楊 堃

(重慶市食品藥品檢驗(yàn)所，重慶401121)

生脈飲(黨參方)是由黨參、麥冬、五味子共3味藥組成的復(fù)方制劑，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十冊(cè)［1］。功能為益氣復(fù)脈、養(yǎng)陰生津，用于氣陰兩虧、心悸氣短、脈微自汗。原標(biāo)準(zhǔn)僅收載了藥品的性狀和常規(guī)檢查，無(wú)處方中藥物的定性鑒別和標(biāo)示成分的含量測(cè)定。筆者在此對(duì)方中黨參、五味子、麥冬進(jìn)行了薄層色譜定性鑒別，并以高效液相色譜法制定了方中五味子(以五味子醇甲計(jì))含量測(cè)定方法，為更好地控制生脈飲(黨參方)質(zhì)量提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料 生脈飲(黨參方)(江西匯仁藥業(yè)有限公司，批號(hào)130709;通化東寶永健制藥有限公司，批號(hào)131011;江西南昌濟(jì)生制藥廠，批號(hào)130309)，黨參、麥冬、五味子等處方中的各味藥材由重慶桐君閣中藥飲片有限公司提供。黨參對(duì)照藥材(批號(hào)121057－200805)、五味子對(duì)照藥材(批號(hào)120922－201007)、五味子醇甲(批號(hào)110857－201211，含量測(cè)定用)、麥冬對(duì)照藥材(批號(hào)121013－200908)，均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1．2 儀器 高效液相色譜儀Agilent HP1100(包括四元泵、柱溫箱、自動(dòng)進(jìn)樣器、二級(jí)管陣列檢測(cè)器);KQ3200B型超聲波清洗器(功率150 W，頻率40 KHz);Sartorius Msu224s－100－du百萬(wàn)分之一電子分析天平;Sartorius Msa225s－100－du萬(wàn)分之一電子分析天平。

1．3 試藥 硅膠G、硅膠GF254(化學(xué)純，青島海洋化工廠)、甲醇(安徽時(shí)聯(lián)特種溶劑股份有限公司，HPLC級(jí))，Milli－Q reference制備超純水，其余試劑均為分析純。

1．4 方法

1．4．1 黨參的薄層色譜鑒別。取本品10 ml，用正丁醇振搖提取3次，每次10 ml，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為供試品溶液。另取黨參對(duì)照藥材1 g，加正丁醇20 ml，加熱回流1 h，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各1～2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－乙醇－水(25∶3∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

1．4．2 五味子的薄層色譜鑒別。取本品20 ml，用乙醚振搖提取3次，每次20 ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對(duì)照藥材1 g，加水50 ml，煎煮30 min，放冷，濾過(guò)，濾液同法制成對(duì)照藥材溶液。再取五味子醇甲對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μl、對(duì)照藥材溶液5μl、對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(13∶7∶1)的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視［2］。

1．4．3 麥冬的薄層色譜鑒別。取本品10 ml，加水10 ml，鹽酸2 ml，回流提取30 min，濾過(guò)，濾液用三氯甲烷振搖提取，分取三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶?另取麥冬照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液5μl、對(duì)照藥材溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－丙酮(4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰［2］。

1．4．4 五味子的含量測(cè)定。

1．4．4．1 對(duì)照品溶液的制備。精密稱取五味子醇甲對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含23．06μg的溶液。

1．4．4．2 供試品溶液的制備。取“1．1”項(xiàng)下的批號(hào)為130709樣品精密量取25 ml，置分液漏斗中，加乙醚振搖提取4次，每次25 ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，0．45 μm 孔濾膜濾過(guò)即得［2］。

1．4．4．3 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇－水(55∶45)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm。流速1．0 ml/min，柱溫30 ℃［2］。

1．4．4．4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精密吸取“1．4．4．1”項(xiàng)下制備的對(duì)照品溶液，各 5、10、15、20、25、30 μl分別注入液相色譜儀測(cè)定，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)、五味子醇甲峰峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1．4．4．5 精密度試驗(yàn)。精密吸取“1．4．4．1”項(xiàng)下制備的對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定每次峰面積，計(jì)算峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，要求該值小于3%。

1．4．4．6 重復(fù)性試驗(yàn)。取“1．1”項(xiàng)下的樣品(批號(hào)130709)，按“1．4．4．2”方法制備5 份供試品溶液，測(cè)定各份樣品中五味子醇甲的含量，并計(jì)算RSD值，要求該值小于3%。

1．4．4．7 穩(wěn)定性考察。取重復(fù)試驗(yàn)中的5份樣品溶液，于常溫條件放置0、4、8、12、24 h 后，各精密吸取 10 μl，測(cè)定五味子醇甲的含量，并計(jì)算RSD值。

1．4．4．8 加樣回收率試驗(yàn)。精密量取已測(cè)定含量的同一批樣品15 ml(批號(hào)130709，五味子醇甲含量為6．98μg/ml)6份，分別精密加入五味子醇甲對(duì)照品(0．092 72 mg)，按

“1．4．4．2”方法操作，測(cè)定五味子醇甲含量，計(jì)算加樣回收率和RSD值。

1．4．4．9 樣品含量測(cè)定。取“1．1”項(xiàng)下 3 批樣品，按“1．4．4．2”方法制備供試品溶液，按照“1．4．4．3”的色譜條件，測(cè)定五味子醇甲含量。

2 結(jié)果與分析

2．1 薄層色譜鑒別 按“1．4．1”、“1．4．2”、“1．4．3”方法操作，所得樣品薄層色譜圖(圖1)中的特征斑點(diǎn)明顯，分離度好，重現(xiàn)性好，該方法可行。

2．2 五味子的含量測(cè)定

2．2．1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)。由對(duì)照品在200～400 nm的波長(zhǎng)掃描結(jié)果(圖2)可見(jiàn)，五味子醇甲在220和250 nm處有較大紫外吸收，鑒于有機(jī)化合物在230 nm以下干擾重的原因，在此選定最佳檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm。在該檢測(cè)波長(zhǎng)及相應(yīng)色譜條件下，繪制對(duì)照品及供試樣品色譜圖，由圖3b、c可見(jiàn)，對(duì)照品及供試樣品中的五味子醇甲色譜峰的保留時(shí)間均為15．1 min，且色譜峰峰形尖銳，對(duì)稱性好，樣品所測(cè)定主峰旁邊無(wú)明顯雜峰，達(dá)到基線分離，經(jīng)計(jì)算樣品與其他組份峰的分離度＞1．5，理論塔板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算不低于4 000，且陰性對(duì)照無(wú)干擾(圖3a)，符合藥典要求。

2．2．2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。通過(guò)以上色譜條件定量測(cè)定對(duì)照品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)回歸處理，得五味子醇甲的回歸方程為 Y=1 745．6X+6．528 4(r=0．999 9)，表明五味子醇甲進(jìn)樣量在0．046 12～0．691 80μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2．2．3 精密度試驗(yàn)。重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定每次峰面積，計(jì)算峰面積積分值的RSD為0．9%，表明精密度良好，符合含量測(cè)定要求。

2．2．4 重復(fù)性試驗(yàn)。取平行樣5份，測(cè)定各份樣品中五味子醇甲的含量，其平均含量為6．98μg/ml，RSD值為1．0%，表明用此方法測(cè)定五味子醇甲含量重現(xiàn)性良好。

2．2．5 穩(wěn)定性考察。按“1．4．4．7”方法操作，測(cè)定五味子醇甲含量的RSD值為0．91%，表明供試品溶液在24 h基本穩(wěn)定。

2．2．6 加樣回收率試驗(yàn)。由表1可見(jiàn)，五味子醇甲的平均回收率為98．90%，RSD值為1．5%，表明該方法回收率較好，方法可行。

表1 五味子醇甲加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2．2．7 樣品含量測(cè)定。方法確定并驗(yàn)證后，測(cè)定了3個(gè)廠家生脈飲(黨參方)中五味子醇甲含量，平行測(cè)定3次，結(jié)果發(fā)現(xiàn)(表2)，3個(gè)廠家的樣品用該方法均能檢出五味子醇甲及其含量，表明該方法準(zhǔn)確、可靠，可推廣用于生脈飲(黨參方)的質(zhì)量控制。

表2 3個(gè)廠家樣品測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

生脈飲(黨參方)是由黨參、麥冬、五味子共3味藥組成的復(fù)方制劑，方中的五味子具有益氣生津、補(bǔ)腎寧心的作用，含有揮發(fā)油、有機(jī)酸、木脂素、三萜、倍半萜及多糖等化學(xué)成分［2］。木脂素成分中的五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲為五味子主要藥理活性成分，在此選用五味子的特征成分五味子醇甲作含量測(cè)定來(lái)控制生脈飲(黨參方)質(zhì)量。

［1］衛(wèi)生部藥典委員會(huì)．《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十冊(cè)［S］．衛(wèi)生部藥典委員會(huì)，1995．

［2］藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)［S］．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010．