李 壯，田 寅，蘇俊強(qiáng)，廉奇鑫，冷曉雪，汪洪盛

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

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GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表達(dá)及意義①

李 壯，田 寅，蘇俊強(qiáng)，廉奇鑫，冷曉雪，汪洪盛

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探討不同臨床分期的乳腺癌組織中GRP94及Caspase-9的表達(dá)情況及其臨床意義。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)符合研究規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)的50例乳腺癌患者的病理及其癌旁正常組織中的GRP94及Caspase-9的表達(dá)。結(jié)果：GRP94及Caspase-9在乳腺癌組織中、不同分化程度中、不同臨床分期中、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中陽(yáng)性表達(dá)率的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。GRP94及Caspase-9在不同病理類型、不同腫瘤大小中的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：①在乳腺癌組織中：GRP94高表達(dá)，Caspase-9低表達(dá)。②二者表達(dá)情況可能與乳腺癌發(fā)生及進(jìn)展密切相關(guān)。

乳腺癌；GRP94；Caspase-9

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，目前已躍居女性各類惡性腫瘤致死率的首位，同時(shí)發(fā)病年齡年輕化[1]。我國(guó)現(xiàn)對(duì)乳腺癌早期診斷仍是以影像、細(xì)胞學(xué)、術(shù)后病理等基本方法，但是其前兩者診斷效果不盡如意，后者難以讓大部分女性接受。故應(yīng)將病理學(xué)與分子水平診斷相結(jié)合來(lái)提高早起診斷率，并以成為現(xiàn)如今對(duì)良、惡性腫瘤的區(qū)分及提前診斷的研究熱點(diǎn)之一。GRP94是葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白(GRP)家族中重要的成員之一，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境發(fā)生變化時(shí)，可與未折疊的多肽鏈結(jié)合，阻止錯(cuò)誤蛋白質(zhì)聚集，抑制錯(cuò)誤蛋白質(zhì)的分泌[2]。Caspase-9是半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶(Caspase)家族啟動(dòng)組成員之一，該家族在細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，對(duì)細(xì)胞凋亡的形態(tài)改變和生物化學(xué)改變起著決定性作用。目前二者在各種惡性腫瘤中的研究較多，但是研究結(jié)果仍有一些異議[3]。本實(shí)驗(yàn)用免疫組化法檢測(cè)二者在乳腺癌中的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床分期初步探討其在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的機(jī)制。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象與標(biāo)本采集

收集2012-06～2013-06佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科乳腺癌手術(shù)切除標(biāo)本50例作為實(shí)驗(yàn)組、癌旁正常組織50例作為對(duì)照組[4]。其中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌29例，浸潤(rùn)性小葉癌15例，髓樣癌6例，腫瘤直徑大于2cm標(biāo)本28例，小于2cm標(biāo)本22例 ，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)本25例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)本25例。所有被選作為實(shí)驗(yàn)組的患者均為女性且術(shù)前均未接受過(guò)任何治療，包括放療、化療、生物治療等，并且符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)規(guī)定。病理標(biāo)本用10%的福爾馬林溶液固定。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

本實(shí)驗(yàn)選用免疫組化SP法測(cè)定GRP94、caspase9蛋白于乳腺癌和癌旁組織中的表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織和癌旁組織中GRP94、Caspase-9表達(dá)情況

乳腺癌組織和癌旁組織中GRP94及Caspase-9表達(dá)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.2999，P<0.05；χ2=15.7266，P<0.05)，乳腺癌組織中GRP94表達(dá)陽(yáng)性率高于癌旁組織；Caspase-9低于癌旁組織。見表1。

表1 乳腺癌組織和癌旁組織中GRP94、Caspase-9表達(dá)情況(n=50)

圖1 GRP94在乳腺癌中陽(yáng)性表達(dá)×100

圖2 CRP94在乳腺癌中陽(yáng)性表達(dá) ×400

圖3 Caspase-9 在乳腺癌中陽(yáng)性表達(dá) ×100

圖4 Caspase-9在乳腺癌中陽(yáng)性表達(dá) ×400

2.2GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理之間的關(guān)系

乳腺癌組織中GRP94與Caspase-9表達(dá)情況：(1)不同分化程度的乳腺癌組織中GRP94及Caspase-9表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.8991，P<0.05；χ2=12.8058，P<0.05)，說(shuō)明GRP94隨腫瘤分化程度越低陽(yáng)性表達(dá)率越高；Caspase-9隨腫瘤分化程度越高陽(yáng)性表達(dá)率越低(2)不同病理分型中比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.3132，P>0.05；χ2=0.3284，P>0.05)，說(shuō)明不同病理類型與陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)關(guān)；(3)不同臨床分期中比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.0653，P<0.05；χ2=13.9943，P<0.05)，說(shuō)明GRP94隨著腫瘤的進(jìn)展陽(yáng)性表達(dá)率越高；Caspase-9隨著腫瘤的進(jìn)展陽(yáng)性表達(dá)率越低。(4)不同腫瘤大小的比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.4330，P>0.05；χ2=3.6310，P>0.05)，說(shuō)明腫瘤大小不影響陽(yáng)性表達(dá)率；(5)有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.8824，P<0.05；χ2=20.7792，P<0.05)，說(shuō)明GRP94隨著淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移陽(yáng)性表達(dá)率升高；Caspase-9隨著淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移陽(yáng)性表達(dá)率降低。

表2 GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理之間的關(guān)系

2.3 乳腺癌組織和癌旁組織中GRP94、Caspase-9表達(dá)情況的相關(guān)性分析

本實(shí)驗(yàn)采用Spearman相關(guān)性分析乳腺癌組織及癌旁組織中二者表達(dá)情況(P<0.05，rs=-0.6319、rs=-0.2954)，二者表達(dá)截然相反，呈負(fù)相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

表3 乳腺癌組織和癌旁組織中GRP94、

3 討論

研究表明GRP94在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。主要概括為抑制腫瘤生長(zhǎng)與促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)兩個(gè)作用。抑制腫瘤作用：首先，GRP94持續(xù)高表達(dá)激活體內(nèi)的固有免疫，使機(jī)體產(chǎn)生特異性抗腫瘤反應(yīng)。其次，GRP94高表達(dá)可以刺激Th1細(xì)胞產(chǎn)生及分泌大量的腫瘤壞死因子α(TNF-α)[5]。再次，GRP94高表達(dá)可以刺激巨噬細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生及分泌細(xì)胞因子及趨化因子。促進(jìn)腫瘤作用：在各類腫瘤中，特別是實(shí)體腫瘤，腫瘤生長(zhǎng)初期血管沒有大量生成，腫瘤細(xì)胞又處于高代謝狀態(tài)，使細(xì)胞內(nèi)環(huán)境發(fā)生變化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激產(chǎn)生大量GRP94，通過(guò)自分泌或旁分泌的形式活化血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤周圍血管生成，使腫瘤得到充分的血液及養(yǎng)分供應(yīng)。還有研究表明，GRP94在腫瘤細(xì)胞中有信號(hào)傳遞功能，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)[6]。WANG等[7]對(duì)結(jié)腸癌病理研究中表明，GRP94表達(dá)依然是隨著分化程度降低、臨床分期升高而升高。應(yīng)小平等[8]用免疫組化法研究表明乳腺癌的轉(zhuǎn)移與GPR94的表達(dá)有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究表明：GRP94在乳腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織中，并與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、臨床分期密切相關(guān)，這與上述等研究結(jié)論相一致，并且可以推測(cè)GRP94在惡性腫瘤形成過(guò)程中對(duì)腫瘤的促進(jìn)作用大于抑制作用。說(shuō)明乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展與GRP94有著密切的聯(lián)系，因此有望成為乳腺癌的早期診斷及判斷預(yù)后的重要指標(biāo)。

腫瘤是多基因表達(dá)控制的綜合性疾病。腫瘤的發(fā)生及發(fā)展的基礎(chǔ)是細(xì)胞的增殖與凋亡異常，但是目前Caspase-9的凋亡途徑與惡性腫瘤的關(guān)系尚未研究清楚，Ito和Ikeguchi等[9]研究表明，在某些惡性腫瘤(如肝癌)中凋亡抑制因子survivin高度表達(dá)，Chandele等[10]發(fā)現(xiàn)survivin抗凋亡作用途徑主要是通過(guò)抑制Caspase-9活性途徑實(shí)現(xiàn)的，進(jìn)而導(dǎo)致其表達(dá)降低。Soengas等[12]認(rèn)為Caspase-9是一種抑癌基因，因其可以抑制腫瘤的生長(zhǎng)，所以在腫瘤中低表達(dá)。還有研究表明Caspase-9在惡性腫瘤中表達(dá)的高與低，與腫瘤周圍炎癥程度有一定相關(guān)性，如結(jié)、直腸癌中Caspase-9高表達(dá)，因其周圍的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致炎癥因子IL-1β，IL-18和IL-33的前體等，在線粒體凋亡途徑中與Apaf-1及Caspase-9結(jié)合，促進(jìn)凋亡的啟動(dòng)，但其腫瘤細(xì)胞的凋亡未增加反而減低。本實(shí)驗(yàn)研究表明：Caspase-9在乳腺癌組表達(dá)明顯低于癌旁正常組織，說(shuō)明在乳腺癌形成過(guò)程中Caspase-9凋亡通路受到抑制。實(shí)驗(yàn)還表明該因子與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、臨床分期密切相關(guān)，與邱芳等[12]研究一致，說(shuō)明乳腺癌發(fā)展越嚴(yán)重對(duì)該凋亡通路的抑制越重，因此可以大膽的推測(cè)該因子不僅參與乳腺癌的早期形成過(guò)程，還直接影響乳腺癌患者的預(yù)后，可作為乳腺癌的早期篩查及預(yù)后的重要指標(biāo)。

目前對(duì)GRP94在惡性腫瘤參與Caspase-9凋亡通路過(guò)程中的作用機(jī)制尚不是十分清晰。本實(shí)驗(yàn)的50例乳腺癌患者病理免疫組化染色研究表明二者存在負(fù)相關(guān)(P<0.05，rs=-0.6319)，推測(cè)在乳腺癌形成過(guò)程中GRP94的高表達(dá)抑制了Caspase-9的凋亡啟動(dòng)，二者密不可分。因此，進(jìn)一步研究二者在乳腺癌中的作用機(jī)制可望為乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)及預(yù)后提供新的思路。

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李壯(1963～)男，黑龍江佳木斯人，副教授，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:779589868@qq.com。

田寅(1962～)男，黑龍江佳木斯人，學(xué)士，主任醫(yī)師。

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