徐麗超,吳英杰

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003)

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子宮內(nèi)膜樣腺癌中PTEN、MDM2表達(dá)及臨床意義①

徐麗超,吳英杰

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003)

目的：研究和探索子宮內(nèi)膜樣腺癌中PTENMDM2表達(dá)及臨床意義。方法：以佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院2009-11～2014-11存檔病例中121例子宮內(nèi)膜標(biāo)本為研究對(duì)象，根據(jù)病變情況分為正常組、異位組、癌變組，采用SP免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)正常內(nèi)膜、異位內(nèi)膜、癌變內(nèi)膜組織中的PTEN、MDM2進(jìn)行檢測(cè)、比較、分析。結(jié)果:PTEN在正常內(nèi)膜、異位內(nèi)膜、癌變內(nèi)膜組織中MOD值分別為0.151 ±0.012；0.032±0.011；0.011±0.007。MDM2在正常組、異位組、癌變組中的陽(yáng)性表達(dá)率為0.00%、42.29%、87.18%，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：子宮內(nèi)膜樣腺癌MDM2表達(dá)明顯升高，PTEN的MOD值明顯降低，說(shuō)明PTEN和MDM2異常表達(dá)在子宮內(nèi)膜樣腺癌及子宮內(nèi)膜異位中起重要作用，與宮內(nèi)膜異位和子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展存在關(guān)聯(lián)。

子宮內(nèi)膜樣腺癌；PTEN；MDM2；表達(dá)

子宮內(nèi)膜癌是較常見的婦科侵襲性腫瘤，子宮內(nèi)膜樣腺癌也被稱為雌激素依賴性子宮內(nèi)膜樣子宮內(nèi)膜癌,是子宮內(nèi)膜癌的最常見組織學(xué)亞型，約占子宮內(nèi)膜癌的80%。近年來(lái)對(duì)子宮內(nèi)膜樣腺癌標(biāo)志物研究更加深入，并取得了多項(xiàng)突破進(jìn)展[1]。本研究對(duì)正常子宮內(nèi)膜、異位內(nèi)膜、癌變內(nèi)膜組織中PTEN、MDM2表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)和分析，旨在探討子宮內(nèi)膜樣腺癌癌變過(guò)程PTEN、MDM2的參與情況?，F(xiàn)將相關(guān)情況報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

121例子宮內(nèi)膜標(biāo)本均為佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院2009-11～2014-11存檔病例。20例增殖期子宮內(nèi)膜作為正常對(duì)照組，62例子宮內(nèi)膜異位為異位組，39例子宮內(nèi)膜樣腺癌病例。對(duì)照組年齡19～35歲，平均(30.3±5.5)歲；異位組年齡27～49歲，平均(31.5±7.4)歲；癌變組年齡31～62歲，平均(33.4±8.2)歲。各組年齡比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。將病例標(biāo)本用10%甲醛固定，并實(shí)施石蠟包埋，制作4μm厚連續(xù)切片。按實(shí)驗(yàn)試劑盒說(shuō)明實(shí)施免疫組化染色，并經(jīng)病理醫(yī)師確診。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 儀器設(shè)備

朝陽(yáng)恒泰科技發(fā)展公司生產(chǎn)的組織芯片制備儀；上海萊卡儀器有限公司生產(chǎn)的切片機(jī)；北京天平廠生產(chǎn)的架盤藥物天平；上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠生產(chǎn)的調(diào)溫培養(yǎng)箱；安徽電子科學(xué)研究所生產(chǎn)的切片漂烘溫控儀；日本Olympus公司生產(chǎn)的 光學(xué)顯微鏡；美國(guó)PixeLINK1394Camera圖像采集分析儀等。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

北京中杉生物技術(shù)有限公司提供鼠抗人MDM2 蛋白單克隆抗體；CellSignalingTechnologyCST公司提供PTEN兔抗人多克隆抗體；福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供SP免疫組化染色超敏試劑盒等。

1.4 結(jié)果判定

MDM2 蛋白陽(yáng)性著色定位于細(xì)胞核和(或)胞質(zhì)中, 呈黃色或棕黃色顆粒。在高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野，計(jì)數(shù) 1000 個(gè)細(xì)胞，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比(0%=0；<10%=1；10%～50%=2；51%～80%=3；>80%=4)及染色強(qiáng)度(無(wú)色=0；淡黃色=1；棕黃色=2；棕褐色=3)綜合分析判斷結(jié)果，以兩者乘積>3 為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)[2]。

PTEN采用imagepro-plus6.0專業(yè)圖像分析軟件對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行半定量分析,計(jì)算出每張切片蛋白表達(dá)的平均光密度值(meanopticaldensity,MOD),MOD=sum(IOD)/sura(area)。MOD值越高,蛋白表達(dá)越強(qiáng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS軟件17.0處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1PTEN表達(dá)情況

見表1。

表1 三組內(nèi)膜中PTEN蛋白MOD值

PTEN在正常內(nèi)膜、異位內(nèi)膜、癌變內(nèi)膜組織中MOD值分別為0.151 ±0.012；0.032±0.011；0.011±0.007。(正常組與異位組t=41.15，正常組與癌變組t=72.99，癌變組與異位組t=11.87)組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2MDM2陽(yáng)性情況

見表2。

表2 三組內(nèi)膜中MDM2陽(yáng)性情況

MDM2在正常組、異位組、癌變組中的表達(dá)率為0.00%、42.29%、87.18%，(正常組與異位組χ2=12.99，正常組與癌變組χ2=41.15，癌變組與異位組χ2=19.05)組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

PTEN定位于染色體l0q23.3,具有9個(gè)外顯子和8個(gè)內(nèi)含子,mRNA總長(zhǎng)為5.5kb,cDNA序列內(nèi)含有1209個(gè)核苷酸組成的開放閱讀框(ORF),編碼一個(gè)由403個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì),分子量約為47Kd,具有脂質(zhì)磷酸酶和蛋白酸酶雙重活性[3]。PTEN蛋白基因主要是通過(guò)磷酸酶的活性使3,4,5-三 酸磷脂酰肌醇(PIP3)脫磷酸,降低細(xì)胞內(nèi)PIP3的水平,從而影響PIP3信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的一系列激酶,負(fù)性調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)途徑,使細(xì)胞G1期阻滯及促使細(xì)胞凋亡,達(dá)到阻止細(xì)胞生長(zhǎng)和促進(jìn)細(xì)胞洞亡的目的。PTEN蛋白表達(dá)降低或缺失與人類許多惡性腫瘤有關(guān),并與組織學(xué)類型、病理分級(jí)、臨床分期及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)[4]，有研究表明，第10號(hào)染色體同源缺失性酸酶_張力蛋白基因(PTEN)在子宮內(nèi)膜癌中突變率最高,通過(guò)抑制細(xì)胞有絲分裂,從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,通過(guò)參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化、黏附和轉(zhuǎn)移等而發(fā)揮抑癌作用[5]。PTEN基因通過(guò)抑制細(xì)胞有絲分裂誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附、轉(zhuǎn)移和分化等各個(gè)方面發(fā)揮抑癌基因的作用。本研究結(jié)果顯示，正常內(nèi)膜PTEN遠(yuǎn)高于異位內(nèi)膜和癌變內(nèi)膜PTEN，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明PTEN與子宮內(nèi)膜癌呈負(fù)向相關(guān)。

MDM2作為癌基因，可以增強(qiáng)細(xì)胞的生存活力，促進(jìn)細(xì)胞增生和腫瘤生長(zhǎng)[6]。MDM2基因常與同樣定位于12q14、3—15的具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)功能的基因(如CHOP、GCI、CDK4、SAS)構(gòu)成同一擴(kuò)增子，通過(guò)刺激S期轉(zhuǎn)錄因子E2F1/DPI調(diào)節(jié)細(xì)胞周期[7]。MDM2蛋白可與野生型p53結(jié)合，導(dǎo)致p53 抑癌功能喪失，從而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究結(jié)果中，MDM2在正常組、異位組、癌變組中的陽(yáng)性表達(dá)率為0.00%、42.29%、87.18%，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明MDM2與子宮內(nèi)膜癌呈正向相關(guān)。子宮內(nèi)膜樣腺癌MDM2表達(dá)明細(xì)升高，PTEN的MOD值明顯降低，說(shuō)明PTEN和MDM2異常表達(dá)在子宮內(nèi)膜樣腺癌及子宮內(nèi)膜異位中起重要作用，與宮內(nèi)膜異位和子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展存在關(guān)聯(lián)。

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徐麗超 (1985～)女,黑龍江佳木斯人,在讀碩士研究生。

吳英杰(1964～)女,黑龍江佳木斯人,學(xué)士,主任醫(yī)師,碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:jjj.jjn@163.com。

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1008-0104(2015)03-0118-02

2014-12-15)