李澤宇

（新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆 昌吉831100）

豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。目前，該病主要在亞洲、非洲、南美洲和歐洲等44 個國家流行。豬瘟在我國曾廣泛流行，20 世紀(jì)50 年代使用豬瘟兔化弱毒苗后得到一定控制。但近20年來，非典型性豬瘟發(fā)病增多，仔豬發(fā)病也趨多見，對我國養(yǎng)豬業(yè)的危害非常大。近年來昌吉養(yǎng)豬業(yè)得到了飛速發(fā)展，2013年全年出欄生豬242.5萬頭，而對于豬瘟的防治，多用疫苗免疫，但是由于養(yǎng)殖水平參差不齊、免疫程序不規(guī)范，該病在新疆時有發(fā)生。為了掌握昌吉地區(qū)規(guī)?；i場豬瘟免疫抗體水平的高低及消長規(guī)律，同時為養(yǎng)殖戶提供一個科學(xué)合理的免疫程序，本試驗選擇昌吉地區(qū)5個規(guī)?；i場進(jìn)行檢測。

1 材料與方法

武漢科前動物生物制品公司生產(chǎn)的豬瘟病毒ELISA 抗體檢測試劑盒、實驗室提供自動酶標(biāo)儀（美國BioTek儀器有限公司），微量移液器（eppendorf公司），恒溫培養(yǎng)箱（北京市光明醫(yī)療儀器廠），無菌操作臺，振蕩器，滅菌高壓鍋，高速離心機(jī)等實驗所需儀器設(shè)備。

2 實驗樣品

2.1 血清樣品的準(zhǔn)備

血清：由新疆昌吉地區(qū)A、B、C、D、E5個規(guī)?；i場（種母豬﹥300頭）共采集血清數(shù)共1350份，采集公豬血清共50份、后備母豬共200份、哺乳母豬共100份、妊娠母豬100份、7日齡仔豬150份、14日齡仔豬150份、21日齡仔豬150份、30日齡仔豬30150份、40日齡仔豬150份、55日齡仔豬150份。

2.2 樣品采集時間、方法及樣品儲存

血清共分4次均等采集，分別為2012年7月、2012年10月、2013年1月、2013年4月；主要采集方法為前腔靜脈采血法（對與成年豬只個別采取耳緣靜脈采血），血液采集后用高速離心機(jī)提取血清即樣品，置于－20℃冰箱儲存?zhèn)溆谩?/p>

3 試驗方法與判定

3.1 血清稀釋

3.1.1 樣品 按照1∶40的體積在血清稀釋板進(jìn)行稀釋。

3.1.2 對照 按照1∶40的體積分別將陽性對照和陰性對照稀釋，對樣品和對照，稀釋相同的倍數(shù)。

3.2 試驗方法步驟

3.2.1 加樣 取抗原包被板，將稀釋好的樣品血清和對照血清分別按照100μL 對應(yīng)從稀釋板轉(zhuǎn)入抗原包被板中，待檢樣品每份加一個孔，對照樣品每份加2個孔，在振蕩器上微微振勻孔中的樣品，然后置37 ℃溫育30min。

3.2.2 洗滌 洗板甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μL，靜置3 min倒掉，再在吸水紙上拍干，共計洗滌5次。

3.2.3 加酶 每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100μL，置37 ℃再溫育30min。

3.2.4 洗滌 同2。

3.2.5 顯色 每個孔分別加入底物A 和B（50 μL）混勻，室溫避光顯色10min。

3.2.6 檢測 終止反應(yīng)加終止液50μL 利用酶標(biāo)儀檢測。

3.3 結(jié)果判定

在酶標(biāo)儀上測各孔的OD630nm值。試驗成功的條件是陽性對照孔的平均OD630nm值均≥0.8，陰性對照孔的平均OD－630nm值均＜0.3。

樣品OD630nm值≥0.35，為陽性；樣品OD630nm值＜0.35，為陰性。

表1 CSF血清抗體ELISA 檢測與HIA 的轉(zhuǎn)換

4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

用EXCEL 軟件進(jìn)行原始數(shù)據(jù)處理，用SPSS11.5對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗。

5 結(jié)果與分析

5.1 各豬場CSF血清抗體水平分析

從表格可以看出（表2）：通過對昌吉地區(qū)5 個規(guī)模化豬場共1350份血清的檢測，結(jié)果陽性總數(shù)為1 081，陽性率為80.07%，平均OD 值為1.121，標(biāo)準(zhǔn)差為0.856，其中A、B、C、D、E5個規(guī)?；i場陽性率分別為92.2%、82.59%、74.44%、88.51%、62.59%、80.07%，各個規(guī)模化豬場之間陽性率差異均為極顯著（P＜0.01），其中A 場和D 場差異不顯著（P＞0.05），B 場和D 場差異不顯著（P＞0.05），其他之間差異均為顯著（P＜0.05）。

表2 昌吉地區(qū)5個規(guī)模化豬場各場CSF血清抗體水平及陽性率匯總表

通過統(tǒng)計可知，A、B、C、D、E 各場的OD 值分別1.215、0.901、1.115、1.254、0.904、總體OD 值為1.121，其中A 場和D 場差異不顯著（P＞0.05），B場和D 場差異不顯著（P＞0.05），其他之間差異均為顯著（P＜0.05）。

圖2 昌吉地區(qū)5個規(guī)?；i場各場CSF血清抗體平均OD 值

5.2 各豬場CSF不同血清抗體效價水平分析

從表格（表3）可以看出：抗體效價＜5log2血清數(shù)共269 份，占總血清數(shù)的19.93%，抗體效價為5log2血清數(shù)共97份，占總血清數(shù)的7.2%，抗體效價為6log2血清數(shù)共169份，占總血清數(shù)的12.5%，抗體效價為7log2 血清共289 份，占總血清數(shù)的21.4%，抗體效價≥8log2血清數(shù)共526份，占總血清數(shù)的38.97%。

表3 不同抗體效價的樣本數(shù)及所占比率統(tǒng)計表

圖3 不同抗體效價的樣本數(shù)及所占比率統(tǒng)計表

5.3 不同階段豬群CSF血清抗體水平分析

從表格（表4）可以看出：公豬、后備母豬、哺乳母豬、妊娠母豬、7日齡仔豬、14日齡仔豬、21日齡仔豬、30日齡仔豬、40日齡仔豬、55日齡仔豬抗體陽性率分別為92%、69%、86%、93%、72%、82%、88.67%、80.67%、72.66、82.67%，通過統(tǒng)計可知各階段的豬群抗體陽性率差異很大，陽性率最高為妊娠母豬和公豬，抗體陽性率最低為后備母豬和40日齡仔豬。從仔豬陽性率結(jié)果可以看出，仔豬在7日齡豬瘟抗體陽性率最低為72%，從7 日齡到21 日齡在逐漸升高，21日齡抗體陽性率最高為88.67%，30日齡抗體陽性率降到最低為72.66%。

表4 昌吉地區(qū)5個規(guī)?；i場不同階段豬群CSF血清抗體水平及陽性率匯總表

圖4 昌吉地區(qū)5個規(guī)模化豬場不同階段豬群血清抗體陽性率

圖5 昌吉地區(qū)5個規(guī)?；i場不同階段豬群血清抗體平均OD 值

6 討論

6.1 各豬場總體檢測結(jié)果分析

從結(jié)果分析可知，昌吉地區(qū)5個規(guī)?；i場共1350份血清，陽性總數(shù)為1081，該地區(qū)的總體陽性率為80.07%，平均OD 值為1.121。與國家規(guī)定的70%水平對比相對較高，血清的整體效價較好，本次結(jié)果與馬曉艷等2012年對新疆地區(qū)的豬瘟抗體合格率為75.3%結(jié)果相近，本次結(jié)果顯示豬瘟抗體陽性率比張繼紅等2009利用豬瘟正向間接血凝試驗對新疆地區(qū)12個地（州、市）采集的1749份血清樣品總體免疫合格率為71.3% 較高。劉建營等（2012）對廣東地區(qū)2012年豬瘟抗體水平進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示廣東地區(qū)豬瘟抗體陽性率為76.5%，程漢等（2012）對江蘇泰州地區(qū)的豬瘟抗體水平進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示陽性率為79.3%。但是部分豬場豬瘟抗體陽性率低于70%，這與豬場防疫管理有不可推卸的責(zé)任，應(yīng)加強(qiáng)豬瘟的免疫抗體水平監(jiān)測。

6.2 不同階段仔豬CSF血清抗體陽性率水平分析

圖6 不同階段仔豬的CSF血清抗體水平分析

從圖9可以看出：從仔豬陽性率結(jié)果可以看出，仔豬在7日齡豬瘟抗體陽性率最低為72%，從7日齡到21日齡在逐漸升高，21日齡抗體陽性率最高為88.67%，30 日齡抗體陽性率降到最低為72.66%。這與曹建等（2012）用HIA 法對仔豬母源抗體效價檢測的結(jié)果15～21日齡達(dá)到最高值，21日齡后逐步降低，于35日齡達(dá)到抗體保護(hù)臨界值基本相符。結(jié)合臨床可知，哺乳初期抗體陽性率有所上升，與母乳中充足的母源抗體有直接關(guān)系，但隨著日齡增大，仔豬抗體陽性率降低，斷奶后抗體陽性率急劇降低，因為母源抗體攝入不足引起。經(jīng)過第一次免疫，仔豬豬瘟抗體陽性率在35～50 日齡開始回升。因此在仔豬母源抗體攝入不足時及時進(jìn)行免疫接種非常必要。

7 小結(jié)

從試驗結(jié)果來看，昌吉地區(qū)豬瘟免疫后保護(hù)力目前比較穩(wěn)定，達(dá)到了國家規(guī)定要求的免疫保護(hù)率70%，但是有個別豬場免疫效果不理想，這與不健全的防疫制度有很大的關(guān)系。通過現(xiàn)場調(diào)查可知：昌吉地區(qū)豬瘟首免日齡多數(shù)在30d左右，二免日齡在60d左右。部分豬場進(jìn)行超前免疫，并于50日齡進(jìn)行二免。

結(jié)合對本次實驗結(jié)果的分析與國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)報道，對昌吉地區(qū)豬瘟免疫程序提出以下建議：

7.1 把好疫苗質(zhì)量關(guān)

7.1.1 做好疫苗運(yùn)輸保管工作，保證其生物學(xué)效價。運(yùn)輸途中用冰塊包裝以保證低溫，疫苗稀釋后在15 ℃以下6h 內(nèi)用完，在15～27 ℃應(yīng)于3h 內(nèi)用完，超時棄用并銷毀。

7.1.2 堅持免疫消毒，確保注射有效。針具消毒，一豬一針頭，避免交叉感染；針頭長度適中，方法得當(dāng)，以利于刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。

7.1.3 禁止使用過期、無標(biāo)簽、失效稀釋后不溶解及時間較長的疫苗，確保豬只使用合格的疫苗，以產(chǎn)生足夠的抗體、增強(qiáng)免疫力。

7.2 適時接種

7.2.1 后備公、母豬使用前進(jìn)行兩次豬瘟免疫接種，間隔一個月。

7.2.2 生產(chǎn)公、母豬每年春秋兩秋各普免一次。

7.2.3 經(jīng)產(chǎn)母豬每次斷奶前跟胎免疫一次。

7.2.4 仔豬23～25日齡進(jìn)行首免疫，60日齡時進(jìn)行第二次免疫，為提升免疫水平，可以進(jìn)行多次免疫。

7.3 定期進(jìn)行豬瘟免疫抗體監(jiān)測

定期進(jìn)行豬瘟免疫抗體監(jiān)測，可了解豬瘟疫苗的免疫效果及豬瘟抗體水平，以估測豬群合適的免疫時間，對制定免疫程序有重要意義。

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