楊春華 杜榮花 張金文

抗磷脂綜合征是血清中持續(xù)性抗磷脂抗體或β2糖蛋白I陽(yáng)性引起臨床癥狀，且以性反復(fù)動(dòng)、靜脈血栓或習(xí)慣性流產(chǎn)為主要表現(xiàn)的綜合征。其病理表現(xiàn)為小葉間動(dòng)脈閉塞，纖維蛋白血栓，內(nèi)膜纖維增生，灶性皮質(zhì)萎縮假性腎小球和血栓性微血管?。?］。抗磷脂綜合征作為一種自身免疫疾病，其發(fā)病與血漿補(bǔ)體、自身抗體有一定關(guān)系［2，3］。王海波等［4］研究表明，白介素-6 (IL-6)、白介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子(TNF-α)等炎性因子表達(dá)參與了抗磷脂綜合征的發(fā)病。本研究對(duì)抗磷脂綜合征血漿補(bǔ)體、抗心磷脂抗體和血清炎性因子進(jìn)行檢測(cè)，觀察上述指標(biāo)在抗磷脂綜合征的發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年9月至2014年11月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院就診的抗磷脂綜合征患者32例，入選患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)分會(huì)制定的“抗磷脂綜合征診斷和治療指南”［5］中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，其中男11例，女21例;年齡16～72歲，平均年齡(44 ±11)歲;病程5～229個(gè)月，平均病程(68±42)個(gè)月;合并疾病:系統(tǒng)性紅斑狼瘡24例，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎3例，干燥綜合征2例，銀屑病2例，強(qiáng)直性脊柱炎1例; 27例發(fā)生血栓事件(發(fā)生腦梗死12例)，其中靜脈血栓15例，動(dòng)脈血栓7例，動(dòng)靜脈血栓3例，微血栓2例。選取同期在我院體檢的健康人30例作為對(duì)照組，其中男10例，女20例;年齡23～68歲，平均年齡(45±10)歲。本研究通過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。2組性別比、平均年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 入選與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 入選標(biāo)準(zhǔn):①患者符合“抗磷脂綜合征診斷和治療指南”中的診斷標(biāo)準(zhǔn);②患者意識(shí)清楚，能夠配合檢查;③患者或家屬知情同意，并簽署知情同意書(shū)。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn):①腫瘤患者;②嚴(yán)重肝、腎和心臟功能不全者;③精神疾病患者，不能配合檢查。

1.3 方法 使用真空采血管抽取受檢者清晨空腹周靜脈血5 ml，2 500 r/min，離心10 min，取血漿、血清備檢。

1.3.1 血漿補(bǔ)體檢測(cè):采用美國(guó)貝克庫(kù)曼爾特實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(蘇州)有限公司生產(chǎn)的C3、C4、C4d、C5b-9試劑盒，采用Elisa方法進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)首先將標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋，然后在酶標(biāo)板進(jìn)行加樣，使用封板膜封板37℃溫育30 min，同時(shí)將濃縮洗滌液進(jìn)行稀釋，揭掉封板膜，棄去液體甩干，每孔加入襲擊也靜置后棄去，重復(fù)5次，拍干后加入酶標(biāo)試劑，再次進(jìn)行溫育和洗滌，加入顯色劑，振蕩混勻后，避光顯色，然后加入終止液，在450 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光光度值，以標(biāo)準(zhǔn)誤濃度為橫坐標(biāo)，吸光光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算實(shí)際濃度。

1.3.2 血清抗心磷脂抗體檢測(cè):檢測(cè)患者IgA、IgG、IgM水平，檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海撫生實(shí)業(yè)有限公司，采用ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3.3 血漿炎性因子檢測(cè):檢測(cè)患者TNF-α、IL-6、白介素-1β(IL-1β)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)水平，檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海閎巨實(shí)業(yè)有限公司，采用ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，患者血漿補(bǔ)體、炎性因子均為正態(tài)分布的計(jì)量資料，以±s表示，采用t檢驗(yàn)，血清抗心磷脂抗體陽(yáng)性率為計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組血漿補(bǔ)體水平比較 抗磷脂綜合征組患者C3、C4水平低于對(duì)照組，而C4d和C5b-9水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 2組血漿補(bǔ)體水平比較 ±s

表1 2組血漿補(bǔ)體水平比較 ±s

注:與抗磷脂綜合征組比較，*P＜0.05

組別 C3(g/L) C4(g/L) C4d (μg/ml) C5b-9 (μg/ml)抗磷脂綜合征組(n=32)0.91±0.29 0.19±0.06 5.5±2.3 2 750±657對(duì)照組(n=30) 1.31±0.44*0.28±0.05*1.8±1.3* 711±325*

2.2 2組血清抗心磷脂抗體陽(yáng)性率比較 抗磷脂綜合征組IgA、IgG和IgM陽(yáng)性率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 2組血清抗心磷脂抗體陽(yáng)性率比較 例(%)

2.3 2組血漿炎性因子水平比較 抗磷脂綜合征組TNF-α和 IL-1β水平顯著高于對(duì)照組，而 IL-6和VEGF水平低于對(duì)照組，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

表3 2組血漿炎性因子水平比較 pg/ml，±s

表3 2組血漿炎性因子水平比較 pg/ml，±s

注:與抗磷脂綜合征組比較，*P＜0.05

組別 TNF-α IL-6 IL-1βVEGF抗磷脂綜合征組(n=32)29±6 1.89±0.26 5.3±2.3 67±15對(duì)照組(n=30) 23±3* 2.95±1.31* 2.1±1.4* 110±42*

3 討論

抗磷脂綜合征是一種自身免疫性疾病，其特點(diǎn)為抗磷脂抗體引起的血栓栓塞事件和(或)流產(chǎn)。Prinz等［6］研究表明，抗磷脂綜合征患者的3種人單克隆抗磷脂抗體與IgG組分可增加漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)Toll樣受體和單核細(xì)胞TLR8的mRNA表達(dá)。同時(shí)，它們也可誘導(dǎo)TLR7或TLR8從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)易位至內(nèi)體。王芳［2］對(duì)文獻(xiàn)資料整理發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)體系統(tǒng)的過(guò)度激活是抗磷脂綜合征患者發(fā)生流產(chǎn)和血栓的關(guān)鍵因素。孔祥民等［7］發(fā)現(xiàn)，抗β2GPⅠ-β2GPⅠ復(fù)合物能夠促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)，而β2GPⅠ是抗磷脂抗體的主要靶抗原［8］。本研究對(duì)抗磷脂綜合征血漿補(bǔ)體、抗心磷脂抗體和血清炎性因子進(jìn)行檢測(cè)，觀察上述指標(biāo)在抗磷脂綜合征的發(fā)病中的作用。

3.1 抗磷脂綜合征與血漿補(bǔ)體的關(guān)系 機(jī)體內(nèi)的補(bǔ)體可以輔助和補(bǔ)充特異性抗體，介導(dǎo)免疫溶菌、溶血作用，C3在補(bǔ)體系統(tǒng)活化過(guò)程中起連接作用，C4主要參與C3經(jīng)典激活途徑中C3轉(zhuǎn)化酶的形成，與免疫識(shí)別和維持免疫穩(wěn)定有關(guān)。C4d可以與細(xì)菌、免疫復(fù)合物等結(jié)合，促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬。C5b-9是一種末端效應(yīng)產(chǎn)物，可以促使多種細(xì)胞表達(dá)蛋白、產(chǎn)生炎性因子等。在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者體內(nèi)C3、C4水平降低，可能與補(bǔ)體系統(tǒng)過(guò)度激活，消耗大量補(bǔ)體有關(guān)［9］。本研究表明，抗磷脂綜合征組患者C3、C4水平低于對(duì)照組，而C4d和C5b-9水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C4d和C5b-9為補(bǔ)體降解產(chǎn)物，而上述指標(biāo)的升高說(shuō)明補(bǔ)體激活失控，研究發(fā)現(xiàn)，血栓形成與補(bǔ)體活化產(chǎn)物增多，沉積到血管內(nèi)皮細(xì)胞有關(guān)［10］。

3.2 抗磷脂綜合征與抗心磷脂抗體的關(guān)系 郭虹等［11］對(duì)反復(fù)流產(chǎn)的患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，抗心磷脂抗體陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。王喜春等［12］發(fā)現(xiàn)腦梗死患者抗心磷脂抗體陽(yáng)性率高于正常人群(P＜0.05)。上述研究表明，抗心磷脂抗體與流產(chǎn)和血栓形成有密切關(guān)系，其主要作用機(jī)制可能是(1)抗心磷脂抗體能與血小板和(或)血管內(nèi)皮細(xì)胞膜磷脂發(fā)生反應(yīng)，抑制前列環(huán)素的產(chǎn)生，同時(shí)損傷內(nèi)皮細(xì)胞后，使纖溶酶原激活物水平降低，血小板發(fā)生聚集，從而發(fā)生血栓;(2)抗心磷脂抗體可以使子宮PG12水平降低，胎盤(pán)發(fā)生梗塞，也可以損傷胎盤(pán)血管內(nèi)皮發(fā)生血管炎，導(dǎo)致胎兒發(fā)生宮內(nèi)窘迫或者死亡。本研究表明，抗磷脂綜合征組IgA、IgG和IgM陽(yáng)性率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3.3 抗磷脂綜合征與炎性因子的關(guān)系 張鵬等［13］對(duì)靜脈血栓栓塞患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，血栓患者TNF-α、IL-6水平與對(duì)照組比較，顯著升高(P＜0.05)，TNF-α、IL-6與凝血因子相互作用從而發(fā)生血栓。而王暉等［14］研究表明，反復(fù)流產(chǎn)的患者IL-6水平反而降低。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)VEGF在血栓溶解和血管再通中發(fā)揮積極作用，本研究中抗磷脂綜合征患者VEGF水平明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)。說(shuō)明抗磷脂綜合征患者發(fā)生血栓的幾率較大。

綜上所述，抗磷脂綜合征患者血漿補(bǔ)體、抗心磷脂抗體和血清炎性因子與正常人群比較，均有不同程度的改變，說(shuō)明血漿補(bǔ)體、抗心磷脂抗體和血清炎性因子可能參與了抗磷脂綜合征的發(fā)病過(guò)程。

1 張?jiān)闯?，楊清銳.抗磷脂綜合征的免疫病理機(jī)制.山東醫(yī)藥，2001，41:51-52.

2 王芳.補(bǔ)體激活在抗磷脂綜合征中的作用.中國(guó)醫(yī)療前沿，2010，5: 19.

3 張蜀斕，李永哲.抗磷脂抗體檢測(cè)的現(xiàn)狀及展望.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，37:564-566

4 王海波，周紅，謝鴻翔，等.抗β2GPI/β2GPI復(fù)合物激活THP-1細(xì)胞表達(dá)炎性相關(guān)因子.臨床檢驗(yàn)雜志，2012，30:347-350.

5 中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì).抗磷脂綜合征診斷和治療指南.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2011，15:407-410.

6 Prinz N，Clemens N，Strand D，et al.Antiphospholipid antibodies induce translocation of TLR7 and TLR8 to the endosome in human monocytes and plasmacytoid dendritic cells.Blood，2011，118:2322-2332.

7 孔祥民，周紅，謝鴻翔，等.Toll樣受體4在抗β2GPⅠ-β2GPⅠ復(fù)合物誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表達(dá)炎癥因子中的作用.臨床檢驗(yàn)雜志，2014，32:934-938.

8 張寅，劉湘源，鄧曉莉.β2糖蛋白I、抗β2GP I抗體與抗磷脂綜合征.中國(guó)臨床研究，2011，24:2-4.

9 樊春紅，楊鐵生，王琴.抗心磷脂抗體(ACA)、抗dsDNA抗體、尿蛋白、C3、C4聯(lián)合檢測(cè)與系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的臨床意義.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷，2008，12:783-786.

10 孟銀蘋(píng)，付蓉.補(bǔ)體活化與血栓性微血管病血栓形成關(guān)系的研究進(jìn)展.中華血液學(xué)雜志，2014，35:767-770.

11 郭虹，楊華，王維鵬.反復(fù)自然流產(chǎn)中封閉抗體、抗心磷脂抗體檢測(cè)的臨床意義.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34:773.

12 王喜春，馬沖.膽紅素、C反應(yīng)蛋白和抗心磷脂抗體與腦梗死關(guān)系的臨床思路探討.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2014，9:87-88.

13 張鵬，艾力曼·馬合木提，霍亞鳳.靜脈血栓栓塞患者炎性因子于凝血指標(biāo)的臨床意義及相關(guān)性.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，33:1405-1407.

14 王暉，余朝文，李博，等.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在兔急性后腔靜脈血栓形成中的表達(dá)及意義.山東醫(yī)藥，2013，53:29-30.