn)，在此情況下受精卵的外觀呈透明色，見受精卵內(nèi)部閃閃發(fā)亮?xí)r，既是孵化期的即將結(jié)束。通過(guò)對(duì)受精卵顏色變化的觀察可作為判斷為判斷孵化時(shí)間的標(biāo)志，為此可為人工育苗生產(chǎn)中判斷胚胎發(fā)育的時(shí)期作為參照。

3．3 受精卵的胚胎發(fā)育時(shí)間 不同魚類受精卵的胚胎發(fā)育時(shí)間不同，棘頰雀鯛受精卵發(fā)育時(shí)間較大多數(shù)海水魚類長(zhǎng)，如斑鱾［15］胚胎發(fā)育時(shí)長(zhǎng)為28～29 h、雙棘黃姑魚［16］胚胎發(fā)育時(shí)長(zhǎng)為19．2 h。該試驗(yàn)在水溫(26±1)℃下在歷時(shí)154 h完成整個(gè)胚胎發(fā)育過(guò)程。其他雙鋸魚屬于小丑魚，海葵雙鋸魚［17］發(fā)育時(shí)間為 151～152 h。紅小丑［3］發(fā)育時(shí)間為 216～240 h。眼斑雙鋸魚［4］發(fā)育時(shí)間為180 ～200 h;二線小丑魚［2］胚胎發(fā)育時(shí)間為176 h。5種小丑魚中，棘頰雀鯛受精卵和發(fā)育時(shí)間與二線小丑魚相近。

該試驗(yàn)過(guò)程中棘頰雀鯛受精卵在水溫(26±1)℃下歷時(shí)154 h完成整個(gè)胚胎發(fā)育過(guò)程，水溫25℃下胚胎發(fā)育歷時(shí)178 h，可見在一定溫度范圍內(nèi)溫度越高，胚胎發(fā)育時(shí)間越短，這也驗(yàn)證了大部分魚類胚胎發(fā)育時(shí)間大多與水溫有關(guān)［14］。

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