魏 麗,刁宏燕,吳 煒,汪超軍，李蘭娟

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院傳染病診治國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/

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·論 著·

腎移植術(shù)后T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞百分比參考范圍的研究*

魏 麗,刁宏燕,吳 煒,汪超軍△，李蘭娟

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院傳染病診治國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/

感染性疾病診治協(xié)同創(chuàng)新中心,杭州 310003)

目的 初步建立腎移植患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的百分比參考范圍。方法 67例健康對(duì)照組、169例腎移植患者于腎移植手術(shù)后1周清晨采集外周血，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞百分比。同時(shí)按年齡段劃分為3組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)：≤30歲(青年組)、31～49歲(中年組)、≥50歲(老年組)。結(jié)果 (1)建立了腎移植術(shù)后T淋巴細(xì)胞亞群和NK 細(xì)胞百分比的參考范圍：CD3+56.80%～64.54%；CD4+30.82%～36.43%；CD8+23.45%～27.32%；CD3+CD4+/CD3+CD8+1.35～1.68； NK 6.04%～8.35%。(2)腎移植術(shù)后不同性別間的T 淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(3)腎移植術(shù)后不同年齡間的T 淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)：與老年組比較，青年組和中年組腎移植術(shù)后CD8+細(xì)胞百分比明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，CD3+CD4+/CD3+CD8+明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 初步建立了腎移植術(shù)后的T淋巴細(xì)胞亞群和NK 細(xì)胞的參考范圍，同時(shí)發(fā)現(xiàn)腎移植術(shù)后隨年齡增長(zhǎng)CD8+細(xì)胞百分比降低，而CD3+CD4+/CD3+CD8+升高。

腎移植； 術(shù)后； T淋巴細(xì)胞亞群； 參考范圍

腎移植是治療中末期腎病的有效手段，而移植后的機(jī)體免疫狀態(tài)對(duì)移植腎的功能影響很大，目前尚無(wú)有效的評(píng)估技術(shù)。T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞作為臨床判斷患者狀態(tài)的一個(gè)敏感指標(biāo)，對(duì)臨床治療具有重要意義。腎移植術(shù)后的免疫狀態(tài)與健康人不同，而目前尚無(wú)腎移植術(shù)后T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的參考標(biāo)準(zhǔn)，本文旨在探討腎移植患者術(shù)后淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的參考范圍和不同年齡組的細(xì)胞免疫狀況，以期為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 全部腎移植病例為2013年1～12月在本院腎內(nèi)科住院患者，均為首次尸體腎移植受者，共169例，其中男114例，女55例，年齡10～66歲。年齡段劃分：≤30歲(青年組)52例、31～49歲(中年組)83例、≥50歲(老年組)34例。所有研究病例均于術(shù)后采用驍悉、FK506、強(qiáng)的松三聯(lián)抗排異治療，均于接受腎移植術(shù)后1周康復(fù)出院。健康對(duì)照組67例，其中男34例，女33例，均為體檢健康的人員，年齡10～68歲。

1.2 方法 腎移植手術(shù)后1周清晨采取靜脈血2 mL(乙二胺四乙酸抗凝)并立即檢測(cè)。采用三色流式細(xì)胞術(shù)對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞進(jìn)行分析檢測(cè)[1]。其中，檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群抗體采用PerCP標(biāo)記小鼠抗人CD3、FITC標(biāo)記小鼠抗人CD4、PE標(biāo)記小鼠抗人CD8單克隆抗體，檢測(cè)NK細(xì)胞(CD3+CD16/56+)抗體采用FITC標(biāo)記小鼠抗人CD3，PE標(biāo)記小鼠抗人CD16/56單克隆抗體。T淋巴細(xì)胞亞群抗體為美國(guó)BD公司產(chǎn)品，NK細(xì)胞(CD3+CD16/56+)為美國(guó)Beckman Coulter公司產(chǎn)品，儀器為美國(guó)Beckman Coulter FC500型流式細(xì)胞儀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，經(jīng)檢驗(yàn)淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞百分比符合正態(tài)分布，以均數(shù)、95%建立淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的正常參考范圍，不同性別間淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的比較采用獨(dú)立標(biāo)本t檢驗(yàn)，各年齡組淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞組間比較采用單因素方差檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同性別腎移植患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同性別腎移植患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞數(shù)據(jù)的構(gòu)成 ±s)

2.2 腎移植患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞的正常參考范圍，見表2。

2.3 各年齡組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞數(shù)據(jù)的分布，見表3。由表3可見，與老年組比較，青年組和中年組腎移植術(shù)后CD8+細(xì)胞百分比明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，CD3+CD4+/CD3+CD8+明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與健康對(duì)照組比較，腎移植患者CD3+細(xì)胞百分比、CD8+細(xì)胞百分比、NK細(xì)胞百分比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表2 腎移植患者T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞的正常參考范圍

表3 各年齡組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞數(shù)據(jù)的比較 ±s)

注：與老年組比較，*P<0.05，**P<0.01；與健康對(duì)照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

3 討 論

T淋巴細(xì)胞是參與細(xì)胞免疫和免疫調(diào)控的樞紐，T淋巴細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)平衡是維持機(jī)體免疫自穩(wěn)的重要因素[2]。同時(shí)T淋巴細(xì)胞亞群的變化反映了人體細(xì)胞免疫功能的改變，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)能快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群，并及時(shí)、準(zhǔn)確地判斷病情，評(píng)價(jià)治療效果[3-5]。NK細(xì)胞具有抗腫瘤，抗病毒感染，抗器官移植，參與T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)及其免疫調(diào)節(jié)的功能。NK細(xì)胞通過受體作用維持平衡、發(fā)揮殺傷效應(yīng)[6-7]。

同時(shí)，人體免疫狀態(tài)中年齡也是一重要因素[8]，有報(bào)道兒童外周血T淋巴細(xì)胞高于成人[9]，本文研究亦發(fā)現(xiàn)腎移植術(shù)后CD3+CD8+細(xì)胞百分比隨年齡的增長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)。青年組、中年組CD3+CD8+細(xì)胞百分比明顯高于老年組，提示腎移植年輕患者細(xì)胞免疫功能活躍，老年患者機(jī)體本身免疫低下，細(xì)胞免疫反應(yīng)降低。

本文研究發(fā)現(xiàn)，與健康對(duì)照組比較，腎移植患者CD3+細(xì)胞百分比、CD8+細(xì)胞百分比、NK細(xì)胞百分比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，可見以健康人的標(biāo)準(zhǔn)難以準(zhǔn)確評(píng)估腎移植患者術(shù)后的免疫狀態(tài)。本文在此基礎(chǔ)上建立了腎移植術(shù)后的參考范圍：CD3+56.80%～64.54%，CD4+30.82%～36.43%，CD8+23.45%～27.32%，CD3+CD4+/CD3+CD8+1.35～1.68，NK 6.04%～8.35%，以期為臨床診斷和治療提供更準(zhǔn)確的參考。

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Study on reference values of T-lymphocyte subsets and NK cell percentage after renal transplant operation*

WEILi,DIAOHong-yan,WUWei,WANGChao-jun△,LILan-juan

(StateKeyLaboratoryforDiagnosisandTreatmentofInfectiousDisease,FirstAffiliatedHospital,CollegeofMedicine,ZhejiangUniversity/CollaborativeInnovationCenterforDiagnosisandTreatmentofInfectiousDiseases,Hangzhou,Zhejiang310003,China)

Objective To preliminarily establish the reference values of peripheral blood T-lymphocyte subsets and NK cell percentage in renal transplant patients.Methods Peripheral blood was collected from 67 cases of control and 169 cases of renal transplant in the early morning at postoperative 1 week.T-lymphocyte subsets and NK cell percentage were detected by the flow cytometry.169 patients with renal transplant were divided into three groups according to age section for conducting statistics:≤30 years old(youth group),31-49 years old(middle age group) and ≥50 years old(older age group).Results (1)The reference values of T-lymphocyte subsets and NK cell percentage were established:CD3+:56.80%-64.54%;CD4+:30.82%-36.43%;CD8+:23.45%-27.32%;CD3+CD4+/CD3+CD8+:1.35%-1.68%;NK:6.04%-8.35%.(2) T-lymphocyte subsets and NK cell percentage showed no statistical differences between genders(P>0.05).(3) T-lymphocyte subsets and NK cell percentage showed statistical differences among different ages(P<0.05).Compared with the older age group,the level of CD8+in the youth group and the middle age group was significantly increased,while CD3+CD4+/ CD3+CD8+was significantly decreased(P<0.01).Conclusion The reference values of T lymphocyte subsets and NK cell percentage in renal transplant patients are preliminarily established.Meanwhile it is found that the level of CD8+is decreased with the age increase after renal transplant,while CD3+CD4+/CD3+CD8+is increased.

renal transplantation; postoperation; T-lymphocyte subsets; reference values

浙江省錢江人才計(jì)劃資助項(xiàng)目(2012R10G2010210)。

魏麗，女，實(shí)驗(yàn)員，碩士，主要從事臨床流式檢測(cè)工作。△

，E-mail:wangchaojundf@hotmail.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.006

A

1672-9455(2015)02-0155-02

2014-06-05

2014-11-13)