全洪兵 于國東 羅嬌娜 陳偉才 李琳 李廣華

不同方法測定痤瘡患者外周血中IL-4及IFN-γ水平分析

全洪兵 于國東 羅嬌娜 陳偉才 李琳 李廣華

目的用不同方法檢測痤瘡患者外周血中白細胞介素4(IL-4)、γ干擾素(IFN-γ)的細胞因子表達量, 探討?zhàn)畀徎颊呦鄳?yīng)的免疫功能的失衡狀況, 從而為臨床采用更有效的檢測和治療的方法提供理論依據(jù)。方法60例痤瘡患者為實驗組,60例健康體檢者為對照組, 分別采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法、流式細胞術(shù)兩種方法, 檢測外周血中IL-4及IFN-γ水平, 比較兩種方法測定實驗組及對照組血漿IL-4及IFN-γ水平的不同。結(jié)果雙抗體夾心ELISA法檢測實驗組血清中IL-4表達量為(45.48±17.36)ng/L, 相對于對照組顯著升高(P＜0.001)；IFN-γ為(40.59±16.47)ng/L, 相對于對照組顯著降低(P＜0.001), IFN-γ/IL-4比值相對于對照組顯著降低(P＜0.001)。流式細胞術(shù)檢測實驗組外周血中胞內(nèi)IL-4占總T細胞百分比為(6.767±1.477)%, 相對于對照組顯著升高(P＜0.01), IFN-γ為(5.70±3.766)%, 相對于對照組顯著降低(P＜0.001), IFN-γ/IL-4比值相對于對照組顯著降低(P＜0.001)。結(jié)論 兩種方法進行IL-4及IFN-γ測定表達水平不同, 但是痤瘡患者與健康人相比IL-4及IFN-γ表達升高或降低趨勢一致。

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗；流式細胞術(shù)；痤瘡；白細胞介素4 ；γ干擾素

痤瘡(acne)是臨床常見毛囊皮脂腺慢性炎癥性皮膚病,好發(fā)于青春期男女[1]。Andrews《皮膚病學》中指出：10余歲青少年中90%發(fā)生過痤瘡[2]。痤瘡的發(fā)病機制除因皮脂分泌過多、毛囊皮脂腺導(dǎo)管過度角化、痤瘡丙酸桿菌引發(fā)炎癥及性激素分泌對皮脂腺調(diào)控異常等因素外, 近年來的研究表明, 免疫失衡在痤瘡炎癥發(fā)展中起關(guān)鍵性作用[3]。在痤瘡皮損中, 角質(zhì)形成細胞和皮脂腺細胞均可表達TLR-2 和TLR-4 并誘導(dǎo)產(chǎn)生IL-8、IL-2、腫瘤壞死因子α 及IFN-γ等細胞因子, 引起粒細胞、巨噬細胞趨化聚集[4,5], T 細胞介導(dǎo)的細胞免疫活化反應(yīng)參與痤瘡發(fā)病過程, 并隨著病情的加重而增強, IL-4的水平在此過程會明顯升高[6]。本實驗旨在通過用ELISA方法與流式細胞術(shù)檢測痤瘡患者外周血中血清IL-4、IFN-γ的細胞因子水平與外周血中胞內(nèi)IL-4、IFN-γ占總T細胞百分比水平, 探討?zhàn)畀徎颊呦鄳?yīng)的免疫功能的失衡狀況, 從而為臨床采用更有效的檢測和治療方法提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對象選取本院及廣東省人民醫(yī)院門診2013年8月～2014年3月門診痤瘡患者共60例為實驗組,選擇60例健康體檢者為對照組, 采用的納入及排除標準如下[7]：納入標準：①符合Pillsbury診斷標準；②痤瘡分級明確；③年齡16～30歲。排除標準：①孕婦及哺乳期婦女；②有嚴重心肝腎及免疫系統(tǒng)疾病者；③近1個月有應(yīng)用糖皮質(zhì)激素及其他免疫抑制劑。兩組性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標本采集及處理 所有研究對象均于清晨空腹時采肘靜脈血, 分A、B兩管, A管2 ml EDTA抗凝, B管2 ml肝素鈉抗凝。A管及時3000 r/min(離心半徑15 cm)離心20 min,分離吸取血漿, 血漿標本于-20℃凍存, 待統(tǒng)一條件下以ELISA檢測。B管直接流式細胞術(shù)檢測。

1.2.2 檢測方法 檢測血漿IL-4及IFN-γ水平, 分別在本院以及廣東省人民醫(yī)院檢測。本院采用雙抗體夾心ELISA法, 試劑盒由上海將來試劑有限公司提供, IL-4批號：201312, IFN-γ批號：201312, 嚴格按說明書操作。廣東省人民醫(yī)院采用流式細胞術(shù)檢測Th1/Th2細胞(CD3/ IFN-γ/ IL-4)(試劑盒為美國BD提供, FastImmune Cytokine Value, 貨號：340460, 批號：615324), 嚴格按照說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差 (±s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 雙抗體夾心ELISA方法檢測外周血血清中IFN-γ、IL-4的表達水平分別為(40.59±16.47)ng/L、(45.48±17.36)ng/L, IFN-γ/IL-4為(0.9848±0.4403), 與對照組進行比較, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。見表1, 圖1(A)。

2.2 流式細胞術(shù)檢測外周血中胞內(nèi)IFN-γ、IL-4占總T細胞的百分比分別為(5.70±3.766)%、(6.767±1.477)%, IFN-γ/ IL-4為(0.8962±0.466), 與對照組進行比較, IFN-γ百分比與IFN-γ/IL-4比值差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001), IL-4比值比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。見表1, 圖1(B)。

表1 兩組不同方法IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平檢測比較 (±s)

表1 兩組不同方法IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平檢測比較 (±s)

注：與對照組比較,aP＜0.001,bP＜0.01

檢測方法 組別 例數(shù) IFN-γ IL-4 IFN-γ/IL-4 ELISA方法 實驗組(ng/L) 60 40.59±16.47a 45.48±17.36a 0.9848±0.4403a對照組(ng/L) 60 75.64±23.21 30.13±12.13 2.819±1.314流式細胞術(shù) 實驗組(%) 60 5.70±3.766a 6.767±1.477b 0.8962±0.466a對照組(%) 60 10.92±6.036 5.683±1.935 2.12±1.203

圖1 兩組不同方法IFN-γ、IL-4水平檢測比較

2.3 ELISA方法與流式細胞術(shù)檢測IFN-γ/IL-4比值比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 表明兩種方法檢測IFN-γ/IL-4具有一致性。

3 討論

痤瘡的發(fā)病機制中, 免疫失衡在痤瘡炎癥發(fā)展中起關(guān)鍵性作用[8]。T 細胞介導(dǎo)的細胞免疫活化反應(yīng)和體液免疫均參與了痤瘡的發(fā)病機制, T細胞介導(dǎo)的細胞免疫活化反應(yīng)參與痤瘡發(fā)病過程[9]。

本文采用ELISA方法與流式細胞術(shù)檢測痤瘡患者外周血中血清IL-4、IFN-γ的細胞因子水平與外周血中胞內(nèi)IL-4、IFN-γ占總T細胞百分比水平與對照組進行對比分析。雙抗體夾心ELISA方法檢測外周血血清中IFN-γ、IL-4的表達水平, 與對照組進行比較, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)。流式細胞術(shù)檢測外周血中胞內(nèi)IFN-γ、IL-4占總T細胞的百分比, 與對照組進行比較, IFN-γ百分比與IFN-γ/IL-4比值比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001), IL-4比值比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。ELISA方法與流式細胞術(shù)進行比較, IFN-γ/IL-4比值比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 表明兩種方法檢測IFN-γ/IL-4具有一致性。

本文研究說明痤瘡患者外周血中無論是血清中還是胞內(nèi), 都存在IFN-γ/IL-4比例相對于正常人顯著降低, 細胞因子水平失衡。痤瘡治療上目前臨床主要采用抗感染、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、抗雄激素、中藥熏蒸[10]等常規(guī)藥物方法, 但治療存在不良反應(yīng)多、易反復(fù)等問題, 可通過細胞主動免疫治療,與免疫抑制劑等從調(diào)節(jié)機體免疫功能方面等新方法著手治療痤瘡, 可能達到良好效果。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.15.025

2015-04-27]

525300 廣東省佛山市順德區(qū)中醫(yī)院檢驗科(全洪兵于國東 陳偉才 李琳)；廣東省佛山順德區(qū)計生服務(wù)中心檢驗科(羅嬌娜)；廣東省人民醫(yī)院檢驗科(李廣華)