鐘水橋 梁美艷

摘 要：建立EMR-Lipid-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定豬肉中12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量。樣品經(jīng)乙腈均質(zhì)提取，無水乙酸鈉去除水分，采用增強型基質(zhì)去除凈化管EMR-Lipid凈化后，以超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法多反應(yīng)監(jiān)測掃描模式進(jìn)行定性定量分析。方法線性相關(guān)系數(shù)均大于0.998，檢出限為0.5 μg·kg-1，定量限為1.0 μg·kg-1，在1、2、5 μg·kg-13個濃度添加水平下，平均回收率為76.1%～115.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.3%～4.6%。該方法靈敏度高、重現(xiàn)性好、回收率穩(wěn)定且檢測速度快、定量準(zhǔn)確，適用于豬肉中多種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量測定。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;EMR-Lipid;氨基甲酸酯類;豬肉

Abstract：A new method of determination for 12 carbamate pesticide residues in Pork by UHPLC-MS/MS was developed.The samples were homogeneous extracted with acetonitrile，then anhydrous sodium acetate remove the water， After purification with enhanced matrix removal purification tube EMR-Lipid， the qualitative and quantitative analysis was performed by using UHPLC-MS/MS multiple reaction monitoring scanning mode.The linear correlation coefficients of the methods were all greater than 0.998， the detection limit was 0.5 μg·kg-1， and the limit of quantification was 1.0 μg·kg-1. Average recoveries for 12 targets at spiked levels of 1， 2 and 5 μg·kg-1 ranged from 76.1% to 115.1% with relative standard deviations of 2.3% to 4.6%. This method has high sensitivity， good reproducibility， stable recovery， rapid detection， and accurate quantification， it is suitable for the determination of various carbamate pesticide residues in pork.

Key words：UHPLC-MS/MS; EMR-Lipid; Carbamate pesticides; Pork

氨基甲酸酯類農(nóng)藥具有低毒、高效、分解快、殘留期短和選擇性強的特點，作為有機氯農(nóng)藥的替代品，被廣泛使用。玉米、小麥等飼料作物中殘留的氨基甲酸酯類農(nóng)藥可經(jīng)過養(yǎng)殖動物攝入并通過食物鏈進(jìn)入人體。目前國內(nèi)對氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留分析的文獻(xiàn)報道有水產(chǎn)品、水果、蔬菜、中藥等[1-4]，但在動物源性食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的研究較少[5-6]，因此迫切需要建立一種簡便、快速、準(zhǔn)確的方法檢驗動物食品中的氨基甲酸酯類殘留。

EMR-Lipid是一種新型吸附材料，能夠選擇性除去樣品萃取物中的主要脂類且不會造成分析物的損失。本研究通過對樣品前處理條件的優(yōu)化，即乙腈提取，EMR-Lipid凈化后上LC-MSMS進(jìn)行分析，此方法極大的提高豬肉中脂類基質(zhì)和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的有效分離和檢測，從而建立了一種簡便、快速、準(zhǔn)確測定動物源性食品中氨基甲酸酯類的分析方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC-1290/QQQ-6490）：安捷倫科技有限公司;分散均質(zhì)機T18 DS25：德國IKA;離心機Allegra X-15R：BECKMAN;EMR-Lipid（3 mL/300 mg）：安捷倫科技有限公司;無水乙酸鈉：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;乙腈（HPLC級）：德國Merck公司;

試劑。12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：涕滅威亞砜、涕滅威砜、滅多威、3-羥基克百威、涕滅威、速滅威、殘殺威、克百威、甲萘威、異丙威、仲丁威、滅蟲威（純度>95.0%），購自德國Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制

分別稱取12種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg（精確至0.000 1 g）于12個10 mL容量瓶中，加少量乙腈振蕩溶解后，以乙腈定容，配制成1.0 mg·mL-1的12種農(nóng)藥單標(biāo)儲備液，儲存于4 ℃冰箱。

1.3 試驗方法

1.3.1 提取及凈化

稱取5 g試樣，精確至0.01 g，于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈均質(zhì)5 min，加入2 g無水乙酸鈉，振蕩2 min，8 000 r·min-1離心5 min，取上清液3 mL過EMR-Lipid凈化柱，棄去初濾液，續(xù)濾液過0.22 μm有機濾膜，供LC-MS/MS測定。

1.3.2 色譜條件

色譜柱：ACE Ultracore Super C18柱（2.5 μm，x2.1 mm× 100 cm）。流動相：0.1%甲酸水（A相）和乙腈（B相）。梯度洗脫程序：0～0.5 min，20%B～35%B;0.5～2.0 min，35%B～90%B;2.0～3.5 min，90%B;流速：0.35 mL·min-1。柱溫：35 ℃。進(jìn)樣量：2.0 μL。

1.3.3 質(zhì)譜條件

離子源為電噴霧離子源（ESI），正離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）在分析過程中，以離子對信息比較和保留時間進(jìn)行定性分析;以母離子和響應(yīng)高的子離子通道進(jìn)行定量分析，12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥定性定量離子對、碰撞能量（CE）如表1所示。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系與檢出限

取1.2中標(biāo)準(zhǔn)儲備液分別采用空白豬肉提取液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液進(jìn)行稀釋，配制成約1.0～10.0 μg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。以峰面積（Y）對其質(zhì)量濃度（z）作標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在相應(yīng)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的響應(yīng)值與其質(zhì)量濃度的線性關(guān)系良好（r2>0.998）。各農(nóng)藥的LOD及LOQ分別為0.5 μg·kg-1和1.0 μg·kg-1。結(jié)果見表2。

2.2 回收率與精密度

在新鮮豬肉空白試樣中加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（設(shè)1、2、5 μg·kg-13個濃度梯度），每個濃度設(shè)置6個重復(fù)，按上述前處理和分析方法，測農(nóng)藥在豬肉試樣中的添加回收率，結(jié)果見表2，12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在豬肉中的平均回收率為76.1%～115.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.3%～4.6%，該方法具有較好的精密度，符合痕量分析的要求。

3 結(jié)論

本研究將EMR-Lipid用于豬肉中農(nóng)藥殘留的前處理凈化，并結(jié)合HPLC-MS/MS分析，建立了一種快速、準(zhǔn)確測定豬肉中12種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的分析方法。實驗結(jié)果表明EMR-Lipid凈化效果良好，有效降低了豬肉中油脂。該方法操作簡便、選擇性好、準(zhǔn)確度高，可作為豬肉中多種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的測定方法。

參考文獻(xiàn)：

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