孟永海，史連宏，楊欣，翟春梅

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150040；2.黑龍江省中藥及天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150040）

花椒（Pericarpium Zanthoxyli）為蕓香科植物青椒（Zanthoxylum schinifolium sieb.et Zucc） 或花椒（Zanthoxylum bungeanum Maxim）的干燥成熟果皮，又稱青花椒、狗椒、蜀椒、紅椒、紅花椒。其味辛，性溫，歸脾、胃、腎經(jīng)，分布于我國(guó)北部至西南，華北、華中、華南均有分布。研究表明，花椒屬植物的主要化學(xué)成分有生物堿、酰胺、香豆素、木脂素、揮發(fā)油及脂肪酸等。揮發(fā)油作為中藥活性成分的主要組成之一，對(duì)心消化系統(tǒng)、血管系統(tǒng)、凝血功能、免疫機(jī)能有較強(qiáng)的藥理活性，此外還有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗炎、抑菌殺蟲等功效[1-4]。雖已有文獻(xiàn)報(bào)道花椒的揮發(fā)油研究，但本文在此基礎(chǔ)上對(duì)花椒的GC-MS條件優(yōu)化得到更多的成分，使其研究更加準(zhǔn)確。本文采用水蒸氣蒸餾法提取花椒揮發(fā)油，并利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)揮發(fā)油進(jìn)行分離鑒定，以期為花椒的綜合開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

供試材料為花椒藥材，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥資源教研室王振月教授鑒定為蕓香科植物花椒（Zanthoxylum bungeanum M axim）的干燥成熟果皮。

1.2 儀器及試劑

Agilent7890A/5975C 氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國(guó)，Agilent）。

正己烷、無(wú)水Na2SO4均為為國(guó)產(chǎn)分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 花椒揮發(fā)油的提取

取干燥的花椒藥材100g，粉碎，置于1000mL圓底燒瓶中，加入5000mL 蒸餾水浸泡12h，于電熱套中微沸回流提取6h，提取的揮發(fā)油用1mL 正己烷萃取，得到具有芳香氣味的透明油狀液體2mL（含正己烷），經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，0.22μm 微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)行GC-MS 分析[5，6]。

2.2 GC-MS 分析條件

2.2.1 氣相色譜 DB-17 高效毛細(xì)管色譜柱（60m×250μm×0.25μm）；程序升溫：初始溫度40℃，以5℃·min-1升至280℃，保持5min，總分析時(shí)間為53min；進(jìn)樣量：1μL，分流比：10∶1，載氣：高純He。

2.2.2 質(zhì)譜條件 電離方式EI，電子能量70eV，離子源溫度230℃，四級(jí)桿150℃，溶劑延遲6min，質(zhì)量掃描范圍m/z：20～550，全掃描方式。

3 結(jié)果

采用GC-MS 對(duì)花椒揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行了分析，得到樣品的總離子流圖（圖1），將各組分質(zhì)譜數(shù)據(jù)由NIST 質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索并結(jié)合有關(guān)參考文獻(xiàn)等，鑒定了其中56 個(gè)化合物，用峰面積歸一化法計(jì)算各成分在揮發(fā)油的相對(duì)含量表1。

圖1 花椒揮發(fā)油總離子流圖Fig.1 Ion beam of volatile oil in Chinese prickly ash

從表1 可知，從花椒揮發(fā)油中共鑒定出56 個(gè)化合物，其中主要成分為乙酰丁香酮（12.711%）、（-）-4-萜品醇（11.911%）、4-甲基-1-（1-甲基乙基）-二環(huán)[3.1.0] 己-2-烯（8.866%）、萜品烯（5.922%）、芳樟醇（5.777%）、桉葉油醇（4.483%）、4,7,7-三甲基二環(huán)[4.1.0]庚-4-烯（4.312%）、β-水芹烯.（3.745%）、檸檬烯（3.434%）、α-松油醇（3.349%）、鄰-異丙基苯（3.149%）。

4 討論

花椒味辛、性熱，歸脾、胃經(jīng)；有芳香健胃，溫中散寒，除濕止痛，殺蟲解毒，止癢解腥之功效；主要治療嘔吐，風(fēng)寒濕痹[7，8]，從花椒中共鑒定出56 個(gè)化合物，相對(duì)含量占揮發(fā)油總量的88.375%，其中主要成分為乙酰丁香酮（12.711%）、（-）-4-萜品醇（11.911%）、4-甲基-1-（1-甲基乙基）-二環(huán)[3.1.0]己-2-烯（8.866%）、萜品烯（5.922%）、芳樟醇（5.777%）、桉葉油醇（4.483%）、4,7,7-三甲基二環(huán)[4.1.0]庚-4-烯（4.312%）、β-水芹烯.（3.745%）、檸檬烯（3.434%）、α-松油醇（3.349%）、鄰-異丙基苯（3.149%）。其中乙酰丁香酮（AS）是一種酚類化合物，可誘發(fā)農(nóng)桿菌內(nèi)Ti 或Ri 質(zhì)粒DNA 上Vir 區(qū)基因的活化和高效表達(dá)，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化中。也有研究表明乙酰丁香酮在植物遺傳轉(zhuǎn)化中起著重要的作用[9，10]。芳樟醇等萜烯類化合物，對(duì)大腸桿菌、變形桿菌、腸炎膜桿菌、葡萄球菌、釀酒酵母菌、白色含球菌、黑曲霉菌、瓊脂等有很好的抗菌活性。國(guó)外很早就有報(bào)道含有芳樟醇的揮發(fā)油或植物可以用來(lái)催眠和鎮(zhèn)靜劑使用。芳樟醇具有掩蓋不良?xì)馕赌芰?，還對(duì)排泄物，特別是人、畜糞便的除臭，芳樟醇是這些除臭劑配方中主要的組成部分。桉葉油醇用于口腔劑香精的調(diào)配和醫(yī)藥產(chǎn)品的制造，作為食品添加劑，也用于配制牙膏香精等，用途非常廣泛。

表1 花椒揮發(fā)油化學(xué)成分Tab.1 Chemical components of volatile oil in Chinese prickly ash

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.149.

［2］袁超,郭紅祥,張慧珍.花椒揮發(fā)油研究進(jìn)展［J］.江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2008,20（5）:32-33.

［3］黃羅生,顧燕飛,李紅.中藥揮發(fā)油及芳香性藥物的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)中藥雜志,2009,34（12）:1605-1611.

［4］袁娟麗.花椒揮發(fā)油的抗炎、鎮(zhèn)痛作用［J］.中藥材，2010,5（5）:794-797.

［5］韓勝男,李妍,張曉杭,等.花椒揮發(fā)油的提取工藝優(yōu)化及抗腫瘤活性分析［J］.食品科學(xué),2014,35（18）:13-16.

［6］梁輝,趙鐳,楊靜,等.花椒化學(xué)成分及藥理作用的研究進(jìn)展［J］.華西藥學(xué)雜志,2014,29（1）:91-94.

［7］趙志峰,覃哲,雷紹榮.三種花椒精油的提取研究［J］.食品工業(yè)科技,2007,28（12）:143-147.

［8］尹靖先,彭玉華,張三印.花椒藥用的研究進(jìn)展［J］.四川中醫(yī),2004,22（12）:29-30.

［9］董喜才,杜建中,王安樂(lè),等.乙酰丁香酮在植物轉(zhuǎn)基因研究中的作用［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2011,27（5）:292-299.

［10］鄧藝,曾炳山,趙思東,等.乙酰丁香酮在農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化中的作用機(jī)制及應(yīng)用［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（5）：2229-2232.