范廣璞+楊猛

摘要：為了給復(fù)方中草藥肉雞飼料添加劑的研制奠定藥效學(xué)基礎(chǔ)，依據(jù)單味中草藥對肉雞規(guī)?；B(yǎng)殖常見病原菌的抑菌和飼喂效果，結(jié)合中醫(yī)藥理論，配制出3劑中草藥復(fù)方制劑，研究了3劑中草藥復(fù)方制劑的免疫學(xué)試驗(yàn)，結(jié)果顯示配制的3劑中草藥復(fù)方制劑都能夠明顯提高肉雞機(jī)體的免疫機(jī)能。免疫學(xué)綜合試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方制劑Ⅲ效果最佳，最終確定中草藥復(fù)方Ⅲ進(jìn)行飼喂試驗(yàn)。

關(guān)鍵詞：中草藥；飼料添加劑；藥效學(xué)

中圖分類號(hào)： S816.75文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2015）02-0198-03

收稿日期：2014-04-17

基金項(xiàng)目：江蘇省高?？蒲谐晒a(chǎn)業(yè)化推進(jìn)項(xiàng)目（編號(hào)：JHZD08-47）。

作者簡介：范廣璞（1968—），江蘇淮安人，副教授，主要研究方向?yàn)樗幬镂⑸锛夹g(shù)。E-mail：spxyym80@163.com。

隨著肉雞飼養(yǎng)方式從散養(yǎng)型向規(guī)?；D(zhuǎn)變，養(yǎng)殖密度增加1倍，發(fā)病率會(huì)增加4倍以上。為保障肉雞的存活率，飼料添加劑的使用量逐漸增加，在為肉雞養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展作出巨大貢獻(xiàn)的同時(shí)，也衍生了不少問題。飼料添加劑含有抗生素類藥物，可以提高肉雞的存活率和產(chǎn)量，但雞肉中藥物殘留的提高，直接危害了人類健康[1-3]。隨著生活水平的提高，人們健康保健意識(shí)顯著增強(qiáng)，消費(fèi)者對雞肉的品質(zhì)和安全性等方面的要求顯著提高，低脂藥殘少的雞肉成為消費(fèi)者的首選。

開發(fā)一種既能提高肉雞存活率和產(chǎn)量，又能改善雞肉品質(zhì)的飼料添加劑迫在眉睫，中草藥無毒副作用、無抗藥性、無污染、無殘留，多為常見藥物，價(jià)格低廉，優(yōu)于抗生素，因而成為人們研究開發(fā)的首選對象[4-8]。本研究在單味中草藥對肉雞養(yǎng)殖常見菌抑菌和飼喂研究的基礎(chǔ)上，依據(jù)中藥配伍的原理，配制3劑中草藥復(fù)方制劑，并對其進(jìn)行免疫學(xué)試驗(yàn)，篩選出藥效最好的中草藥復(fù)方制劑，進(jìn)行飼喂試驗(yàn)，旨在為研制應(yīng)用于肉雞養(yǎng)殖業(yè)的復(fù)方中草藥肉雞飼料添加劑奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)中草藥復(fù)方

根據(jù)單味中草藥的抑菌效果和病原菌種類，結(jié)合中醫(yī)藥理論，配制出3劑中草藥復(fù)方制劑，分別為制劑Ⅰ、制劑Ⅱ、制劑Ⅲ[9]。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小白鼠、家兔、雞。

1.3試劑與儀器

牛津杯、瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基、無菌營養(yǎng)肉湯、抗雞紅細(xì)胞抗體、蒸餾水、無菌生理鹽水、小牛血清淋巴細(xì)胞分層液、0.8%戊二醛溶液、蘇木精和伊紅染色液、培養(yǎng)皿 TDL-40B 低速臺(tái)式水平離心機(jī)、低溫冰箱、電熱恒溫水浴箱、OLYMPUS顯微鏡等。

1.4方法

1.4.1抗雞紅細(xì)胞抗體的制備選擇體重量2～3 kg的健康雄性家兔，用Hanks液洗過的壓積雞紅細(xì)胞進(jìn)行免疫。每日背部皮下注射50%雞壓積紅細(xì)胞1次，連續(xù)5次，注射量分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL；7 d后耳靜脈注射50%的壓積雞紅細(xì)胞懸液1 mL，連續(xù)3 d，用96孔反應(yīng)板測定抗體效價(jià)，當(dāng)抗體效價(jià)開始下降時(shí)，耳靜脈注射50%的壓積紅細(xì)胞懸液2 mL加強(qiáng)免疫1次，3 d后開始測定抗體效價(jià)，當(dāng)效價(jià)達(dá)1 ∶4 096時(shí)捕殺，采血、分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆肹10]。

1.4.2中草藥飼料添加劑飼喂試驗(yàn)試驗(yàn)組小白鼠飼喂含1%中草藥飼料添加劑的飼料，對照組小白鼠飼喂正常的飼料，連續(xù)飼喂7 d，分別對試驗(yàn)組和對照組小白鼠Ea花環(huán)形成率、EAC花環(huán)形成率、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)形成率和IC花環(huán)形成率等免疫指標(biāo)進(jìn)行測定[10]。

1.4.3測定方法Ea花環(huán)形成率的測定：按林清華的方法[11]；EAC花環(huán)形成率的測定、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的測定、中性粒細(xì)胞功能的測定，按何昭陽等的方法[12]；紅細(xì)胞免疫功能的測定：按朱立平等的方法[13]測定紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)形成率和紅細(xì)胞IC花環(huán)形成率。

1.5統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)值以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，并采用SPSS 17.0進(jìn)行單因素方差分析。

2結(jié)果與分析

2.1中草藥飼料添加劑對小白鼠Ea花環(huán)率的影響

2.2中草藥飼料添加劑對小白鼠EAC花環(huán)形成率的影響

從表2可以看出，飼喂后10 d，制劑Ⅰ、制劑Ⅱ試驗(yàn)組小白鼠EAC玫瑰花環(huán)形成率與對照差異顯著，制劑Ⅲ試驗(yàn)組與對照比較差異極顯著，制劑Ⅲ試驗(yàn)組與制劑Ⅰ、制劑Ⅱ組比較差異顯著；20 d時(shí)，制劑Ⅰ、制劑Ⅱ和制劑Ⅲ試驗(yàn)組小白鼠EAC玫瑰花環(huán)形成率與對照差異顯著，各制劑試驗(yàn)組間差異不顯著。30 d時(shí)，各處理間差異不顯著。表2中藥飼料添加劑對小白鼠EAC玫瑰花環(huán)形成率的影響

處理EAC玫瑰花環(huán)率（%）10 d20 d30 d對照 12.050±1.682aA12.450±1.763bA 12.320±1.780a 制劑Ⅰ15.050±1.528bAB 14.785±1.248aA 13.617±1.491a 制劑Ⅱ15.796±1.426aAB14.869±1.236aA13.627±1.483a制劑Ⅲ18.326±2.236cB15.896±2.432aA13.323±1.681a

2.3淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率測定

從表3可以看出，飼喂10 d，制劑Ⅰ、制劑Ⅱ試驗(yàn)組小白鼠的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率與對照差異顯著，制劑Ⅲ試驗(yàn)組與對照差異極顯著，與制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組差異顯著；20 d時(shí)，制劑Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與對照差異顯著。30 d時(shí)，各處理間差異不顯著。表3中草藥飼料添加劑對小白鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響

處理淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率（%）10 d20 d30 d對照 52.520±3.543aA52.785±3.203bA57.785±2.858a制劑Ⅰ56.735±3.595bAB55.520±3.355aA53.570±3.508a制劑Ⅱ56.265±3.240bAB55.785±2.548aA53.858±2.580a制劑Ⅲ60.582±3.430cB56.510±2.436aA53.695±2.230aendprint

2.4中性粒細(xì)胞功能測定

由表4可知，飼喂10 d，制劑Ⅰ、Ⅱ試驗(yàn)組小白鼠中性白細(xì)胞吞噬活性與對照差異顯著，制劑Ⅲ組與對照差異極顯著，與制劑Ⅰ、Ⅱ組差異顯著；20 d時(shí)，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組和制劑Ⅲ組小白鼠中性白細(xì)胞吞噬活性與對照差異顯著。30 d時(shí)，各處理間差異不顯著。

2.5紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率的測定

從表5可以看出，飼喂10 d，制劑Ⅰ試驗(yàn)組、制劑Ⅱ試驗(yàn)組小白鼠C3b受體花環(huán)形成率與對照差異顯著，制劑Ⅲ組與對照差異極顯著，與制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組比較差異顯著；20 d 時(shí)，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組和制劑Ⅲ組小白鼠C3b受體花環(huán)形成率與對照差異顯著。30 d時(shí)，各處理間差異不顯著。表5中藥復(fù)方對小白鼠紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)形成率

處理C3b花環(huán)形成率（%）10 d20 d30 d對照 8.735±1.798aA8.653±1.899bA8.893±1.471a制劑Ⅰ11.653±2.423bAB 11.520±2.630aA8.328±1.680a制劑Ⅱ11.381±1.932bAB11.450±1.652aA8.130±1.864a 制劑Ⅲ14.910±1.796cB 11.553±1.657aA9.800±1.675a

2.6紅細(xì)胞IC花環(huán)率的測定

從表6可以看出，飼喂10 d時(shí)，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組和制劑Ⅲ組小白鼠IC花環(huán)形成率與對照差異顯著，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組與制劑Ⅲ組差異顯著；20 d時(shí)，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組和制劑Ⅲ組小白鼠IC花環(huán)形成率與對照差異顯著。30 d時(shí)，各處理間差異不顯著。

3結(jié)論

通過Ea花環(huán)形成率、EAC花環(huán)形成率、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)形成率和IC花環(huán)形成率等免疫指標(biāo)分析，結(jié)果表明，由金銀花等中草藥制成的小白鼠中草藥飼料添加劑能夠明顯促進(jìn)小白鼠機(jī)體的免疫機(jī)能，復(fù)方制劑Ⅲ效果最佳。

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