畢 勝，李 冬， 王李鳴，趙巖巖，田嘉瑩，李培育

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

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出血大鼠血清IL-17, IL-23的表達(dá)及意義①

畢 勝，李 冬， 王李鳴，趙巖巖，田嘉瑩，李培育

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

目的: 以腦出血大鼠為研究對(duì)象，探討血清IL-17, IL-23的表達(dá)及意義。方法: 將90只大鼠隨機(jī)分成三組：對(duì)照組(A組)，假手術(shù)組(B組)，出血組(C組)，每組30只。分別設(shè)6h，24h，3d，7d，14d五個(gè)時(shí)間點(diǎn)。用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA) 檢測(cè)大鼠血清中白細(xì)胞介素17( IL-17)、白細(xì)胞介素23( IL-23) 的表達(dá)。結(jié)果: 對(duì)照組與假手術(shù)組IL-17，IL-23的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。出血組與對(duì)照組、假手術(shù)組相比、同一時(shí)間點(diǎn)IL-17，IL-23的表達(dá)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。出血組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)IL-17，IL-23的表達(dá)相比，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。IL-17，IL-23的表達(dá)在腦出血后7d高于出血其他時(shí)間點(diǎn)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)論: 腦出血大鼠發(fā)病 6h后, 外周血中IL-17，IL-23 的表達(dá)增加;IL-17，IL-23 的表達(dá)在腦出血后7d高于6h，24h，3d，14d。IL-17，IL-23 參與腦出血后的炎癥反應(yīng)。

腦出血；IL-17；IL-23

腦出血是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，在我國(guó)具有發(fā)病率高，預(yù)后差的特點(diǎn)。腦出血發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，多種機(jī)制參與其發(fā)病過(guò)程[1,2]，近年來(lái)人們研究發(fā)現(xiàn)炎癥反應(yīng)在其發(fā)病機(jī)制中占有重要地位。Th17細(xì)胞是不同于Th1細(xì)胞，Th2細(xì)胞的另一類CD4+輔助性T細(xì)胞亞群，Th17細(xì)胞可產(chǎn)生多種致炎性細(xì)胞因子，主要產(chǎn)生IL-17。IL-23 可以通過(guò)介導(dǎo)STAT3 的磷酸化過(guò)程促進(jìn)IL-17 的分泌[3]。我們選用大鼠制作腦出血模型，探討腦出血后外周血血清中IL-17，IL-23的表達(dá)及意義。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

由吉林大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的清潔級(jí)SD大鼠，雄性，年齡均為12±2周，共90只，體重220-260克，采用多層層流架飼養(yǎng)，20-25℃ 恒溫飼養(yǎng)。動(dòng)物分組：大鼠隨機(jī)分成三組：對(duì)照組(A組)，假手術(shù)組(B組)，出血組(C組)，每組30只。出血組(C組)動(dòng)物模型的制備：參考Hua[4]的方法，Wistar大鼠經(jīng)10%水合氯醛(400mg/kg)腹腔注射麻醉后，俯臥位固定于立體定位儀上，于前囟前0.2mm中線右旁開3.5mm處用牙科鉆鉆一直徑為1mm的小孔，由心臟抽取血液100μL，微量進(jìn)樣器沿鉆孔進(jìn)針，進(jìn)針深度5.5mm(即尾狀核位置)，以13μL/min的速度勻速注射自體不凝血約50μL，留針10min后緩慢移出針頭。以大鼠腦切片中有明顯的圓形、卵圓形或不規(guī)則的血腫存在，無(wú)血液針道反流、無(wú)蛛網(wǎng)膜下腔出血、無(wú)血腫破入腦室者為模型成功標(biāo)準(zhǔn)，術(shù)后昏迷不醒或死亡者剔除。模型成功的判定：采用Longa法評(píng)分[5]，無(wú)神經(jīng)功能缺損為0分，出血后對(duì)側(cè)肢體不能伸直為1 分，出現(xiàn)轉(zhuǎn)圈為2 分，行走時(shí)身體向偏癱側(cè)傾倒為3 分，意識(shí)消失，完全不能行走為4 分，大于2分認(rèn)為模型成功。對(duì)照組(A組)實(shí)驗(yàn)大鼠模型建立方法同出血組，但只是完成刺入動(dòng)作，不注入血液。假手術(shù)組(B組)：步驟同腦出血造模，蒼白球注入生理鹽水。分別設(shè)6h，24h，3d，7d，14d五個(gè)時(shí)間點(diǎn)。

1.2 血清IL-17，IL-23的測(cè)定

各組于各時(shí)間點(diǎn)抽取左股動(dòng)脈血靜置0.5h，以3000r/min離心10min，吸取上層血清，用0.5μL離心管分裝放置-70℃深低溫冰箱備用， 用大鼠IL-17酶聯(lián)免疫分析試劑盒、大鼠IL-23酶聯(lián)免疫分析試劑盒進(jìn)行酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn), 用美國(guó)BIO-RAD伯樂(lè)酶標(biāo)儀(型號(hào)550)在450nm處檢測(cè)OD值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各項(xiàng)數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x[TX-]±s)表示，組間比較用單因素方差分析(ANOVA)，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 大鼠血清中IL-17的表達(dá)

對(duì)照組與假手術(shù)組IL-17的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。出血組與對(duì)照組、假手術(shù)組相比、同一時(shí)間點(diǎn)IL-17的表達(dá)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。出血組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)IL-17的表達(dá)相比，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。IL-17的表達(dá)在腦出血后7d高于出血其他時(shí)間點(diǎn)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

2.2 大鼠血清中IL-23的表達(dá)

對(duì)照組與假手術(shù)組IL-23的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。出血組與對(duì)照組、假手術(shù)組相比、同一時(shí)間點(diǎn)IL-23的表達(dá)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。出血組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)IL-23的表達(dá)相比，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。IL-23的表達(dá)在腦出血后7d高于出血其他時(shí)間點(diǎn)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

表1 大鼠血清中IL-17的表達(dá)

在同一時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比較*P<0.05；與假手術(shù)組相比較#P<0.05；出血組內(nèi)，與6h相比較@P<0.05；與24h相比較&P<0.05；與3d相比較▲P<0.05；與7d相比較+P<0.05。

表2 大鼠血清中IL-23的表達(dá) (x[TX-]±s, n=6,pg/mL)

在同一時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比較*P<0.05；與假手術(shù)組相比較#P<0.05；出血組內(nèi)，與6h相比較@P<0.05；與24h相比較&P<0.05；與3d相比較▲P<0.05；與7d相比較+P<0.05；

3 討論

腦出血發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，近年來(lái)研究人員發(fā)現(xiàn)炎癥反應(yīng)參與腦出血的發(fā)病過(guò)程。已有研究證腦組織缺血缺氧后，多種細(xì)胞動(dòng)員，分泌多種細(xì)胞因子，細(xì)胞因子通過(guò)血液循環(huán)進(jìn)入病變部位，參與腦出血的發(fā)病過(guò)程。Wang等[6]在對(duì)腦梗死模型的研究中發(fā)現(xiàn)IL-17及其受體IL-17R表達(dá)增加，提示通過(guò)IL-17/IL-17R通路參與腦缺血缺氧后的損傷。本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，腦出血實(shí)驗(yàn)組血清中IL-17的水平在發(fā)病6h后增加，提示IL-17參與人腦出血后的病理過(guò)程及炎癥反應(yīng)。

腦出血發(fā)病6h，出血組大鼠血清IL-17的水平與對(duì)照組、假手術(shù)組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示在腦出血早期，IL-17即發(fā)揮重要作用。腦出血發(fā)病24h，3d，7d逐漸升高，提示IL-17在腦出血發(fā)病中持續(xù)發(fā)揮重要作用。已有研究證實(shí)，腦出血6h后，血腫周圍組織即發(fā)生炎癥反應(yīng)，且逐漸加重，約3～7d達(dá)到水腫高峰期。IL-17的水平在6h至7d的持續(xù)升高，這一趨勢(shì)與腦出血后的組織病理變化表現(xiàn)出高度一致性，進(jìn)一步證實(shí)其在腦出血發(fā)病中的重要作用。7d后IL-17水平雖下降，但仍高于對(duì)照組。提示IL-17除參與炎癥反應(yīng)外，還可能與血腫吸收等病理生理過(guò)程相關(guān)。

記憶性細(xì)胞被IL-23激活后可促進(jìn)IL-17，IL-6，IFN-γ等多種細(xì)胞因子的分泌[7]。IL-23 具有趨化作用，能夠趨化多種細(xì)胞到病變部位，發(fā)揮促炎作用[8]。已有研究證實(shí)，IL-23 與腦組織缺血缺氧后的早期損傷有關(guān)[9]。

本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，腦出血實(shí)驗(yàn)組中大鼠血清IL-23的水平在在發(fā)病6h后增加，高于對(duì)照組及假手術(shù)組，提示腦出血IL-23參與腦出血后的炎癥反應(yīng)。大鼠血清IL-23的水平的變化趨勢(shì)與IL-17變化趨勢(shì)一致。提示IL-23可能通過(guò)刺激靶細(xì)胞產(chǎn)生IL-17等相關(guān)細(xì)胞因子，促進(jìn)腦出血后炎癥反應(yīng)的發(fā)生。本研究提示IL-17、IL-23作為重要的致炎因子，在腦出血發(fā)病后的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，本研究提示可以通過(guò)調(diào)控IL-23、IL-17的表達(dá)，達(dá)到減輕腦出血后炎癥反應(yīng)的作用。

[1]楊慧,侯麗淳,王復(fù)新. 大鼠腦出血周邊組織VEGF表達(dá)及Ang-1對(duì)其變化的影響[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué).2012.35(1):67-68

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1.佳木斯大學(xué)校級(jí)青年基金項(xiàng)目，編號(hào)： Sq 2013-022；2. 黑龍江省衛(wèi)生廳項(xiàng)目，編號(hào)：2013235。

畢勝(1981～)女，黑龍江佳木斯人，博士 講師 。

李培育(1980～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，主治醫(yī)師。E-mail: 21570384@qq.com。

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1008-0104(2015)03-0048-02

2015-03-08)