瞿偉，彭亞婷，周國(guó)鳳

(南昌市第三醫(yī)院，南昌330006)

乳腺葉狀腫瘤(PTs)是少見(jiàn)的纖維上皮來(lái)源的腫瘤，占乳腺腫瘤的0.3%～1%，有復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的潛能。根據(jù)間質(zhì)細(xì)胞異型性、間質(zhì)細(xì)胞密度、核分裂象、間質(zhì)過(guò)度生長(zhǎng)及腫瘤邊界幾個(gè)特征，PTs可分為良性、交界性及惡性。雖有報(bào)道p53、c-kit、EGFR、CD10等標(biāo)志物與以上病理學(xué)特征之間的關(guān)系，然而仍難以準(zhǔn)確區(qū)分纖維腺瘤與良性PTs，良性PTs與交界性PTs，交界性PTs與惡性PTs［1］。本研究通過(guò)免疫組化SP法檢測(cè)E-cadherin蛋白在PTs及纖維腺瘤上皮組織中的表達(dá)，檢測(cè)Ki-67在PTs間質(zhì)成分中的表達(dá)，從而探討E-cadherin的表達(dá)與PTs病理學(xué)特征及Ki-67表達(dá)之間的相關(guān)性，分析E-cadherin在鑒別PTs和纖維腺瘤的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 南昌市第三醫(yī)院2011年4月～2013年5月手術(shù)切除的PTs患者60例，年齡26～76歲，平均45歲;腫物直徑1.8～21 cm，平均6.3 cm;其中，良性PTs 41例，交界性PTs 16例，惡性PTs 3例。選擇同期乳腺纖維腺瘤患者10例作為對(duì)照組，年齡1 9～48歲，平均30.6歲;腫物直徑1.5～4cm，平均2.2 cm，分別取腫瘤組織。

1.2 方法

1.2.1 病理形態(tài)觀察方法 所有腫瘤組織經(jīng)10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋及HE染色，由兩名病理醫(yī)師顯微鏡下觀察腫瘤的間質(zhì)細(xì)胞異型性、間質(zhì)細(xì)胞密度、核分裂象、間質(zhì)過(guò)度生長(zhǎng)、腫瘤邊界的病理學(xué)特征。1～3項(xiàng)分為輕、中、重3級(jí)，核分裂象為計(jì)算每10個(gè)(400倍)HPF內(nèi)間質(zhì)細(xì)胞核分裂數(shù)(直徑0.5 mm)。病理診斷標(biāo)準(zhǔn):良性PTs為間質(zhì)細(xì)胞密度低，無(wú)間質(zhì)過(guò)度生長(zhǎng)，核輕度異型，腫瘤邊界清楚，和(或)核分裂≤2個(gè)/10 HPF(400倍);惡性PTs為間質(zhì)細(xì)胞密度高、間質(zhì)過(guò)度生長(zhǎng)、核重度異型、核分裂≥5個(gè)/10 HPF(400倍)和(或)腫瘤邊界不清。符合以上5個(gè)診斷標(biāo)準(zhǔn)中的4個(gè)及以上則診斷為良性或惡性PTs，不完全符合良性或惡性PTs診斷標(biāo)準(zhǔn)時(shí)則診斷為交界性PTs。

1.2.2 E-cadherin、Ki67檢測(cè)方法 所有組織經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，SP法免疫組化染色。鼠抗人E-cadherin、Ki-67單克隆抗體(即用型，克隆號(hào):4A2C7、EP5)和SP免疫組化試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋公司。以陽(yáng)性對(duì)照切片作為陽(yáng)性對(duì)照，血清代替一抗為陰性對(duì)照，PBS代替一抗為空白對(duì)照。Ki-67用0.01 mol/L、pH 6.0的檸檬酸鹽進(jìn)行高壓修復(fù)，E-cadherin用0.001 mol/ L、pH 9.0的EDTA進(jìn)行熱修復(fù)。最后DAB顯色，蘇木精復(fù)染，鹽酸乙醇分化，氨水返藍(lán)。結(jié)果判定:在顯微鏡下觀察，E-cadherin為上皮成分中胞膜及近胞膜胞質(zhì)著色，Ki-67為胞核著色。E-cadherin按陽(yáng)性細(xì)胞比例及著色深淺評(píng)分。陽(yáng)性強(qiáng)度判定:無(wú)著色為0分，淡棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目為實(shí)際百分率;兩者相乘為評(píng)分結(jié)果，分值范圍0～300。Ki-67計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞比例。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。E-cadherin在葉狀腫瘤、纖維腺瘤上皮成分中表達(dá)是否存在差異采用t檢驗(yàn)，E-cadherin表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 E-cadherin蛋白表達(dá) E-cadherin蛋白在纖維腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)為236.50±60.14，在葉狀腫瘤中的陽(yáng)性表達(dá)為175.93±83.83，P=0.032。見(jiàn)插頁(yè)Ⅲ圖8。

2.2 E-cadherin表達(dá)與葉狀腫瘤病理學(xué)特征的關(guān)系 E-cadherin的表達(dá)隨著間質(zhì)細(xì)胞密度的增加而減少(P=0.00);E-cadherin的表達(dá)與腫瘤邊界、組織學(xué)分級(jí)、細(xì)胞異型性、細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)度及核分裂象無(wú)關(guān)性(P均＞0.05)。見(jiàn)表1。

表1 E-cadherin表達(dá)與乳腺葉狀腫瘤病理學(xué)特征參數(shù)的關(guān)系

2.3 E-cadherin蛋白表達(dá)與臨床特征及Ki-67表達(dá)的相關(guān)性 E-cadherin蛋白的表達(dá)與PTs患者年齡、腫瘤大小、間質(zhì)細(xì)胞及上皮細(xì)胞Ki-67的表達(dá)無(wú)相關(guān)性(r分別=－0.27、0.248、－0.208、－0.102，P均＞0.05)。

3 討論

E-cadherin主要參與細(xì)胞的黏附作用，被認(rèn)為是一種重要的抑癌基因。乳腺癌等許多上皮來(lái)源的腫瘤都有E-cadherin的缺失［1］。與上皮性腫瘤不同，本組實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，E-cadherin在PTs的上皮成分中高表達(dá)，而在間質(zhì)細(xì)胞中不表達(dá)。另外，E-cadherin的表達(dá)隨著間質(zhì)細(xì)胞密度的增加而減少;E-cadherin的表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小及邊界、組織學(xué)分級(jí)、細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)度及異型性、核分裂象及Ki-67的表達(dá)無(wú)關(guān)。以往人們認(rèn)為上皮成分不影響葉狀腫瘤的形成和發(fā)展。然而，從以上研究結(jié)果可以看出葉狀腫瘤的上皮成分與間質(zhì)成分存在著一定的關(guān)聯(lián)，且這種關(guān)聯(lián)對(duì)葉狀腫瘤的發(fā)展可能有重要作用。

葉狀腫瘤的上皮成分和間質(zhì)成分都參與PTs的形成，且上皮成分參與間質(zhì)的生長(zhǎng)。上皮蛋白的表達(dá)與間質(zhì)特征的關(guān)系表明這兩種成分之間是相互關(guān)聯(lián)的［2～4］。Wnt信號(hào)通路可能是上皮—間質(zhì)之間相互作用的重要通路［5］。Wnt通路中的許多蛋白，如上皮 Wnt5A、間質(zhì) SFRP4等在 PTs中都有過(guò)表達(dá)［6］。Wnt通路也能影響依賴E-cadherin的細(xì)胞黏附，Wnt通路能影響PTs上皮成分中E-cadherin的表達(dá)［7］。由此推測(cè)E-cadherin在PTs上皮成分中的變化可能與其間質(zhì)特征相關(guān)。

然而，除抑癌基因作用外，E-cadherin還可能作為原癌基因發(fā)揮作用。胞質(zhì)內(nèi)E-cadherin的裂解片段及其向核內(nèi)的遷移已經(jīng)表明，E-cadherin能促進(jìn)Cyclin D1等目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄［8，9］。另外，E-cadherin也能參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)［10，11］。根據(jù)以上推測(cè)E-cadherin可能通過(guò)以上機(jī)制促進(jìn)PTs惡性轉(zhuǎn)化，但本研究結(jié)果顯示，E-cadherin在葉狀腫瘤中充當(dāng)著類似抑癌基因的角色，這需要今后在細(xì)胞及基因水平進(jìn)一步研究證實(shí)。

PTs中上皮性E-cadherin的表達(dá)也可能是由于Wnt成分的改變所引起的。這種作用更可能通過(guò)非經(jīng)典型Wnt通路而不是經(jīng)典型Wnt通路產(chǎn)生的，盡管兩種通路都與E-cadherin介導(dǎo)的黏附作用有關(guān)。β-catenin是經(jīng)典型Wnt通路中的關(guān)鍵因子，能調(diào)節(jié)E-cadherin阻遏蛋白的表達(dá)。相反，E-cadherin復(fù)合物能調(diào)控β-catenin介導(dǎo)的經(jīng)典型Wnt通路。許多上皮性腫瘤中都能發(fā)現(xiàn)經(jīng)典型Wnt信號(hào)通路的激活與E-cadherin表達(dá)的下降同時(shí)發(fā)生。Wnt蛋白通過(guò)鈣流入激活非經(jīng)典型Wnt通路［12］。作為鈣依賴性黏附分子，E-cadherin與非經(jīng)典型Wnt通路有關(guān)。Wnt5A是非經(jīng)典型Wnt通路中的一個(gè)因子，能夠促進(jìn) E-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞黏附［13］。Wnt5A與E-cadherin的表達(dá)在肝癌及乳腺癌中都呈正相關(guān)［14］。除Wnt5A外，Wnt信號(hào)通路的其他成員，如SFRPs也能增加E-cadherin的表達(dá)。SFRP4在PTs的間質(zhì)成分中表達(dá)異常［5］。

PTs與纖維腺瘤有時(shí)在形態(tài)學(xué)上難以鑒別，這兩者在發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中有著一定的聯(lián)系，有著相同的起源但不同的分化方向。目前，研究更傾向于上皮成分與間質(zhì)成分互相作用的模式參與PT的起源［15］。本研究結(jié)果表明，E-cadherin在乳腺纖維腺瘤上皮成分中的表達(dá)比乳腺葉狀腫瘤上皮成分中更高，這可能對(duì)我們鑒別這兩者有一定的作用。E-cadherin在上皮成分中表達(dá)不夠高時(shí)，我們更傾向于診斷葉狀腫瘤。另外，E-cadherin在良性葉狀腫瘤上皮成分中的表達(dá)水平隨著間質(zhì)細(xì)胞密度的增加而減少，這提示，E-cadherin在葉狀腫瘤間質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)的過(guò)程中可能起著抑制作用，可通過(guò)后續(xù)研究進(jìn)一步證實(shí)。

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