楊 杰

（安徽省界首市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心,安徽界首 236500）

蛋雞場(chǎng)血清抗體與卵黃抗體的檢測(cè)比較實(shí)驗(yàn)

楊 杰

（安徽省界首市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心,安徽界首 236500）

隨著蛋雞場(chǎng)規(guī)模的逐步擴(kuò)大，萬(wàn)只以上的規(guī)模戶隨處可見(jiàn)，養(yǎng)殖理念逐步提升，對(duì)防疫環(huán)節(jié)重視程度提高，逐步追求精準(zhǔn)的防疫時(shí)機(jī)，在免疫之前，了解抗體水平十分重要。在生產(chǎn)實(shí)踐中，血清檢測(cè)抗體操作煩瑣，且給蛋雞生產(chǎn)帶來(lái)一定的影響。理論上講，雞蛋中卵黃抗體在雞排卵前與血清抗體是一致的，但卵黃排入輸卵管后，與母體不再有聯(lián)系，所以，卵黃抗體與排卵前血清中的抗體是一致的，也就是與雞蛋產(chǎn)出前一天血清抗體一致。對(duì)于產(chǎn)蛋雞來(lái)說(shuō)，使用卵黃測(cè)抗體的方法對(duì)雞不產(chǎn)生應(yīng)激，操作簡(jiǎn)單，節(jié)省人力。操作方法得當(dāng)，與血清抗體的誤差范圍大致相當(dāng)。在生產(chǎn)實(shí)踐中具有簡(jiǎn)單、易行的效果，可以大力推廣。但在使用卵黃測(cè)抗體的時(shí)候，細(xì)節(jié)上應(yīng)多加注意。界首市獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室針對(duì)血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清與卵黃抗體效價(jià)進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 樣品的采集

在界首市蛋雞養(yǎng)殖戶中任意選取存欄均在10 000只以上規(guī)模蛋雞場(chǎng)3個(gè)，隨機(jī)采集10份血樣，同時(shí)采集10枚相對(duì)應(yīng)的雞蛋，血樣帶回離心分離血清裝入離心管4℃冰箱備用。

2 實(shí)驗(yàn)材料

禽流感H5（RE-6）抗原 哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司 2ml批號(hào)：2014006 有效期 24個(gè)月

禽流感H5（RE-6）陽(yáng)性血清：哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，2 ml，批號(hào)：2014004。有效期 24個(gè)月。

禽流感H9抗原：哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，2 ml，批號(hào)：2013002，有效期 24個(gè)月。

禽流感H9陽(yáng)性血清：哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，2 ml，批號(hào)：2013002，有效期 24個(gè)月。

新城疫抗原：青島異邦生物工程有限公司，2 ml，批號(hào)：20150201。有效期 24個(gè)月。

新城疫陽(yáng)性血清：青島異邦生物工程有限公司，2 ml，批號(hào)：20150202。有效期 24個(gè)月。

3 試驗(yàn)方法

3.1 1%雞紅細(xì)胞懸浮液的制備

采集至少3只未免疫健康公雞的血液，用0.9%生理鹽水洗滌3～5次，每次均以1 000 r/min離心10 min，用吸管吸去上清液和紅細(xì)胞上層的白細(xì)胞層，將沉淀的紅細(xì)胞加0.9%生理鹽水洗滌反復(fù)洗滌3～5次，將最后一次離心后的紅細(xì)胞泥，用0.9%生理鹽水配成體積分?jǐn)?shù)為1%紅細(xì)胞懸液，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

3.2 血清抗體檢測(cè)

抗原效價(jià)與4個(gè)血凝單位抗原的配制：抗原不可反復(fù)凍融，因?yàn)榭乖磸?fù)凍融容易造成抗原效價(jià)降低，所以每次配制4倍抗原之前必須檢測(cè)抗原效價(jià)，根據(jù)效價(jià)才能準(zhǔn)確配制4倍抗原；4個(gè)血凝單位抗原要現(xiàn)用現(xiàn)配，混懸液要混勻，配好的抗原在室溫下放置不得超過(guò)4 h。

判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)注意：將反應(yīng)板傾斜，在觀察紅細(xì)胞有無(wú)呈淚珠狀流淌。完全血凝（不流淌）的抗原或病毒最高稀釋倍數(shù)代表一個(gè)血凝單位。

3.3 卵黃抗體檢測(cè)

對(duì)卵黃進(jìn)行3種濃度對(duì)比，卵黃原液直接抽取、卵黃與生理鹽水1：1稀釋、卵黃與生理鹽水1：4稀釋3個(gè)梯度分別進(jìn)行禽流感H5亞型、禽流感H9亞型、新城疫抗體效價(jià)測(cè)定。

3.4 結(jié)果

共對(duì)采集30個(gè)樣品進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果詳見(jiàn)表1～表4。

表1 血清抗體效價(jià)

表2 卵黃原液直接抽取抗體效價(jià)

表3 卵黃與生理鹽水1：1稀釋抗體效價(jià)

表4 卵黃與生理鹽水1：4稀釋抗體效價(jià)

從表1～表4可以得出以下結(jié)論：（1）血清禽流感H5（RE-6）抗體均值8.50，禽流感H9抗體均值8.37，新城疫抗體均值8.63；卵黃原液直接抽取禽流感H5（RE-6）抗體均值8.37，禽流感H9抗體均值8.37，新城疫抗體均值8.60；卵黃與生理鹽水1：1稀釋禽流感H5（RE-6）抗體均值8.36，禽流感H9抗體均值8.33，新城疫抗體均值8.6；卵黃與生理鹽水1：4稀釋禽流感H5（RE-6）抗體均值7.67，禽流感H9抗體均值7.50，新城疫抗體均值7.40。（2）卵黃原液直接抽取和卵黃與生理鹽水進(jìn)行1：1稀釋兩組檢測(cè)結(jié)果與血清檢測(cè)結(jié)果最為一致，但是卵黃原液直接抽取，在對(duì)樣品進(jìn)行稀釋時(shí)操作起來(lái)較為難以把握，稍有不留心稀釋容易造成不均勻，且在抽取卵黃原液時(shí)量的把握易出現(xiàn)量不足的問(wèn)題。故卵黃與生理鹽水1：1稀釋的濃度在現(xiàn)實(shí)工作中具有操作簡(jiǎn)單、易行的效果，經(jīng)濟(jì)適用，值得大力推廣。

4 體會(huì)

（1）試驗(yàn)環(huán)境溫度與反應(yīng)時(shí)間：實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度與實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)時(shí)間的長(zhǎng)短有密切的關(guān)系，一般在環(huán)境溫度應(yīng)盡量控制在20℃～25℃經(jīng)過(guò)20～30min即可讀出抗原效價(jià)和卵黃抗體滴度。當(dāng)溫度過(guò)低，如低于15℃時(shí)，出現(xiàn)結(jié)果就要慢，往往需要超過(guò)40min才能出現(xiàn)清晰的結(jié)果。因此，為了在較短的時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)結(jié)果，應(yīng)將試驗(yàn)中的環(huán)境溫度控制在20℃～25℃。

（2）病毒懸液和紅細(xì)胞懸液在使用前必須搖勻，如沒(méi)有搖勻，加入時(shí)濃度高低不一，會(huì)人為造成誤差。因此抗原和紅細(xì)胞使用前一定要搖勻，保證每一孔中加入的濃度準(zhǔn)確一致。

（3）卵黃的稀釋，應(yīng)反復(fù)多次稀釋，極盡均勻，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

總之，在實(shí)驗(yàn)室實(shí)際操作血凝與血凝抑制試驗(yàn)中受很多因素的影響，因此在實(shí)驗(yàn)操作中必須認(rèn)真細(xì)致做好每一個(gè)環(huán)節(jié)，綜合分析確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性，以便為蛋雞養(yǎng)殖戶（場(chǎng)）制定合理的免疫程序提供一份可靠的保障。