黃 瑛 卿朝輝 羅衛(wèi)芳 蔣淑明 潘慧宜 魯 義 堯新華 馬萬(wàn)里

(廣州市中醫(yī)醫(yī)院 1皮膚科；2麻醉科，廣東 廣州 510130)

·論著·

甘草酸苷對(duì)銀屑病大鼠的作用

黃 瑛1卿朝輝2羅衛(wèi)芳2蔣淑明1潘慧宜1魯 義2堯新華2馬萬(wàn)里1

(廣州市中醫(yī)醫(yī)院1皮膚科；2麻醉科，廣東 廣州 510130)

目的:觀察甘草酸苷對(duì)銀屑病大鼠的作用，探討其可能的作用機(jī)制。方法：健康雌性SD大鼠，體質(zhì)量180～210 g，腹腔注射苯甲酸雌二醇，形成雌激素期陰道上皮銀屑病模型。將40只模型大鼠隨機(jī)分成4組(n=10)：對(duì)照組、甘草酸苷1 mg組、甘草酸苷2 mg組和甘草酸苷4 mg組。上述4組分別于大鼠腹腔注入生理鹽水、甘草酸苷1、2和4 mg。用光學(xué)顯微鏡觀察大鼠陰道上皮基底細(xì)胞有絲分裂情況,計(jì)數(shù)300個(gè)基底細(xì)胞中的有絲分裂數(shù)，計(jì)算有絲分裂指數(shù)。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)定大鼠血清細(xì)胞因子IL-4和IL-10的含量。結(jié)果：甘草酸苷1 mg組、甘草酸苷2 mg組和甘草酸苷4 mg組的有絲分裂指數(shù)均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，IL-4和IL-10 的含量均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論：甘草酸苷具有抑制銀屑病大鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂的作用，其作用可能與血清細(xì)胞因子IL-4和IL-10的含量增高有關(guān)。

甘草酸苷；銀屑?。挥薪z分裂指數(shù)；細(xì)胞因子

銀屑病又稱(chēng)“牛皮癬”，是一種臨床特點(diǎn)為紅斑、丘疹、覆蓋有不等鱗屑、病程漫長(zhǎng)、反復(fù)發(fā)作的遷延性皮膚病[1]。臨床上甘草酸苷治療銀屑病，療效確切且廣泛應(yīng)用，但具體作用機(jī)制尚未明確[2]。本研究擬建立大鼠銀屑病模型，觀察甘草酸苷對(duì)銀屑病大鼠的作用，探討其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雌性SD大鼠，體質(zhì)量180～210 g，7～9周齡，由中山大學(xué)疼痛研究中心提供。實(shí)驗(yàn)期間在標(biāo)準(zhǔn)條件下[室內(nèi)亮度每12 h明/暗循環(huán)，室溫(22±1)℃]，自由攝取水和食物。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立 實(shí)驗(yàn)大鼠每10 g體質(zhì)量腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液0.2 mg，每日1次，連續(xù)3 d，使大鼠處于雌激素期，形成雌激素期陰道上皮銀屑病模型，2 d后，用于下一步實(shí)驗(yàn)。模型鼠與正常鼠比較，大鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂指數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明造模成功。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 將40只模型大鼠隨機(jī)分成4組(n=10):對(duì)照組、甘草酸苷1mg組、甘草酸苷2 mg組和甘草酸苷4 mg組。

1.2.3 藥物實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)藥物：對(duì)照組(生理鹽水)、甘草酸苷1 mg組(甘草酸苷1 mg，山東瑞陽(yáng)制藥有限公司，批號(hào)14012406)、甘草酸苷2 mg組(甘草酸苷2 mg)、甘草酸苷4 mg組(甘草酸苷4 mg)。各組藥物均用生理鹽水溶解，配成2 mL溶液分別注入大鼠腹腔，每天1次，共14 d。

1.2.4 計(jì)數(shù)有絲分裂數(shù)和計(jì)算有絲分裂指數(shù) 藥物實(shí)驗(yàn)完成末次給藥2 h后，大鼠腹腔注射秋水仙堿2 mg/kg，使細(xì)胞有絲分裂周期停滯于有絲分裂中期，便于計(jì)數(shù)。6 h后頸椎脫位處死大鼠，取其陰道組織用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，HE染色，用光學(xué)顯微鏡觀察大鼠陰道上皮基底細(xì)胞有絲分裂情況,計(jì)數(shù)300個(gè)基底細(xì)胞中的有絲分裂數(shù)[3]。有絲分裂指數(shù)即為每100個(gè)基底細(xì)胞中的有絲分裂數(shù)。

1.2.5 測(cè)定血清細(xì)胞因子IL-4和IL-10的含量 藥物實(shí)驗(yàn)完成后，取大鼠血約4 mL，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)，測(cè)定血清細(xì)胞因子IL-4和IL-10的含量，具體按照 ELISA 試劑盒操作說(shuō)明完成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 有絲分裂指數(shù)的比較

甘草酸苷1 mg組、甘草酸苷2 mg組和甘草酸苷4 mg組的有絲分裂指數(shù)均低于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。各實(shí)驗(yàn)組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 4組有絲分裂指數(shù)的比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

2.2 IL-4和IL-10含量的比較

甘草酸苷1 mg組、甘草酸苷2 mg組和甘草酸苷4 mg組的IL-4和IL-10 含量均高于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 4組IL-4和IL-10含量的比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

3 討 論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為銀屑病與遺傳、感染、代謝障礙、內(nèi)分泌失調(diào)、神經(jīng)精神因素及免疫紊亂等多方面因素有關(guān)[4]。近年來(lái)研究還發(fā)現(xiàn)，銀屑病是與免疫學(xué)密切相關(guān)的疾病，包括細(xì)胞因子、黏附分子、各種免疫細(xì)胞等多種因素都介入了銀屑病的病理生理過(guò)程[5,6]。但由于銀屑病的確切病因與發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚,故難治易發(fā)。

甘草酸苷由1分子的甘草次酸和兩分子的葡萄糖醛酸組成，具有抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、類(lèi)激素樣作用，并具有免疫調(diào)節(jié)、抑制病毒增殖及保護(hù)肝細(xì)胞膜的作用[7]。甘草酸苷免疫調(diào)節(jié)作用表現(xiàn)在對(duì)免疫活性細(xì)胞、細(xì)胞因子、補(bǔ)體等多方面。近年來(lái)，甘草酸苷已用于多種皮膚疾病的治療，尤其是與免疫功能異常有關(guān)的疾病包括銀屑病。甘草酸苷治療銀屑病目前僅停留在臨床觀察和傳統(tǒng)的臨床驗(yàn)案階段，沒(méi)有涉及到作用機(jī)制的研究，因此，探討作用機(jī)制成為本研究的主要任務(wù)。

人類(lèi)銀屑病表皮的組織病理學(xué)主要特點(diǎn)包括增生過(guò)快和角化不全兩方面。大鼠雌激素期陰道上皮增生活躍,有絲分裂增多,細(xì)胞轉(zhuǎn)換加快，模擬了人類(lèi)銀屑病表皮增生過(guò)快的特點(diǎn)，比較大鼠雌激素期陰道上皮基底細(xì)胞有絲分裂指數(shù)，可較好地評(píng)價(jià)藥物抑制細(xì)胞有絲分裂作用[3]。因此，本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型選用大鼠雌激素期陰道上皮模型。

近年有研究表明[8，9]，甘草酸苷并非單純地影響某一種或幾種細(xì)胞因子的升高或降低,而是可以打破機(jī)體Th1和Th2類(lèi)細(xì)胞因子的失衡狀態(tài),對(duì)于機(jī)體免疫功能失調(diào)的修正意義重大。秦小衛(wèi)等研究也發(fā)現(xiàn)，甘草酸苷可抑制斑禿患者Thl型細(xì)胞因子表達(dá)、下調(diào)IFN-γ及TNF-β表達(dá)水平，并可上調(diào)Th2型細(xì)胞因子IL-4及IL-10表達(dá)水平[11,12]。本研究結(jié)果表明，甘草酸苷1 mg組、甘草酸苷2 mg組和甘草酸苷4mg組的大鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂指數(shù)均明顯低于對(duì)照組，大鼠血清細(xì)胞因子IL-4和IL-10 的含量均明顯高于對(duì)照組，說(shuō)明甘草酸苷具有抑制銀屑病大鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂的作用，其作用可能與血清細(xì)胞因子IL-4和IL-10 的含量增高有關(guān)。但是，銀屑病發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜[13]，涉及到多種細(xì)胞因子、趨化因子及炎癥介質(zhì)，甘草酸苷是否同時(shí)在其他環(huán)節(jié)中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，尚有待進(jìn)一步研究。

[1] 許 文.銀屑病患者生活質(zhì)量的影響因素分析[J].廣東醫(yī)學(xué)，2012,33(24):3790-3792.

[2] 魏 群,韓 威,衡 威,等.復(fù)方甘草酸苷粉針治療尋常型銀屑病療效觀察[J].實(shí)用藥物與臨床,2010,13(4):304.

[3] 鄭海燕，李忻紅.中藥白疕合劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性銀屑病小鼠模型的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志,2012,11(3):149-151.

[4] 劉瓦利,何 偉. 銀屑病的病因與發(fā)病機(jī)制[J].中國(guó)臨床醫(yī)生，2009,37(8):7-8.

[5] 段行武.中藥治療銀屑病的研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床醫(yī)生雜志，2007,35(7):32-35.

[6] 唐 皓,徐 嘉,粱艷冰,等.大鼠細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子-1基因的原核克隆表達(dá)和免疫學(xué)分析[J].中華生物醫(yī)學(xué)工程雜志,2010,16(5):448-452.

[7] 王英杰.復(fù)方甘草酸苷的皮膚科臨床應(yīng)用[J]．皮膚病與性病，2011,33(2):87-92.

[8] 陳觀尚.復(fù)方甘草酸苷治療慢性乙型肝炎的療效觀察及對(duì)IL-8和IL-10的影響[J].廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,28(2):143-144.

[9] 王大南,于 淼,馮永輝,等.甘草酸苷調(diào)節(jié)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的研究[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2009,25(9):805-807.

[10] 秦小衛(wèi)，陳麗芳. 復(fù)方甘草酸苷對(duì)斑禿患者外周血單一核細(xì)胞中γ干擾素、腫瘤壞死因子β表達(dá)的調(diào)節(jié)作用[J]．中華皮膚科雜志，2011,44(12)：877-879．

[11] 秦小衛(wèi)，史維平. 復(fù)方甘草酸苷對(duì)斑禿患者PBMC中IL-4、IL-10表達(dá)的調(diào)節(jié)作用[J]．中國(guó)藥物與臨床,2010,10(5)：554-556.

[12] 李旺林,蘭 平,吳小劍,等.多形螺旋線蟲(chóng)對(duì)T細(xì)胞誘導(dǎo)的小鼠腸炎CD4+T細(xì)胞分泌和浸潤(rùn)的影響[J].中華生物醫(yī)學(xué)工程雜志,2011,17(2):101-104.

[13] 夏登梅,郭生紅,李 薇.銀屑病發(fā)病相關(guān)免疫機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 皮膚病與性病,2014,36(2):79-82.

(本文編輯:王馨)

Effect of Glycyrrhizin on psoriasis in rats

HuangYing1,QingZhaohui2,LuoWeifang2,JiangShuming1,PanHuiyi1,LuYi2,YaoXinhua2,MaWanli1

(1DepartmentofDermatology,GuangzhouHospitalofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou510130;2DepartmentofAnesthesiology,GuangzhouHospitalofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou510130,China)

Objective:To determine the effect of Glycyrrhizin on psoriasis rat model of psoriasis, and investigate its possible mechanism. Methods:Healthy female SD rats weighing 180-210 g were given estradiol benzoate by intraperitoneal injection to establish model of psoriasis in vaginal epithelial during the period of estrogen secretion. Forty rat models were randomly divided into four groups(n=10):model group, 1mg Glycyrrhizin groupn, 2 mg Glycyrrhizin group and 4 mg Glycyrrhizin. And each group was given normal saline, 1, 2 and 4mg Glycyrrhizin by intraperitoneal injection, respectively. Mitosis in vaginal epithelial basal cells of rats was observed by optical microscope, and the numbers of mitosis in 300 basal cells were counted. And the mitotic index was calculated. The content of IL-4 and IL-10 in rat serum was detected by enzyme-linked immuno sorbent assay (ELISA). Results:Mitotic indexes in 1mg Glycyrrhizin group Glycyrrhizin, 2mg Glycyrrhizin group Glycyrrhizin, and 4mg Glycyrrhizin group Glycyrrhizinwere all significantly lower than that in the model group(P<0.05), whereas the content of IL-4 and IL-10 in the three groups were significantly higher than that in the model group(P<0.05).Conclusion:Glycyrrhizin may exert the effect of inhibition of vaginal epithelial mitosis in rats with psoriasis. And the underlying mechanism may be associated with the increased content of serum IL-4 and IL-10Glycyrrhizin.

Glycyrrhizin; psoriasis; mitotic index; cytokine

10.3969/j.issn.2095-9664.2015.01.006

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(02310380218378045)。

黃 瑛(1968-)，女，副主任護(hù)師，本科。

R758.6

A

2095-9664(2015)01-0021-03

2014-10-10)

研究方向：皮膚科臨床護(hù)理。