曹臣 黃開顏 李珊 陳迎春 劉紹貴

HPLC法測(cè)定腸溶交泰膠囊中鹽酸小檗堿的含量

曹臣 黃開顏 李珊 陳迎春 劉紹貴

目的建立腸溶交泰膠囊中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜法(HPLC)。色譜柱：SHIMADZU VP-ODS150 mm×4.6 mm；流動(dòng)相：以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(25∶75)；檢測(cè)波長(zhǎng)：345 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：25℃。結(jié)果鹽酸小檗堿在0.03012～0.6024 μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系, 其回歸方程為：Y=167557X+60945, R=0.9999。平均回收率為98.60％, RSD=1.51％。結(jié)論本方法操作簡(jiǎn)便, 重現(xiàn)性好, 精密度好, 可以用來(lái)控制本制劑的質(zhì)量。

腸溶交泰膠囊；鹽酸小檗堿；含量測(cè)定；高效液相色譜法

交泰丸是由黃連、肉桂二味藥按10∶1的比例配伍, 治療心腎不交的著名的中藥方劑, 出自《韓氏醫(yī)通》。功能交通心腎, 安神定志, 適用于心腎不交、夜寐不寧等癥[1］。方中以苦寒瀉降的黃連為主藥, 反佐以辛熱溫煦的肉桂為輔藥。黃連清心瀉火以制偏亢之心陽(yáng), 肉桂溫補(bǔ)下元以扶不足之腎陽(yáng)。心火不熾則心陽(yáng)自能下降, 腎陽(yáng)得扶則腎水上承自有動(dòng)力。水火既濟(jì), 交泰之象遂成, 夜寐不寧等癥便可自除。藥理研究表明交泰丸有明顯的鎮(zhèn)靜、安定作用。黃連與肉桂10∶1對(duì)中樞興奮性拮抗最好, 能增加腦組織中的5-HT的含量, 促進(jìn)睡眠?；瘜W(xué)成分研究表明配伍后交泰丸中抗菌消炎成分降低, 而鎮(zhèn)靜催眠成分明顯增加[2］。

腸溶交泰膠囊由交泰丸改進(jìn)而成。制成腸溶膠囊后, 降低了黃連對(duì)胃的傷害, 同時(shí)也可防止肉桂有效成分揮發(fā)。處方用黃連1200 g、肉桂120 g。黃連用60％的乙醇加熱回流提取3次, 合并提取液, 濾過(guò), 濾液回收乙醇并濃縮, 干燥成干浸膏, 粉碎, 加入肉桂細(xì)粉和適量的淀粉混勻, 裝入腸溶膠囊中, 制成1000粒, 每囊重0.3 g。

本研究建立了以高效液相色譜法測(cè)定該制劑中主藥的主要成分鹽酸小檗堿含量的方法, 為制訂腸溶交泰膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 島津LC-10ATvp高效液相色譜儀；HW-2000色譜工作站。

1.2 試劑與藥品 乙腈、甲醇為色譜純, 磷酸二氫鉀、鹽酸為分析純, 水為去離子水。鹽酸小檗堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所, 批號(hào)：110713-200609)。腸溶交泰膠囊(自產(chǎn), 批號(hào)130801、130802、130803、130804、130901、130902、130903、131001、131002、131003)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：SHIMADZU VP-ODS150 mm×4.6 mm；流動(dòng)相：以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(25∶75)；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm。流速：1.0 ml/min ；進(jìn)樣量：10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定鹽酸小檗堿對(duì)照品,加鹽酸-甲醇(1∶100)的混合溶液制成每1 ml約含30 μg鹽酸小檗堿的溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10粒, 除去囊殼, 傾出內(nèi)容物, 研細(xì)取0.1 g精密稱定, 置100 ml量瓶中, 加鹽酸-甲醇(1∶100)的混合溶液適量, 超聲處理20 min, 放冷, 用鹽酸-甲醇(1∶100)的混合溶液稀釋至刻度, 搖勻, 濾過(guò), 精密量取續(xù)濾液2 ml, 置10 ml量瓶中, 用鹽酸-甲醇(1∶100)的混合溶液稀釋至刻度, 搖勻, 離心10 min, 取上清液或?yàn)V過(guò),取續(xù)濾液, 即得。

2.2.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 按處方比例稱取肉桂粉,照制備工藝制成缺黃連的陰性供試品, 同上述供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性和專屬性試驗(yàn) 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件,精密吸取小檗堿對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10 μl, 注入HPLC 儀, 記錄色譜, 詳見(jiàn)圖1～3。結(jié)果顯示,供試品色譜中呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間一致色譜峰, 而陰性對(duì)照溶液在對(duì)照品色譜相應(yīng)位置處無(wú)吸收峰, 表明在該試驗(yàn)條件下, 其他成分對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾, 專屬性好。

2.4 線性關(guān)系考察 取鹽酸小檗堿對(duì)照品3 mg, 精密稱定, 置10 ml量瓶中, 加鹽酸-甲醇(1∶100)的混合溶液定容至刻度, 精密吸取0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 ml, 分別置10 ml量瓶中, 加鹽酸-甲醇(1∶100)的混合溶液稀釋至刻度,搖勻, 濾過(guò), 取續(xù)濾液10 μl注入液相色譜儀, 記錄峰面積。以峰面積與相對(duì)應(yīng)的溶液濃度作回歸曲線, 回歸方程為：Y=167557X+60945, r=0.9999。結(jié)果表明, 鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.03012～0.6024 μg范圍內(nèi)與相對(duì)應(yīng)的峰面積呈良好的線性。

圖1 鹽酸小檗堿對(duì)照品HPLC色譜圖

圖2 供試品HPLC色譜圖

圖3 陰性對(duì)照品HPLC色譜圖

2.5 精密度試驗(yàn) 取線性關(guān)系測(cè)定項(xiàng)下的中間濃度溶液,精密量取10 μl注入液相色譜儀, 重復(fù)測(cè)定6次, 測(cè)定峰面積。結(jié)果, 鹽酸小檗堿精密度RSD為1.60％。表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一批供試品溶液適量, 分別于2、4、6、8、12 h按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定, 記錄峰面積。結(jié)果, 鹽酸小檗堿RSD為1.31％。結(jié)果表明：供試品溶液在12 h內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取130801批供試品, 取內(nèi)容物適量, 研細(xì), 稱取6份, 每份約0.4 g, 精密稱定, 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液, 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果,含鹽酸小檗堿157.17 mg/g, RSD=1.77％。結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量為46.48 mg/粒(批號(hào)：130802)的樣品約0.01 g, 共6份, 分別精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品約1 mg, 按供試品溶液制備方法制備樣品溶液, 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定, 計(jì)算加樣回收率, 見(jiàn)表1。

2.9 樣品的測(cè)定與結(jié)果 取10批腸溶交泰膠囊樣品, 分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液, 并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定, 每批樣品平行操作3次, 計(jì)算鹽酸小檗堿含量, 取平均值, 見(jiàn)表2。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果(n=6)

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 在上述選定條件下, 經(jīng)HPLC法測(cè)定, 鹽酸小檗堿峰與樣品中其他組分色譜峰均可達(dá)基線分離, 且與其他相鄰色譜峰分離度>1.5；按鹽酸小檗堿峰計(jì)算, 理論板數(shù)在2000以上。同時(shí)測(cè)定缺黃連的陰性對(duì)照溶液, 其色譜中在鹽酸小檗堿對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置無(wú)峰, 說(shuō)明陰性無(wú)干擾。

3.2 本測(cè)定方法精密度良好, 具有較好的重復(fù)性和較高的加樣回收率?？勺鳛榭刂票局苿┵|(zhì)量的一種方法。由于中藥制劑成分復(fù)雜, 一種化學(xué)成分不能代表整個(gè)制劑, 如何用其他成分來(lái)控制本制劑質(zhì)量, 尚待進(jìn)一步研究。

[1]高學(xué)敏, 李慶業(yè).實(shí)用中成藥.北京：中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社,1991:683.

[2]全世建, 王紅丹, 劉彥鳳.交泰丸化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展.河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,22(4):83.

Content determination of berberine hydrochloride in Jiaotai enteric coated capsules by HPLC

CAO Chen, HUANG Kai-yan, LI Shan, et al. The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine, Changsha410007, China

ObjectiveTo establish a method for content determination of berberine hydrochloride in Jiaotai enteric coated capsules.MethodsHigh performance liquid chromatography (HPLC) was applied by chromatographic column as SHIMADZU VP-ODS150 mm×4.6 mm with mobile phase as acetonitrile -0.05 mol/ L potassium dihydrogen phosphate (25:75). The detection wavelength was345nm with1.0ml/min of flow rate and25℃ of column temperature.ResultsThe berberine hydrochloride showed a good linear correlation within the concentration of 0.03012～0.6024 μg, and its regress equation was Y=167557X+60945, R=0.9999. The average recovery rate was98.60％, RSD=1.51％.ConclusionThis method has the advantages of simple operation, good reproducibility and precision. It can be used for quality control of this preparation.

Jiaotai enteric coated capsules; Berberine hydrochloride; Content determination; High performance liquid chromatography

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.02.160

2014-10-24］

國(guó)家中醫(yī)藥管理局名老中醫(yī)藥專家傳承工作室建設(shè)項(xiàng)目

410007 湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院

劉紹貴