耿 薇，魏永生，劉 靜

（咸陽師范學院化學與化工學院，陜西咸陽712000）

核桃仁營養(yǎng)保健價值很高，中醫(yī)認為,核桃性溫,味甘,無毒,有健胃、補血、潤肺、益胃、養(yǎng)神等功效。核桃仁的含油率一般在70%左右，主要由亞油酸等不飽和脂肪酸組成，具有防治血栓、降血壓、防止血小板聚集、加速膽固醇排泄、促進卵磷脂合成、抗衰老的特殊功效。脂肪酸是人體不可缺少的營養(yǎng)成分之一，與健康密切相關[1，2]。已有用峰面積歸一法分析核桃仁中的脂肪酸含量[3，4]，本文通過氣相色譜-質譜聯(lián)用（GC-MS）的外標法對核桃仁中的脂肪酸進行定量分析。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

GCMS-QP2010 氣相色譜-質譜聯(lián)用儀（日本島津SHIMADZU 制作所），RE-52AA 旋轉蒸發(fā)器（上海嘉鵬科技有限公司），10μL 微量進樣器（澳大利亞SGE），Sartorius CP124S 電子天平（Max 120g，d=0.1mg），20～200μL 移液器（Thermo Finnpipette），SHB-IIIA 循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司），SB4200DTD 超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司），DF-101S 集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（河南省予華儀器有限公司），HR7625 飛利浦食品加工機，標準檢驗篩（40 目，孔徑0.45 毫米），101 型電熱鼓風干燥箱（北京科偉永興儀器有限公司），索氏提取器。

核桃仁、硫酸、乙醚、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸，均為分析純。

1.2 分析條件

氣相色譜條件：J&W DB-WAX 彈性石英毛細管色譜柱（30m×0.25mm×0.25μm）；載氣為高純He，純度≥99.999%；柱溫：130～240。柱初溫130℃，保持1min，以20℃·min-1升溫至230℃，保持5min，再以20℃·min-1升溫至240℃，保持6.5min，共18.00min。進樣口溫度250℃；柱前壓84.6kPa，柱流量1.00mL·min-1，分流比1∶30；用微量進樣器進樣1.0μL。

質譜條件：EI 離子源，離子源溫度200℃，GC-MS 接口溫度200℃，電子能量70eV，電子倍增器電壓0.97kV[2]，質量掃描范圍29～450m·z-1，溶劑峰切除時間1.6min，質譜檢測起測時間1.7min。

1.3 核桃仁油的提取

將核桃仁烘干，粉碎并過40 目篩。稱取一定質量的樣品，移入濾紙筒內，以乙醚作溶劑，利用索式提取器，恒溫水浴30℃回流3h。倒出上清液，抽濾，用旋轉蒸發(fā)儀將濾液蒸去乙醚，得到核桃仁油樣品。

1.4 脂肪酸的甲酯化

準確稱取脂肪酸或樣品于25mL 比色管中，準確加入1%硫酸-甲醇溶液2.0mL，于70℃水浴加熱60min。再加正己烷定容至10mL，振蕩，加水至25mL，振蕩，靜置24h，吸取上層脂肪酸甲酯，做GC-MS 分析。

1.5 脂肪酸標準溶液的配制

選取常見的4 種脂肪酸：油酸，亞油酸，硬脂酸，棕櫚酸。準確稱量7 份4 種脂肪酸的標準系列于25mL 比色管中，按1.4 配制成標準溶液，做GC-MS分析。

2 結果與討論

2.1 4 種脂肪酸的標準曲線

圖1 為4 種脂肪酸標準品的GC-MS 總離子流圖，對GC-MS 譜圖進行鑒定和定量分析，應用SHIMADZU GCMSsolution Release 2.10 專業(yè)分析軟件。根據GC-MS 檢測得到的質譜信息，用質譜圖檢索數據庫NIST 147 進行檢索，通過與標準譜圖對照及質譜碎片對峰的分析，確定每一個組分的化學結構[2]。采用計算機檢索與人工解析各峰相應的質譜圖。

繪制4 種脂肪酸的標準曲線，得到標準曲線方程及相關系數見表1。

圖1 4 種脂肪酸標準品的GC-MS 總離子流圖Fig.1 The TIC of GC-MS of the four standard substance of fatty acids

表1 4 種脂肪酸的標準曲線方程及相關系數Tab.1 The calibration curve equation and correlation coefficent of the four fatty acids

2.2 樣品分析結果

圖2 為核桃仁中脂肪酸分析的GC-MS 總離子流圖。核桃仁中4 種脂肪酸的含量見表2。

圖2 核桃仁中脂肪酸分析的GC-MS 總離子流圖Fig.2 The TIC of GC-MS of fatty acids from the walnut kernel

表2 核桃仁中4 種脂肪酸的含量Tab.2 The content of four fatty acids from the walnut kernel

2.3 回收率與精密度

準確稱取5 份樣品于25mL 比色管中，分別加入油酸，亞油酸，硬脂酸，棕櫚酸的標準品，按1.4 配制溶液，做GC-MS 分析。樣品中4 種脂肪酸含量的回收率與精密度見表3。

表3 4 種脂肪酸的回收率與精密度Tab.3 The recovery and precision of four fatty acids

2.4 討論

用外標法分析核桃仁中的脂肪酸含量，是絕對定量，需要標準樣品，做標準曲線，準確度較高。核桃仁中4 種脂肪酸含量：亞油酸＞油酸＞棕櫚酸＞硬脂酸。相對標準偏差RSD（n=5）在2.27%～11.98%之間，樣品回收率測定在81.0%～109.0%之間。

［1］魏永生，鄭敏燕，耿薇，等.常用動、植物食用油中脂肪酸組成的分析［J］.食品科學，2012,33（16）：188-193.

［2］鄭敏燕，魏永生，耿薇.利用氣相色譜/質譜聯(lián)合技術研究核桃仁油脂肪酸組成［J］.咸陽師范學院學報，2006，21（4）:26-28.

［3］張琦，程濱，趙瑞芬，等.不同品種核桃仁的脂肪酸與氨基酸含量分析［J］.山西農業(yè)科學,2011，（11）.

［4］趙志剛.山核桃仁油中脂肪酸組成的分析及評價［J］.安徽農業(yè)科學，2009，（6）.