蔣 迎，王 晨，王國慶，劉 新

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所農(nóng)業(yè)部茶葉質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（杭州），浙江杭州 310008）

超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茄子中氯吡脲的殘留

蔣 迎，王 晨，王國慶，劉 新?

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所農(nóng)業(yè)部茶葉質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（杭州），浙江杭州 310008）

利用超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法建立測(cè)定茄子中氯吡脲殘留的方法。樣品經(jīng)乙腈均質(zhì)提取后，用氯化鈉鹽析分層，取上清液直接上反相液相色譜分離，三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)外標(biāo)法定量。添加標(biāo)樣濃度為2～300μg·kg－1，平均添加回收率（n＝5）為100.13%～106.53%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.70%～6.00%。在1～10 000μg·L－1，R2為0.997；方法檢出限和定量限分別為0.20和0.66μg·kg－1。該分析方法簡(jiǎn)便、靈敏、可靠，適用于茄子中氯吡脲的質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

茄子；氯吡脲；超高效液相色譜?串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜

增產(chǎn)是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的普遍需求，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑因其有效的促進(jìn)作用而被廣泛使用。氯吡脲，別名KT30或者CPPU，于20世紀(jì)80年代日本開發(fā)［1］后引入中國，是經(jīng)國家批準(zhǔn)的苯脲類植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，活性高于6?芐氨基嘌呤10～100倍，是廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)的一種高效植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，近年使用量顯著增加。我國氯吡脲已登記可用作物有黃瓜、獼猴桃、甜瓜、葡萄和西瓜等，但沒有茄子。茄子是否能用氯吡脲，需要進(jìn)行殘留試驗(yàn)、市場(chǎng)殘留監(jiān)測(cè)、建立使用規(guī)范等，而這首先要求有一個(gè)準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便、靈敏的檢測(cè)方法。有關(guān)氯吡脲的檢測(cè)方法主要有液相色譜和液相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用等［2－11］，但涉及茄子基質(zhì)的未見報(bào)道。本文利用超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法建立測(cè)定茄子中氯吡脲殘留的方法，為茄子中氯吡脲植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作提供簡(jiǎn)便、靈敏、可靠的分析方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

試驗(yàn)儀器有API 3200三重四極桿質(zhì)譜儀（美國AB公司），超高效液相色譜儀（美國Waters公司），Hss?T3色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8μm，美國Waters公司），AE 100電子分析天平（瑞士Mettler公司），T25均質(zhì)器（德國IKA公司），GL?21M高速冷凍離心機(jī)（上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司），渦旋混勻器（中國蘇州捷美電子有限公司）。

試驗(yàn)試劑。乙腈（色譜純，德國Merck公司）；氯化鈉、乙酸銨（分析純，上海國藥集團(tuán)）；甲酸（色譜純，美國Fluka公司）；乙二胺?N?丙基硅烷（PSA，40μm，美國Varian公司）；純凈水（杭州娃哈哈公司）；氯吡脲（forchlorfenuron分析標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥96.0%，美國Sigma公司）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置

取適量的氯吡脲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用乙腈稀釋成100 mg·L－1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，－20℃下避光保存?zhèn)溆谩?zhǔn)確吸取一定體積的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙腈定容，得到1，2，6，10，30，100，300，1 000和10 000μg·L－1的工作標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。

1.2.2 樣品處理方法

稱取25.0 g茄子樣品于100 mL具塞量筒均質(zhì)中，加入50 mL乙腈溶液均質(zhì)提取10 min，加入5.0～7.0 g氯化鈉充分振搖后，靜置分層，取上清液過0.22μm濾膜，待上機(jī)分析。如有濃縮需要，也可取鹽析上清液濃縮后重新定容。需要注意的是，配制定量用的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液也要用同樣處理的空白基質(zhì)。

1.2.3 色譜條件

流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為乙腈。梯度洗脫條件：0～1.00min，90%A；1.00～10.00 min，90%～0 A；10.00～12.00 min，0 A；12.00～12.10 min，0～90%A；12.10～14.00 min，90%A。流速0.25 mL·min－1；柱溫35℃；進(jìn)樣量3μL。

1.2.4 質(zhì)譜條件

ESI源，負(fù)離子掃描；氣簾氣流速20 L· min－1，霧化氣流速50 L·min－1，輔助氣流速50 L· min－1；輔助加熱氣溫度550℃；噴霧電壓－4 500 V；采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式。氯吡脲定量離子對(duì)246.0＞127.0（m·z－1），定性離子對(duì)246.0＞127.0／91.0（m·z－1），碰撞能量29／55（V），解簇電壓（DP）－20／－20（V），入口電壓（EP）－10／－10（V），碰撞能量（CE）－20／－38（V），碰撞室出口電壓（CXP）－2／－2（V）。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取凈化方法

氯吡脲難溶于水，易溶于丙酮、甲醇等極性有機(jī)試劑。因此考慮有機(jī)試劑提取后鹽析，鹽析是一個(gè)集濃縮與凈化去除水溶性雜質(zhì)的有效手段。參考NY／T 761—2008，乙腈均質(zhì)提取后加入氯化鈉鹽析靜置分層。結(jié)果顯示，提取效率在100%左右，能滿足檢測(cè)要求。

對(duì)鹽析液用PSA進(jìn)一步作分散固相萃取凈化處理。鹽析液1.5 m L加入已預(yù)先加入20，50，80，100 mg PSA和200 mg乙酸鈉填料的離心管中，渦旋提取15 s，在5 000 r·min－1下離心5 min，取上層提取液過0.22μm濾膜后檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)分散固相萃取處理的回收率為76%～89%，會(huì)降低總體的回收率。因此考慮鹽析液直接上機(jī)分析。

2.2 質(zhì)譜和色譜條件優(yōu)化

2.2.1 質(zhì)譜條件優(yōu)化

將氯吡脲標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液用乙腈稀釋至1 mg· L－1，利用針泵進(jìn)樣，確定準(zhǔn)分子離子峰，并優(yōu)化其解簇電壓（DP）、入口電壓（EP）、碰撞能量（CE）和碰撞室出口電壓（CXP），根據(jù)響應(yīng)情況確定定量與定性離子。氯吡脲在ESI＋和ESI?條件下，都可電離，ESI?離子化效率比ESI＋高出1個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，選擇ESI?，并確定質(zhì)譜條件：定量離子對(duì)246.0＞127.0（m·z－1），定性離子對(duì)246.0＞127.0／91.0（m·z－1），碰撞能量29／55（V），解簇電壓（DP）－20／－20（V），入口電壓（EP）－10／－10（V），碰撞能量（CE）－20／－38（V）和碰撞室出口電壓（CXP）－2／－2（V）。2.2.2 色譜條件優(yōu)化

因?yàn)闃悠飞蠙C(jī)液是用乙腈溶解的，故流動(dòng)有機(jī)相也考慮選擇乙腈。以0.017 8 mg·L－1標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)樣，分別比較水?乙腈，0.1%（V／V）甲酸水溶液?乙腈，5 mmol乙酸銨水溶液?乙腈、5 mmol乙酸銨0.1%（V／V）甲酸?乙腈4種流動(dòng)相對(duì)氯吡脲的色譜峰峰形和響應(yīng)值的影響。液相流動(dòng)相對(duì)氯吡脲的離子化效率有較大影響，流動(dòng)相含鹽會(huì)明顯降低離子化效率，而流動(dòng)相加酸則對(duì)峰形無明顯改善，綜合考慮選擇乙腈?水作為流動(dòng)相。

2.3 線性范圍和檢出限

將氯吡脲農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液用乙腈稀釋成不同濃度，并以空白基質(zhì)匹配進(jìn)行峰面積?濃度的線性范圍考察。雖然基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液在1～10 000μg·L－1，線性回歸方程為y＝7 916.9 x＋89 639，R2為0.997，線性相關(guān)性完全可接受。但低濃度時(shí)，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性范圍控制在30倍以內(nèi)，定量會(huì)更為準(zhǔn)確，如表1所示。

表1 不同濃度氯吡脲的加標(biāo)回收率和線性范圍

茄子中氯吡脲的提取鹽析液的LC?MS／MS的基質(zhì)效應(yīng)為增強(qiáng)效應(yīng)，這對(duì)提高檢測(cè)靈敏度有積極影響，分別以3和10倍信噪比（S／N）來確定儀器檢出限和定量限，又因?yàn)楸痉椒ǖ幕厥章试?00%左右，所以方法檢出限和定量限可近似等同于儀器檢出限和定量限的數(shù)值，檢出限和定量限分別為0.20和0.66μg·kg－1。

2.4 回收率和精密度

在質(zhì)譜分析中，基質(zhì)效應(yīng)經(jīng)常出現(xiàn)。因此在進(jìn)行回收試驗(yàn)時(shí)，采用空白基質(zhì)提取液配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液來計(jì)算回收率。本試驗(yàn)中分別以2，10，300μg· kg－1作為添加濃度進(jìn)行回收試驗(yàn)，每個(gè)試驗(yàn)對(duì)象做5次平行試驗(yàn)，并計(jì)算其平均回收率。由表1可知，茄子中氯吡脲的平均回收率為100.13%～106.53%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.70%～6.00%，滿足殘留測(cè)定的要求。

3 小結(jié)

本文建立了超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜準(zhǔn)確測(cè)定茄子中氯吡脲殘留的方法，檢出限和定量限分別為0.20和0.66μg·kg－1，平均回收率范圍為100.13%～106.53%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.70%～6.00%。該分析方法操作簡(jiǎn)便、靈敏可靠，能滿足茄子中氯吡脲殘留的測(cè)定要求，適于應(yīng)用在茄子中氯吡脲植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作中。

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（責(zé)任編輯：張瑞麟）

S 641.1；O 657

A

0528?9017（2015）11?1736?02

文獻(xiàn)著錄格式：蔣迎，王晨，王國慶，等.超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茄子中氯吡脲的殘留［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，56（11）：1736－1737，1746.

DOI 10.16178／j.issn.0528?9017.20151112

2015?08?14

浙江省重大科技專項(xiàng)重大農(nóng)業(yè)項(xiàng)目（2014C02002）

蔣 迎（1976－），女，浙江杭州人，副研究員，本科，從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)研究工作。E?mail：jiangying＠tricaas.com。

劉 新。E?mail：liuxin＠tricaas.com。