張 俊，張 飛，文心田，冉 曦，黃小波，伍 銳，文翼平，曹三杰

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院/豬病研究中心，四川 成都 611130)

豬傳染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia，PCP)是由胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)引起的一種以肺炎和胸膜炎癥狀為特征的接觸性呼吸道疾病，該病廣泛存在于所有養(yǎng)豬國(guó)家，常與其它病原混合感染，不同年齡、性別的豬均可感染[1]。該病導(dǎo)致豬的生產(chǎn)性能下降，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。及時(shí)準(zhǔn)確地掌握該病的流行情況是預(yù)防和控制的關(guān)鍵，其中血清學(xué)檢測(cè)是流行病學(xué)研究的重要手段之一，具有準(zhǔn)確、快速的特點(diǎn)[2]。

本研究對(duì)采集自2014 年1 月～12 月四川省16個(gè)地區(qū)、各生產(chǎn)階段豬的28 個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)臨床樣品感染APP 的情況進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查，為制定該病有效的防控措施提供了流行病學(xué)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 樣品采集及主要試劑 2014 年1 月～12 月從四川地區(qū)16 個(gè)市的28 個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)共計(jì)采集臨床樣品552 份(表1)。隨機(jī)從被檢豬的前腔靜脈采血，收集血清保存待檢。ApxⅣ-ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司。

1.2 血清樣品的檢測(cè) 按照ApxⅣ-ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)操作方法對(duì)采集的血清樣品進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)成立的條件為：陽(yáng)性對(duì)照孔OD630nm值均≥0.6；陰性對(duì)照孔OD630nm均<0.3。

如果S(樣品孔OD630nm值)≥P(陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630nm值)×0.25，判為陽(yáng)性；如果S

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 調(diào)查結(jié)果資料建立統(tǒng)一的SPSS數(shù)據(jù)庫(kù)，采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0 進(jìn)行變量間的相關(guān)分析，建立Logistic 回歸分析模型，以是否為陽(yáng)性為因變量，以地區(qū)、豬群和采樣時(shí)間為自變量，以p<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同地區(qū)陽(yáng)性檢出率及分析 對(duì)來(lái)自四川省16 個(gè)不同地區(qū)采集的552 份血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示：四川地區(qū)PCP 的總體陽(yáng)性檢出率為20.29%(112/552)，成都、綿陽(yáng)、眉山等地均有APP 感染，并且感染水平不同，呈地方性流行，其中成都和攀枝花的陽(yáng)性率分別為42.98 %和42.86 %，為總體陽(yáng)性檢出率的2 倍以上(表1)。多因素Logistic 回歸分析顯示：地區(qū)不同對(duì)是否陽(yáng)性的影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Wald 值為2.997，p 值為0.043<0.05)，表明采樣地區(qū)與陰陽(yáng)性具有顯著的相關(guān)性。

表1 四川地區(qū)APP 血清陽(yáng)性檢出率統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 1 The epidemiological status of pigs infected with APP in different regions

2.2 不同豬群陽(yáng)性檢出率及分析 對(duì)不同豬齡的血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示：PCP 陽(yáng)性檢出率與豬的生產(chǎn)階段具有密切關(guān)系，不同生產(chǎn)階段豬血清陽(yáng)性檢出率具有較大差異。種母豬陽(yáng)性檢出率為44.83 %，哺乳仔豬、保育豬、育肥豬的陽(yáng)性檢出率分別為22.22 %、7.66 %、3.95 %。種母豬與其它豬相比血清陽(yáng)性檢出率更高(表2)。Logistic 分析結(jié)果顯示：不同豬齡對(duì)陰陽(yáng)性也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Wald值為40.974，p 值<0.001)，并且豬齡與陰陽(yáng)性表現(xiàn)為顯著的正相關(guān)性(回歸系數(shù)B>0)。

表2 不同年齡豬群APP 血清陽(yáng)性檢出率統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 2 The epidemiological status of pigs infected with APP at different ages

由于PCP 不能垂直傳播[3]，本研究針對(duì)眉山采集了5 頭母豬血清樣品，每頭母豬對(duì)應(yīng)采集其哺乳仔豬樣品2 份進(jìn)行檢測(cè)。15 份血清樣品分為5 組，編號(hào)為1～5，每組3 個(gè)樣品，結(jié)果顯示：5 組中有3 組哺乳仔豬樣品檢測(cè)為陽(yáng)性，而其對(duì)應(yīng)母豬血清樣品檢測(cè)均為陰性，未發(fā)現(xiàn)母豬與哺乳仔豬同時(shí)感染APP 的現(xiàn)象，表明APP 確實(shí)不能垂直傳播。

2.3 不同季節(jié)的陽(yáng)性檢出率及分析 對(duì)2014 年不同季節(jié)的血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示：該病四季均有發(fā)生，但四川地區(qū)以夏季和冬季多發(fā)，并且不同季節(jié)陽(yáng)性檢出率表現(xiàn)出較大的差異。各變量間的相關(guān)分析顯示：地區(qū)、豬齡和采樣季節(jié)與陽(yáng)性率有顯著的相關(guān)性，但在多因素Logistic 回歸分析模型中采樣季節(jié)對(duì)應(yīng)的p 值大于0.05，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此認(rèn)為對(duì)陰陽(yáng)性的影響作用不顯著。

表3 不同季節(jié)APP 血清陽(yáng)性檢出率統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 3 The epidemiological status of pigs infected with APP in different seasons

3 討論

APP 有15 種血清型，各血清型之間缺乏良好的交叉保護(hù)，這給PCP 的診斷和防治帶來(lái)了困難[4-5]。目前，APP 的實(shí)驗(yàn)室診斷方法有PCR 法或采用間接血凝抑制實(shí)驗(yàn)(IHA)、ELISA 等[6]。本研究首次采用15 種APP 血清型均分泌的ApxⅣ作為抗原進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，其具有特異性強(qiáng)和靈敏度高，能夠區(qū)分APP 全菌滅活苗免疫和野毒感染的特點(diǎn)[7]，也能特異性區(qū)分副豬嗜血桿菌和APP。ApxⅣ-ELISA 試劑盒的使用大大提高了APP 檢測(cè)的準(zhǔn)確度。

本研究結(jié)果相比樊祜卿等2009 年報(bào)道的18.5%陽(yáng)性檢出率有所上升[8]，表明在2009 年～2014 年，四川地區(qū)PCP 感染有小幅度的提升，該病在四川地區(qū)的感染呈上升趨勢(shì)。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，雖然有些地區(qū)的陽(yáng)性檢出率很低，但卻發(fā)現(xiàn)這些地區(qū)存在大量可疑陽(yáng)性血清，這些可疑感染豬只隨著日齡和季節(jié)變化極有可能轉(zhuǎn)變?yōu)殛?yáng)性感染豬[9]，四川地區(qū)APP 的流行程度還可能會(huì)進(jìn)一步上升，因而繼續(xù)加強(qiáng)四川地區(qū)APP 流行情況的監(jiān)測(cè)和養(yǎng)豬場(chǎng)對(duì)APP 的防控顯得尤為重要。

本研究對(duì)PCP 在四川地區(qū)的流行病學(xué)調(diào)查，樣品來(lái)源多，覆蓋面廣，從地區(qū)、采樣季節(jié)、不同豬齡3 個(gè)不同角度對(duì)四川地區(qū)PCP 流行情況進(jìn)行調(diào)查，通過(guò)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)Logistic 回歸分析，科學(xué)分析了四川地區(qū)PCP 的流行特點(diǎn)和流行情況，為四川地區(qū)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)對(duì)PCP 的防控具有重要參考意義。

[1]Ito H,Matsumoto A.Isolation and genetic characterization of an Actinobacillus pleuropneumoniae serovar K12:O3 strain[J].J Vet Diagn Invest,2015,27(1):102-106.

[2]Ting S H,Tan H C,Wong W K,et al.Seroepidemiology of neutralizing antibodies to Japanese encephalitis virus in Singapore:continued transmission despite abolishment of pig farming?[J].Acta Trop,2004,92(3):187-191.

[3]Wongnarkpet S,Pfeiffer D U,Morris R S,et al.An on-farm study of the epidemiology of Actinobacillus pleuropneumoniae infection in pigs as part of a vaccine efficacy trial[J].Prev Vet Med,1999,39(1):1-11.

[4]姜宏澤，李英，文心田，等.胸膜肺炎放線桿菌抗體ApxⅣ-Dot-PPA-ELISA 檢測(cè)方法的建立[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2015，45(06)：633-638.

[5]肖國(guó)生，李娟，黃小波，等.胸膜肺炎放線桿菌鐵離子攝取的分子機(jī)理[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2010，01：77-80.

[6]Wei Bo,Li Fang,Yang Hui-cui,et al.Magnetic beads-based enzymatic spectrofluorometric assay for rapid and sensitive detection of antibody against ApxIVA of Actinobacillus pleuropneumoniae[J].Biosens Bioelectron,2012,35(1):390-393.

[7]Yan B,Ma J Z,Yu T F,et al.Development of an indirect ELISA with epitope on nonstructural protein of Muscovy duck parvovirus for differentiating between infected and vaccinated Muscovy ducks[J].Lett Appl Microbiol,2014,59(6):631-635.

[8]樊祜卿，儲(chǔ)岳峰，賀英，等.四川省部分地區(qū)豬傳染性胸膜肺炎的流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2009，(05)：49-50.

[9]Tobias T J,Bouma A,Van Den Broek J,et al.Transmission of Actinobacillus pleuropneumoniae among weaned piglets on endemically infected farms[J].Prev Vet Med,2014,117(1):207-214.