汪先桃，劉　靜，曾照芳（.四川省成都市龍泉驛區(qū)第一人民醫(yī)院，四川　成都　6000；.重慶醫(yī)科大學，重慶　40006）

HOST2和HOTAIR在上皮性卵巢癌中聯(lián)合檢測的意義

汪先桃1，劉靜1，曾照芳2
（1.四川省成都市龍泉驛區(qū)第一人民醫(yī)院，四川成都610100；2.重慶醫(yī)科大學，重慶400016）

［摘要］目的：探討HOST2和HOTAIR 在上皮性卵巢癌組織中聯(lián)合檢測的意義。方法：應用熒光定量PCR檢測21例上皮性卵巢癌和21例上皮性正常卵巢組織的表達情況。結果：HOST2在上皮性卵巢癌組和正常卵巢組陽性率分別為90.4%、5.6%，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。HOTAIR在上皮性卵巢癌組和正常卵巢組陽性率分別為85.7%、14.2%，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。HOST2聯(lián)合HOTAIR檢測上皮性卵巢癌的陽性率為95.2%，在正常卵巢組織組中沒有發(fā)現(xiàn)兩者同時陽性。結論：HOST2和HOTAIR均在上皮性卵巢癌中表達升高，可成為提高上皮性卵巢癌診斷率的分子腫瘤標志物。HOST2和HOTAIR聯(lián)合檢測可以提高檢測的靈敏度和特異性。

［關鍵詞］HOST2；HOTAIR；卵巢癌；RT-PCR

［Abstract］Objective：To investigate the significance of combined detection of HOTAIR and HOST2 in epithelial ovarian cancer tissues. Method：The expression was detected in 21 cases of epithelial ovarian cancer and 21 cases of normal ovarian tissues by fluorescence quantitative PCR. Result：The expression rate of HOST2 in epithelial ovarian cancer group and normal ovarian cancer group was 90.4% and 5.6% respectively and the difference was statistically significant （P＜0.05）.The expression rate of HOTAIR in epithelial ovarian cancer and normal ovary was 85.7% and 14.2% respectively and the difference was statistically significant （P＜0.05）.The expression rate of HOST2 combined with HOTAIR in the detection of epithelial ovarian cancer was 95.2%.There was no expression in normal ovarian tissue. Conclusion：The high expression of HOST2 and HOTAIR is in epithelial ovarian cancer，which could improve the epithelial ovarian cancer molecular diagnosis of tumor markers. The Combined detection of HOST2 and HOTAIR could improve the sensitivity and specificity of detection.

［Key Words］HOST2；HOTAIR；ovarian cancer；RT-PCR

卵巢癌是婦科常見腫瘤之一，死亡率居婦科惡性腫瘤首位。開發(fā)對卵巢癌的新型診斷方法非常重要［1-4］。上皮性卵巢癌特異轉錄子2（ovarian cancer-specific transcripts 2，HOST2）lncRNA是一種在上皮性卵巢癌中發(fā)現(xiàn)的高表達的lncRNA［5］。HOTAIR是來源于HOXC基因座的lncRNA，存在于HOXC11和HOXC12之間，在各種組織中調節(jié)HOXD的表達，在組蛋白修飾和基因正確表達方面有調節(jié)作用的lncRNA［6］。我們對上皮性卵巢癌和正常卵巢組織標本進行HOST2 lncRNA和HOTAIR lncRNA基因聯(lián)合檢測，分析其表達情況，研究兩者在上皮性卵巢癌中的診斷價值，現(xiàn)報道如下。

1　臨床資料

均為2012年1月至2013年4月成都市龍泉驛區(qū)第一人民醫(yī)院收治的上皮性卵巢癌21例和正常卵巢組織21例，術前均未接受放化療。術中切取卵巢部分組織立即置于液氮中，用于提取RNA。部分組織經(jīng)HE染色后用于病理診斷?；颊呔押炇鹬橥鈺?。所有涉及人體標本的研究均事先獲得成都市龍泉驛區(qū)第一人民醫(yī)院倫理委員會的批準。

2　主要試劑和儀器

總RNA抽提試劑盒、逆轉錄試劑盒、PCR擴增試劑SYBR GreenⅡ（大連TaKaRa公司）；磷酸鹽緩沖液（PBS）為本院自配。熒光定量PCR擴增儀（gene cycle TM Bio-Rad，美國）。

3　實驗方法

RNA提取和cDNA合成先用Trizol試劑從組織中提取總RNA。提取總RNA后，經(jīng)真空干燥，溶解于DEPC水中。測定A260nm/A280nm比值及RNA濃度后，立即進行cDNA合成。cDNA合成，根據(jù)RNA的濃度，分別取一定量的RNA模板樣品，依次加入逆轉錄試劑，總反應體積60μL，具體操作按逆轉錄試劑盒說明書進行。

引物設計：根據(jù)HOST2和HOTAIR全長基因序列，利用Primer Premier5.0設計HOST2和HOTAIR特異性的引物和內參引物（見表1）。引物是由上海英?。↖nvitrogen）公司合成。

表1　HOST2基因、HOTAIR和β-actin基因的引物序列

PCR擴增。擴增體系：目的基因與內參基因反應體系為25μL。擴增條件：預變性95℃，5min；變性95℃，30s；延伸52℃，30s；退火72℃，1min，30個循環(huán)；72℃復性5min。進行cDNA PCR擴增。目的基因和內參基因的擴增在同時完成，檢測樣本的同時制備目的基因和內參基因的雙標準曲線，判斷二者的擴增效率是否一致并對樣本進行定量，同時實驗設陰陽性和空白對照。F值計算公式：F=目的基因拷貝數(shù)/內參基因拷貝數(shù)。

統(tǒng)計學方法：所有數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件進行處理，組間比較采用t檢驗分析，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義?？紤]實驗影響因素，當F≥0.20時判斷該標本為有表達，實驗均重復3次。

4　結　果

HOST2和HOTAIR在卵巢組織中表達比較。PCR結果顯示兩個基因在上皮性卵巢癌組織中均有一定程度表達，兩者比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；HOTAIR基因在正常卵巢組織中表達弱，F(xiàn)值（0.13±0.07），HOST2基因在正常卵巢組織中表達極弱。HOST2和HOTAIR在上皮性卵巢癌組織中表達明顯高于其在正常卵巢組織中表達，差異有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），見圖1。

圖1　組織中HOST2和HOTAIR表達情況

兩組卵巢組織中 HOST2和HOTAIR陽性率比較。HOST2在上皮性卵巢癌組和正常卵巢組分別為90.4%，5.6%；HOTAIR陽性率在上皮性卵巢癌組和正常卵巢組分別為85.7%，14.2%；HOST2聯(lián)合HOTAIR檢測上皮性卵巢癌的陽性率為95.2%，見表2。在上皮性卵巢癌組中，兩個基因同時陰性率為4.8%（1/21），在正常卵巢組中沒有發(fā)現(xiàn)兩者同時陽性，見表3。兩者同時檢測有利于提高靈敏度和特異性。

表2　各組HOST2基因和HOTAIR基因聯(lián)合檢測結果

表3　各組HOST2和HOTAIR聯(lián)合檢測結果

5　討　論

近年來，隨著lncRNA的研究深入，表明lncRNA參與了轉錄激活、染色質修飾、核內運輸、轉錄干擾等多種重要的調控過程［7］。提示lncRNA與人類疾病關聯(lián)。HOST2和HOTAIR是在卵巢癌中發(fā)現(xiàn)的lncRNA。HOTAIR lncRNA可以連接導致腫瘤轉移的染色質［8］，HOTAIR在卵巢癌中的表達高于正常卵巢組織的表達［9］，但HOTAIR在其它癌組織中也有表達，如在肝細胞癌組織中的表達比鄰近非癌灶組織中的表達高［10］。HOST2是在卵巢癌組織和卵巢癌細胞株中特異表達的lncRNA［2］。兩基因聯(lián)合檢測卵巢癌具有一定的優(yōu)勢。

HOST2和HOTAIR都具有對上皮性卵巢癌的診斷價值，兩者聯(lián)合檢測有利于提高上皮性卵巢癌診斷的特異性和靈敏性，同時檢測能提高高危人群的檢出率，對個體危險度有較準確的評估。

［參考文獻］

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證治集粹

［收稿日期］2015-05-15

［中圖分類號］R273.731

［文獻標識碼］B

［文章編號］1004-2814（2015）10-0961-02