劉振興，周結珊，馬艷平，郝 樂，馬江耀，梁志凌，柯 浩

(廣東省農業(yè)科學院動物衛(wèi)生研究所，廣東省獸醫(yī)公共衛(wèi)生公共實驗室，

廣東省畜禽疫病防治研究重點實驗室，廣東廣州510640)

1 材料與方法

1．1 試驗材料 試驗所用益生菌為廣東省農業(yè)科學院動物衛(wèi)生研究所水產病害研究室分離并鑒定的鰻鱺腸道源益生菌菌株:長孢婁徳酵母(Y1株)、乳明串珠菌(L1株)和枯草芽孢桿菌(B．S1株)。日本鰻鱺幼魚及全價飼料(作為基礎飼料)購自東莞市銀華鰻魚養(yǎng)殖有限公司。谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和蛋白定量試劑盒(BCA法)，均購自南京建成生物工程研究所。

1．2 試驗方法

1．2．1 富硒酵母(Se-Y1)的制備。Y1按照1∶9接種于YEPD液體培養(yǎng)基(Na2SeO3濃度為20μg/ml)，發(fā)酵培養(yǎng)36 h，制成富硒酵母Se-Y1，參照郝素娥等［6］的方法測定其生物量及菌體硒含量，并計算硒轉化率。

1．2．2 養(yǎng)殖試驗設計。選擇192尾初始體重(17．60 ±3．83)g的鰻鱺，隨機分為4個試驗組，每組3個平行，每個平行16尾。對照組投喂基礎飼料;試驗Ⅰ組在基礎飼料中添加終濃度分別為109cfu/g的長孢婁德酵母、乳明串球菌、枯草芽孢桿菌;試驗組Ⅱ、Ⅲ的投喂飼料中乳明串珠菌、枯草芽孢桿菌含量與試驗Ⅰ組相同，通過調整Se-Y1和Y1比例，使飼料中酵母總濃度為109cfu/g，有機硒含量分別為0．4和0．8 mg/kg。每天投喂2次(9:00和17:00)，養(yǎng)殖水溫24～25℃，溶氧量大于 5 mg/L，pH 7．5 ～8．5，總氨氮含量大于 0．5mg/L。

1．2．3 生長性能測定。分別于試驗開始時和第45、125天計算增重率、特定生長率和餌料系數(shù)，計算公式如下:

增重率(WGR，%)=(Wt-W0)×100/W0(1)

特定生長率(SGR，%)=(ln Wt-ln W0)×100/t (2)

餌料系數(shù)(FCR)=Wf/(Wt-W0) (3)

式中，Wt為終末體質量(g)，W0為初始體質量(g)，Wf為飼料投喂總量(g)，t為飼養(yǎng)天數(shù)。

1．2．4 抗氧化水平測定。于試驗的第45、125天在每個平行中隨機抽取3尾鰻鱺，采集肝臟和血液。肝臟采用0．86%生理鹽水制備10%的勻漿，1 500×g4℃離心10 min，勻漿上清采用BCA法(鼎國生物)檢測蛋白濃度，-80℃下保存;血液采集后室溫放置1 h，1 500×g 4℃離心10 min分離血清，-80℃下保存。采用南京建成生物工程研究所試劑盒檢測上述樣品的GPx、SOD、CAT酶活以及NO、MDA水平。

1．2．5 溶菌酶活性檢測。上述肝臟勻漿上清和血清樣品參照肖克宇等［7］的方法檢測溶菌酶活性。

1．2．6 數(shù)據(jù)處理。試驗數(shù)據(jù)采用SPSS l3．0軟件進行統(tǒng)計與分析，方差齊性時進行Duncan’s多重比較，方差非齊性則采用Tamhane’ST2法進行方差分析。

2 結果與分析

2．1 Se-Y1發(fā)酵結果 制備的富硒酵母(Se-Y1)的生物量為(6．94 ±0．22)g/L，菌體硒含量為(1 446．90 ±7．36)μg/g，其中有機硒含量為(1 377．88 ±8．53)μg/g，有機硒轉化率為95．24%。

2．2 益生菌和有機硒對鰻鱺生長性能的影響 由表1可知，飼料中添加復合益生菌投喂鰻鱺后，與對照組相比，鰻鱺0～45 d的特定生長率提高113．79%，增重率提高了132．8%，餌料系數(shù)(0～45 d)降低31．53%，但是飼料中以富硒酵母形式添加有機硒后影響了這種效果。

2．3 益生菌和有機硒對鰻鱺抗氧化水平的影響 由表2可知，投喂益生菌45 d后鰻鱺肝臟組織SOD、CAT的酶活值比對照組分別提高了41．86%和84．96%，組織中MDA和NO的濃度則顯著下降，這表明益生菌可以提高鰻鱺肝臟抗氧化水平，降低氧化應激;試驗結束時，盡管投喂益生菌對鰻鱺肝臟SOD、CAT酶活的促進作用消失，但還是顯著降低了其中的MDA水平(表3)。酵母源有機硒的添加沒有進一步提高益生菌的抗氧化調節(jié)作用。此外，益生菌及有機硒的添加也沒有影響鰻鱺肝臟GPx的酶活，高劑量有機硒的長期投喂(125 d)有降低GPx酶活的趨勢(表3)。

2．4 益生菌和有機硒對鰻鱺血清溶菌酶活性的影響 投喂益生菌45 d后鰻鱺血清溶菌酶活性提高了145%，有機硒的添加沒有進一步提高溶菌酶活性，高濃度(0．8 mg/kg)有機硒抑制了益生菌對溶菌酶活性的促進作用。試驗結束時，各組鰻鱺的血清溶菌酶活性維持在較高水平，組間差異不顯著(表4)。

表4 日本鰻鱺肝血清溶菌酶活性的檢測結果

3 討論

在幼鰻生長早期，腸道源益生菌可以顯著提高生長性能、抗氧化水平和溶菌酶活性。這可能基于以下原因:①試驗采用的鰻鱺正處于稚鰻到幼鰻的發(fā)育階段，是(由海水)進入淡水環(huán)境的初期階段，這種理化環(huán)境的變化會影響魚類腸道的菌群結構;在魚類生長發(fā)育的早期，腸道也經(jīng)歷了不同菌群的定植與演替［8］。該研究采用的益生菌來源于成鰻腸道，屬于正常菌群，投喂后促進了幼鰻腸道菌群結構的改變和/或平衡的建立。②在魚類個體發(fā)育早期，消化道、免疫系統(tǒng)的發(fā)育尚未完善，尤其是腸道微生態(tài)平衡很容易受到干擾，通過投喂益生菌可以促進腸道微生態(tài)平衡的建立，發(fā)揮免疫調節(jié)等作用［9］。因此，在幼鰻生長早期，腸道源益生菌對提高幼鰻生長性能、抗氧化水平、免疫水平等發(fā)揮了積極作用。大量研究也證實，在仔魚期投喂益生菌可以起到更好的效果［5，10-12］。

該研究中長期投喂腸道源益生菌不能顯著改善鰻鱺的生長性能、抗氧化水平和溶菌酶活性。隨著幼鰻對環(huán)境改變的適應，腸道菌群結構趨于穩(wěn)定，益生菌對上述指標的促進作用消失。這與林煜［13］在歐洲鰻鱺益生菌免疫調節(jié)研究中的結果類似:對2年齡歐洲鰻鱺(Anguilla anguilla)投喂腸道源益生菌，不能提高吞噬活性、溶菌酶活性以及血清抗體水平，研究者認為，這是由于使用的益生菌為腸道正常菌群，因此沒有表現(xiàn)出免疫刺激作用。

該研究中有機硒沒有進一步提高益生菌的有益作用，0．8 mg/kg有機硒反而抑制了益生菌對鰻鱺特定生長率、GPx和溶菌酶活力的促進作用。一般認為，硒參與了GPx和硫氧還蛋白還原酶(Thioredoxin reductase，TR)的構成，對其酶活有促進作用;硒提高魚類的生長性能以及抗氧化、免疫水平等在虹鱒(Oncorhynchus mykiss)、大西洋鮭(Salmo salar)、斑點叉尾鮰(Ictalurus punctatus)、異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)、鯉(Cyprinus carpio)等都得到廣泛證實。上述試驗中硒的添加量為0．2～0．4 mg/kg，有機硒也多以富硒酵母的形式添加［2，14］。但是很多研究也發(fā)現(xiàn)，硒(有機硒或無機硒)并沒有提高GPx活性［15-16］，過量添加有機硒甚至降低了血清GPx活性［14］。硒作為微量元素，過量添加會引起毒性效應［2，14，17］。該研究中添加 0．8 mg/kg 有機硒產生的不利影響可能是由于硒過量所致。此外，在鰻鱺不同發(fā)育階段對硒的需求也可能存在差異，因此有必要進一步對不同發(fā)育階段的鰻鱺有機硒需求量進行研究，0．4 mg/kg的添加劑量可以作為下一步優(yōu)化有機硒添加劑量的參考值。

該研究證實了鰻鱺腸道源益生菌長孢婁徳酵母、乳明串珠菌、枯草芽孢桿菌在日本鰻鱺幼鰻生長早期可以提高其生長性能、抗氧化水平和溶菌酶活性，為生產中合理添加益生菌及節(jié)約成本提供了理論依據(jù)。

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