何 琦，劉中柱

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003)

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纈沙坦對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠模型腎臟轉(zhuǎn)化生長因子-β1、骨形成蛋白7表達(dá)的影響①

何 琦，劉中柱

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003)

目的:通過輸尿管結(jié)扎建立大鼠腎間質(zhì)纖維化動(dòng)物模型，并應(yīng)用纈沙坦進(jìn)行干預(yù)，研究轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、 骨形成蛋白7(BMP-7)在腎間質(zhì)纖維化時(shí)的表達(dá)，探討纈沙坦(血管緊張素II受體拮抗劑)在腎間質(zhì)纖維化(RIF)的病理生理改變機(jī)制中發(fā)揮的作用。方法: 選取36只Wistar雄性大鼠，隨機(jī)分三組(模型組、纈沙坦組，假手術(shù)組)，每組12只，并制備UUO模型(單側(cè)輸尿管結(jié)扎)，其中假手術(shù)組不結(jié)扎和剪斷輸尿管。每天一次對假手術(shù)組、模型組用0.9%Nacl等量灌胃。纈沙坦治療組日一次以6mg/kg纈沙坦給藥量灌胃。連續(xù)用藥2w后，每組隨機(jī)選取6只大鼠取血后處死取腎臟。將剩余大鼠繼續(xù)給藥至4w后同樣方法取材及處死。用免疫組織化學(xué)方法檢測腎組織中的TGF-β1、BMP-7表達(dá)情況；血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)用全自動(dòng)生化儀檢測。結(jié)果: 與假手術(shù)組相比，模型組和纈沙坦組在術(shù)后血肌酐及血尿素明顯升高(P<0.05)。免疫組化法發(fā)現(xiàn)模型組TGF-βl表達(dá)增加，BMP-7表達(dá)減少，而纈沙坦組TGF-β1表達(dá)減少，BMP-7表達(dá)增加。結(jié)論：纈沙坦可能對腎間質(zhì)纖維化起到拮抗作用，可能對臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。

單側(cè)輸尿管梗阻;纈沙坦; 轉(zhuǎn)化生長因子-β1；骨形成蛋白-7

慢性腎病(chronickidneydisease,CKD)是指各種原因引起的慢性腎臟結(jié)構(gòu)和功能障礙。近年來，CKD已成為繼心腦血管病、糖尿病、腫瘤之后的一個(gè)威脅人類健康的重要疾病。有調(diào)查顯示， 慢性腎病的患病率和發(fā)病率每年都在呈現(xiàn)不斷上升的趨勢[1]。如何減慢或停止此病的進(jìn)展、阻止終末期腎病的發(fā)生一直是腎臟病學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。腎間質(zhì)纖維化(RIF)是許多病理生理等原因共同參與使得細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)在腎間質(zhì)沉積過多引起。腎小管萎縮和腎間質(zhì)纖維化是其基本的病理表現(xiàn)，是非常復(fù)雜的多種因素共同發(fā)生作用的結(jié)果。近幾年研究發(fā)現(xiàn)TGF-β1是一種重要的腎前纖維化因子，在腎纖維化過程中起著中心作用;而骨形成蛋白7(Bbonemorphogeneticprotein7，BMP-7)是一種內(nèi)源性抗腎纖維化因子，在阻止腎纖維化方面起重要作用[2]。本實(shí)驗(yàn)擬通過輸尿管結(jié)扎建立大鼠腎間質(zhì)纖維化動(dòng)物模型，并應(yīng)用纈沙坦進(jìn)行干預(yù)，研究轉(zhuǎn)化生長因子β1、骨形成蛋白7在腎間質(zhì)纖維化時(shí)的表達(dá)，探討纈沙坦在腎間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展中起到的作用，希望能為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型的選擇與分組

購買雄性Wistar大鼠36只(體重190～210g)，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、纈沙坦治療組，每組12只。大鼠用3%戊巴比妥鈉(45mg/kg)腹腔注射麻醉后，無菌條件下行左側(cè)腹切口(1～2cm)逐層切開皮膚、肌肉及腹壁各層，纈沙坦治療組和模型組大鼠均分離左側(cè)輸尿管后結(jié)扎并剪斷，逐層縫合組織到皮膚。假手術(shù)組不結(jié)扎和剪斷輸尿管，僅做分離。

1.2 給藥方法

用0.9%Nacl每日一次等量給予假手術(shù)組和模型組大鼠灌胃。纈沙坦治療組用纈沙坦(6mg/kg)每日灌胃一次。在給藥持續(xù)兩周后每組隨機(jī)選取6只大鼠，取血后處死并取材。其它剩余大鼠繼續(xù)用藥至四周后同樣按上述方法操作。

1.3 檢測方法及主要觀察指標(biāo)

組織取材：用上述方法給藥兩周及四周后各組大鼠分別取內(nèi)眥血，用生化分析儀測定血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)結(jié)果。在分別處死所有大鼠，均取出左側(cè)腎臟，固定，包埋，切片，用免疫組化法檢測其中TGF-β1、BMP-7的表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0選用秩和檢驗(yàn)法分析結(jié)果,P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩周和四周時(shí)各實(shí)驗(yàn)組大鼠Scr和BUN結(jié)果比較

模型組與纈沙坦組大鼠術(shù)后2w、4w的Scr及BUN與假手術(shù)組比較，差異顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組相比，纈沙坦組Scr及BUN術(shù)后2周和4周均較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1～2。

2.2 免疫組化結(jié)果

假手術(shù)組BMP-7表達(dá)相對較高，TGF-βl僅有少量表達(dá)。模型組TGF-βl表達(dá)增加，BMP-7表達(dá)減少，而纈沙坦組TGF-β1表達(dá)減少，BMP-7表達(dá)增加。見表3～4。

表1 術(shù)后不同時(shí)間各組大鼠Scr值比較

※與對照組比較,P<0.01,★與模型組比較,P<0.05。

表2 術(shù)后不同時(shí)間各組大鼠BUN值比較

*:與對照組比較,P<0.01,△:與模型組比較,P<0.05。

表3 TGF-βl在纈沙坦治療組、模型組與假手術(shù)

與假手術(shù)組比較P<0.01，與模型組比較P<0.01。

表4 BMP-7在纈沙坦治療組、模型組與假手術(shù)

′與假手術(shù)組比較P<0.01，″與模型組比較P<0.01。

3 討論

慢性腎病的腎間質(zhì)纖維化基本病理表現(xiàn)是腎小管萎縮和間質(zhì)纖維化。由許多因素引起的ECM在腎間質(zhì)內(nèi)過度沉積，多種炎癥細(xì)胞浸潤腎間質(zhì),促進(jìn)炎癥細(xì)胞的浸潤的細(xì)胞因子尚未完全明了[3]。TGF-β1是轉(zhuǎn)化生長因子超家族中的成員，在創(chuàng)傷修復(fù)方面，免疫抑制以及各種原因所致的器官纖維化中都發(fā)揮重要作用[4]。BMP-7是轉(zhuǎn)化生長因子超家族的成員，研究發(fā)現(xiàn)，在腎臟的發(fā)生發(fā)育上BMP-7更是發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，促進(jìn)腎臟發(fā)生發(fā)育以及維持其正常生理功能的重要因子[5]。有文獻(xiàn)報(bào)道，BMP-7能抑制TGF-β1的生成，抑制促炎癥因子基因和趨化因子的表達(dá)，說以增加BMP-7的含量能保護(hù)腎臟[6]。血管緊張素受體拮抗劑纈沙坦，能對抗細(xì)胞外基質(zhì)沉積，減慢腎臟纖維化進(jìn)展。還可抑制TGF-B1的激活，來延緩腎纖維化的發(fā)生發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)觀察了轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)與骨形成蛋白7(BMP-7)在纈沙坦治療組、模型組與假手術(shù)組中的表達(dá)情況和纈沙坦治療組、模型組中血肌酐和尿素氮結(jié)果的對比，發(fā)現(xiàn)TGF-β1在纈沙坦治療組的表達(dá)低于模型組，而BMP-7在纈沙坦治療組的表達(dá)高于模型組。以上結(jié)果說明纈沙坦可能對腎間質(zhì)纖維化起到拮抗作用，可能對臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。

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[4]劉中柱，潘明陽，劉艷姝，等.厄貝沙坦對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎間質(zhì)纖維化干預(yù)作用[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2014，37(2)：50-51

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佳木斯大學(xué)研究生科技創(chuàng)新項(xiàng)目，編號(hào):LM2014＿024；佳木斯大學(xué)科研課題，編號(hào)：L2012-055。

何琦(1986～)男，黑龍江佳木斯人，在讀碩士研究生。

劉中柱(1964～)男，黑龍江嫩江人，學(xué)士，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail：liuzhongzhu75@163.com。

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1008-0104(2015)03-0046-02

2014-12-08)