張傳利等

摘要：在咖啡殼中添加不同比例的刨花或棉籽殼進(jìn)行虎奶菇的制種試驗(yàn)，以探討咖啡殼制備虎奶菇菌種的可能性。以菌絲生長(zhǎng)情況及菌種使用效果為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選以咖啡殼為主要原料生產(chǎn)虎奶菇菌種的培養(yǎng)基。綜合評(píng)價(jià)萌發(fā)時(shí)間、滿袋時(shí)間、菌絲日生長(zhǎng)速度、密度、長(zhǎng)勢(shì)及菌種產(chǎn)量等各項(xiàng)指標(biāo)，篩選出配方Ⅱ（咖啡殼50%、刨花30%、麩皮18%、石膏1%、石灰1%）培養(yǎng)基為較優(yōu)培養(yǎng)基。方差分析結(jié)果表明，與生產(chǎn)中最常用的棉籽殼麩皮對(duì)照培養(yǎng)基相比，配方Ⅱ培養(yǎng)基生產(chǎn)的菌種在萌發(fā)定植時(shí)間、菌絲密度、色澤長(zhǎng)勢(shì)、抗老化、滿袋時(shí)間方面差異不顯著，且其感染率降低20～25百分點(diǎn)?？梢?jiàn)，經(jīng)過(guò)合理設(shè)計(jì)，咖啡殼混合其他原料可以作為制備虎奶菇菌種的良好材料。

關(guān)鍵詞：咖啡殼；培養(yǎng)基；虎奶菇；菌種

中圖分類號(hào)：S646.04文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2015）02-0249-03

收稿日期：2014-09-08

基金項(xiàng)目：云南省教育廳項(xiàng)目（編號(hào)：2012Z131C）；云南農(nóng)業(yè)大學(xué)熱帶作物學(xué)院科研項(xiàng)目（編號(hào)：2014KY011）。

作者簡(jiǎn)介：張傳利（1981—），男，山東曲阜人，碩士，講師，主要從事生物技術(shù)方面的教學(xué)與科研工作。E-mail：zhchuanli00@163.com?；⒛坦絒Pleurotus tuber-regium（Fr.）Sing]別稱菌核側(cè)耳、虎奶菌、核耳菇、茯苓側(cè)耳、南洋茯苓，是熱帶和亞熱帶地區(qū)一種名貴的藥食兼用真菌，隸屬擔(dān)子菌亞門（Basidiomycotina）層菌綱（Hymenomycetes）傘菌目（Agaricales）側(cè)耳科（Pleurotaceae）側(cè)耳屬（Pleurotus），為具菌核真菌，與茯苓（子實(shí)體不可食）、豬苓（菌核不可食）不同，其子實(shí)體與菌核皆能食用[1]?；⒛坦礁缓鞍踪|(zhì)、人體所必需的氨基酸、支鏈氨基酸、兒童氨基酸、甜味氨基酸、脂肪酸、微量元素以及多糖蛋白復(fù)合體，可以治療胃病、便秘、發(fā)燒、感冒、水腫、胸痛、痔瘡、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、天花、哮喘、糖尿病、冠心病、高血壓等疾病和營(yíng)養(yǎng)失調(diào)的嬰孩[1-2]。在當(dāng)今國(guó)內(nèi)外掀起“天然、保健食品”熱潮之際，虎奶菇已引起人們的重視，市場(chǎng)前景廣闊。

咖啡殼是咖啡初加工過(guò)程中產(chǎn)生的副產(chǎn)品，據(jù)報(bào)道，2012年在云南熱區(qū)年產(chǎn)咖啡殼約2.3萬(wàn)t，目前其資源開(kāi)發(fā)利用很低，除少部分用作生產(chǎn)木炭燃料外，絕大部分被當(dāng)作廢棄物處理；咖啡殼含有一定量的蛋白質(zhì)、多種纖維素和礦物質(zhì)元素，木纖維化程度高于稻草，經(jīng)加工后可作為食用菌和藥用菌的培養(yǎng)料，替代一部分木屑和棉籽殼[3-4]，這不僅有效合理利用了資源，起到降低成本和保護(hù)森林資源的作用，還為咖啡副產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)利用探索出一條新的途徑，是一種經(jīng)濟(jì)的資源節(jié)約型、環(huán)境友好型的生產(chǎn)方式，應(yīng)大力提倡和發(fā)展。

近年來(lái)，在食用菌產(chǎn)業(yè)中，作為生產(chǎn)主料的棉籽殼、木屑、麩皮等原料價(jià)格不斷上漲和“菌林矛盾”的不斷突出，為了降低生產(chǎn)成本和獲得充足的生產(chǎn)原料，企業(yè)急需找尋和開(kāi)發(fā)利用一些生產(chǎn)成本相對(duì)廉價(jià)的新原料作為栽培基料。因此，筆者結(jié)合云南熱區(qū)產(chǎn)業(yè)實(shí)際情況，將咖啡副產(chǎn)品資源作為食用菌的主料進(jìn)行有效的開(kāi)發(fā)利用，并在彩云菇、姬松茸、白參菌等珍稀食用菌栽培上取得成功[4-5]。但是，在國(guó)內(nèi)外還未有利用咖啡殼制作菌核側(cè)耳栽培種和生產(chǎn)栽培料的報(bào)道。試驗(yàn)利用咖啡殼為主料進(jìn)行菌核側(cè)耳栽培種制作，旨在篩選該珍稀藥食兼用菌的最適培養(yǎng)配方，為拓寬咖啡殼這一資源在食用菌生產(chǎn)中的利用提供理論依據(jù)并為廣大食用菌生產(chǎn)者提供一定參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試菌株為虎奶菇1號(hào)，引自江西撫州金山食用菌研究所。供試原料包括咖啡殼（購(gòu)于云南省普洱市咖啡加工廠），刨花（購(gòu)于為普洱市木材加工廠），棉籽殼、麩皮、石灰、石膏（均購(gòu)自普洱市五一市場(chǎng)）等。母種培養(yǎng)基采用馬鈴薯麩皮綜合培養(yǎng)基[5]；原種培養(yǎng)基采用刨花木屑麩皮培養(yǎng)基[4]。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1栽培種培養(yǎng)基配方設(shè)計(jì)根據(jù)咖啡殼、刨花和棉籽殼的理化性質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分，以普遍采用的生產(chǎn)虎奶菇菌種的棉籽殼麩皮培養(yǎng)基為對(duì)照，主要按單一咖啡殼、咖啡殼與刨花、咖啡殼與棉籽殼設(shè)計(jì)3種培養(yǎng)基配方，具體配方見(jiàn)表1。

1.2.2栽培種培養(yǎng)基的篩選根據(jù)各配方比例分別稱取各種原料，采用12.00 cm×24.00 cm×0.04 cm的聚乙烯塑料袋，裝干料0.20 kg/袋左右，每個(gè)配方重復(fù)8袋。常規(guī)方法拌料、裝袋，含水量控制在65%左右，pH值7.5左右。在 0.135 MPa 下滅菌2.5 h，冷卻后接種，于（31±1） ℃培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)。

1.2.34種菌種配方栽培效果試驗(yàn)按“棉籽殼64%、木屑20%、麩皮12%、石灰2%、石膏2%、含水量60%～65%、pH值7.5左右”配方配制栽培袋，按常規(guī)方法拌料、裝袋，裝入14.00 cm×28.00 cm×0.05 cm的聚丙烯塑料袋中，裝干料0.33 kg/袋左右，在0.135 MPa下滅菌3 h，滅菌冷卻后接入各配方咖啡殼菌種，（31±1） ℃避光培養(yǎng)，觀察比較各菌種菌絲生長(zhǎng)情況以及不同菌種培養(yǎng)基在相同培養(yǎng)料中出菇產(chǎn)量。

1.2.4觀測(cè)項(xiàng)目及方法每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取無(wú)污染的3袋觀察并記錄各培養(yǎng)基配方虎奶菇菌絲的生長(zhǎng)情況，測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度[菌絲日均生長(zhǎng)速率（mm/d）=菌絲生長(zhǎng)量（mm）/培養(yǎng)時(shí)間（d）]及菌絲生長(zhǎng)勢(shì)（分別將不同處理的菌絲生長(zhǎng)情況相互比較，用“+”號(hào)表示菌絲密度）、每袋產(chǎn)量、每個(gè)重復(fù)的平均產(chǎn)量及其平均轉(zhuǎn)化率。采用新復(fù)極差法檢查各配方之間是否存在顯著差異，以此說(shuō)明試驗(yàn)的可靠性。

2結(jié)果與分析

2.1虎奶菇菌絲在不同培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況

設(shè)計(jì)的3種培養(yǎng)基配方中均含有相同含量的麩皮作為主要的氮源原料提供者。除配方Ⅰ主要由單一咖啡殼作為碳源原料的提供者以外，配方Ⅱ、Ⅲ主要有咖啡殼混合刨花或棉籽殼作為碳源原料的提供者，3種配方中的咖啡殼含量分別為80%、50%、50%?？Х葰じ缓w維素、木質(zhì)素以及其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中含有粗纖維21.49%、蛋白質(zhì)2.44%、總糖1.19%、維生素0.2 mg/g、灰分0.54%[3]。所以，采用咖啡殼作為主要培養(yǎng)基也能為虎奶菇菌絲生長(zhǎng)提供一定的碳氮源。3種培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)情況見(jiàn)表2。由表2可知，虎奶菇菌絲在3種培養(yǎng)基內(nèi)均可生長(zhǎng)，但在萌發(fā)定植時(shí)間、菌絲生長(zhǎng)勢(shì)、污染率、物理狀態(tài)和老化情況方面存在差異。3種培養(yǎng)基配方的萌發(fā)定植時(shí)間與對(duì)照差異不明顯；污染程度從高到低依次為CK>配方Ⅰ=配方Ⅲ>配方Ⅱ，由單一棉籽殼作為主要碳源原料提供者的對(duì)照明顯高于單一咖啡殼及咖啡殼與刨花或棉籽殼混合原料配方；從物理狀態(tài)、老化情況和菌絲長(zhǎng)勢(shì)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，效果從好到差依次為CK>配方Ⅱ=配方Ⅲ>配方Ⅰ，這至少說(shuō)明單一咖啡殼作為主要的碳源提供者效果不是很理想，須要和其他原料混合搭配才能更好地為虎奶菌菌絲的生長(zhǎng)發(fā)育提供碳源的供給。表2不同培養(yǎng)配方虎奶菇菌絲生長(zhǎng)情況endprint

配方編號(hào)萌發(fā)定植時(shí)間

（d）污染率

（%）物理狀態(tài)老化情況生長(zhǎng)勢(shì)密度色澤、長(zhǎng)勢(shì)Ⅰ3.512.5較松，彈性較差退菌明顯，老化明顯+淺白色、生長(zhǎng)較弱Ⅱ3.50較緊實(shí)，有彈性均勻一致，無(wú)老化現(xiàn)象+++白、粗壯、較旺Ⅲ3.012.5較緊實(shí)，有彈性均勻一致，無(wú)老化現(xiàn)象+++白、粗壯、較旺CK3.020.0緊實(shí)，有彈性均勻一致，無(wú)老化現(xiàn)象++++潔白、粗壯、旺盛注：“+”表示菌絲濃密程度，“+”越多，表示菌絲越濃密。表4同。

2.2不同培養(yǎng)基配方對(duì)虎奶菇菌絲生長(zhǎng)速度的影響

由表3可知，在設(shè)計(jì)的3種培養(yǎng)基中，虎奶菇菌絲在配方Ⅱ中生長(zhǎng)最快，生長(zhǎng)速度為3.08 mm/d，在配方Ⅲ中生長(zhǎng)最慢，生長(zhǎng)速度為3.02 mm/d。菌絲宏觀生長(zhǎng)速度從快到慢依次為CK>配方Ⅱ>配方Ⅰ>配方Ⅲ。由表2可知，與對(duì)照相比，配方Ⅱ、配方Ⅲ中虎奶菇菌絲的密度、色澤、長(zhǎng)勢(shì)基本上一致，與對(duì)照差異不明顯，但配方Ⅰ的虎奶菇生長(zhǎng)勢(shì)與對(duì)照、配方Ⅱ、配方Ⅲ差異較大。對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果（表3）表明，配方Ⅱ與對(duì)照、配方Ⅰ、配方Ⅲ差異均不顯著，但對(duì)照與配方Ⅰ、配方Ⅲ差異均顯著（P<0.05）。

2.3虎奶菇菌絲不同配方菌種生長(zhǎng)情況

由表4可知，虎奶菇菌絲在3種配方培養(yǎng)基中均可生長(zhǎng)，但在萌發(fā)定植時(shí)間、菌絲生長(zhǎng)勢(shì)、污染率、滿袋時(shí)間以及老化情況方面存在差異。

2.4不同配方菌種對(duì)虎奶菇菌絲生長(zhǎng)速度的影響

由表5可知，菌種在配方Ⅱ中生長(zhǎng)較快，生長(zhǎng)速度為 4.57 mm/d，在配方 Ⅰ 中生長(zhǎng)最慢，生長(zhǎng)速度為3.94 mm/d。各菌種在培養(yǎng)料中菌絲宏觀生長(zhǎng)速度從快到慢依次為CK>配方Ⅱ>配方Ⅲ>配方Ⅰ。由表4可知，配方Ⅱ菌種與配方Ⅲ的菌絲密度、色澤、長(zhǎng)勢(shì)基本上一致，與對(duì)照無(wú)明顯差異，但配方Ⅰ菌種的菌絲生長(zhǎng)勢(shì)與對(duì)照及配方Ⅱ、Ⅲ差異較大，與不同配方培養(yǎng)基中虎奶菇菌絲生長(zhǎng)勢(shì)基本一致。對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果（表5）表明，配方Ⅱ與對(duì)照差異顯著（P>005），與配方Ⅰ菌種差異極顯著（P>0.01），但與配方Ⅲ菌種差異不顯著（P>0.01）；配方Ⅲ、配方Ⅰ與對(duì)照差異極顯著（P>0.01），且兩者之間也差異極顯著（P>0.01）。

2.5不同配方菌種培養(yǎng)基對(duì)虎奶菇產(chǎn)量的影響

由表6可知，3種培養(yǎng)基中菌種的平均產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率均低于對(duì)照，其中配方Ⅰ的平均產(chǎn)量最低，為 144.3 g/袋，對(duì)應(yīng)的生物學(xué)轉(zhuǎn)化率也最低，為43%；配方Ⅲ的平均產(chǎn)量最高，為224.0 g/袋，對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)化率也最高，為67%。方差分析結(jié)果（表6）表明，配方Ⅰ、配方Ⅱ、配方Ⅲ的虎奶菇產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率均與對(duì)照差異極顯著，配方Ⅱ、配方Ⅲ的虎奶菇產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率均與配方Ⅰ差異極顯著，但配方Ⅱ和配方Ⅲ之間的虎奶菇產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率差異不顯著。

3結(jié)論與討論

本試驗(yàn)以生產(chǎn)上采用的棉籽殼麩皮培養(yǎng)基為對(duì)照，精心設(shè)計(jì)3種配方培養(yǎng)基，綜合虎奶菇在含咖啡殼原料的各配方培養(yǎng)基和各配方菌種在栽培料上的菌絲生長(zhǎng)情況、菌絲生長(zhǎng)速度以及各配方培養(yǎng)基對(duì)虎奶菇產(chǎn)量的表現(xiàn)等因素，結(jié)合與對(duì)照的方差分析結(jié)果初步篩選出配方Ⅱ（咖啡殼50%、刨花30%、麩皮18%、石膏1%、石灰1%）培養(yǎng)基為本試驗(yàn)條件下的最優(yōu)培養(yǎng)基。方差分析結(jié)果表明，雖然配方Ⅱ產(chǎn)量極顯著低于對(duì)照，但考慮到棉籽殼和咖啡殼成本相差數(shù)倍（目前，云南棉籽殼的平均價(jià)格為2600元/t，咖啡殼的平均價(jià)格為 150元/t，換算到配方中棉籽殼麩皮對(duì)照培養(yǎng)基的平均成本比配方Ⅱ培養(yǎng)基高0.653元/袋，而對(duì)照培養(yǎng)基的平均收益比配方Ⅱ培養(yǎng)基高0.612元/袋，可見(jiàn)對(duì)照培養(yǎng)基的投入產(chǎn)出比高于配方Ⅱ），且配方Ⅱ感染率比對(duì)照低20～25百分點(diǎn)，二者在萌發(fā)時(shí)間、菌絲密度、色澤長(zhǎng)勢(shì)、抗老化、滿袋時(shí)間等方面差異不顯著。因此，在食用菌生產(chǎn)中使用的常規(guī)原料價(jià)格上漲的局面下，選擇云南熱區(qū)特色咖啡產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)的副產(chǎn)品咖啡殼作為食用菌栽培的一部分原料的配方，可降低生產(chǎn)成本。

試驗(yàn)結(jié)果還表明，在配方Ⅱ培養(yǎng)基所展現(xiàn)的優(yōu)勢(shì)和良好特性方面，配方Ⅰ培養(yǎng)基與對(duì)照差異均極顯著，這至少說(shuō)明單一咖啡殼作為主要的碳源提供者效果不是很理想，須要和其他原料混合搭配才能更好地為虎奶菌菌絲的生長(zhǎng)發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。同時(shí)，本試驗(yàn)在添加相同比例氮源（麩皮）的情況下，只進(jìn)行了單一咖啡殼、咖啡殼與刨花、咖啡殼與棉籽殼的3種配方培養(yǎng)基與棉籽殼麩皮培養(yǎng)基的對(duì)比研究，純咖啡殼、多種不同比例混合配方以及同時(shí)含有一定比例咖啡殼、刨花、棉籽殼3種物質(zhì)的配方是否可行、培養(yǎng)基配方是否更好，尚待進(jìn)一步試驗(yàn)。

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