肖 琦，陽(yáng)文武，李柏群，張 欽，田 毅，陳 爽

（1.重慶市萬(wàn)州食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 404000； 2.重慶三峽中心醫(yī)院藥劑科，重慶 404000）

高效液相色譜法測(cè)定足光散中苦參堿含量

肖 琦1，陽(yáng)文武1，李柏群2，張 欽1，田 毅1，陳 爽1

（1.重慶市萬(wàn)州食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 404000； 2.重慶三峽中心醫(yī)院藥劑科，重慶 404000）

目的 建立測(cè)定足光散中苦參堿含量的高效液相色譜法。方法 采用迪馬 Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），以甲醇 -0.025 mol／L磷酸二氫鉀(7∶93）為流動(dòng)相，流速為0.8 mL／min，測(cè)定波長(zhǎng)為220 nm。結(jié)果 供試品溶液主峰的保留時(shí)間與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致，陰性對(duì)照無(wú)相應(yīng)的色譜峰出現(xiàn)。苦參堿質(zhì)量濃度在21.60～216.00 g／mL（r=0.999 9，n=3）范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好；平均回收率為98.00%（RSD=1.29%，n=6）。結(jié)論 該法準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于足光散中苦參堿含量的測(cè)定。

足光散；苦參堿；高效液相色譜法

足光散由水楊酸（18%）、苯甲酸（12%）、硼酸（40%）、苦參（20%）和滑石粉（10%）組方，具有清熱燥濕、殺蟲斂汗的功效，主要用于手足癬、汗臭癥的治療。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]采用滴定法測(cè)定苯甲酸、水楊酸和硼酸總含量，對(duì)處方中苦參只有鑒別，無(wú)單獨(dú)的含量測(cè)定。已有文獻(xiàn)報(bào)道[2-3]，采用高效液相色譜法測(cè)定其處方中苯甲酸、水楊酸的含量，但尚無(wú)苦參含量測(cè)定的報(bào)道。筆者利用高效液相色譜法對(duì)處方中苦參的有效成分苦參堿進(jìn)行含量測(cè)定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀（VWD檢測(cè)器）?？鄥A對(duì)照品（批號(hào)為110805-200508，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；陰性試驗(yàn)用苦參藥材為本所中藥室的標(biāo)本室提供，經(jīng)本所中藥師陽(yáng)文武鑒定，為豆科植物苦參，符合2010年版《中國(guó)藥典(一部)》規(guī)定；甲醇為色譜純；硼酸、苯甲酸、水楊酸、氨水、三氯甲烷、磷酸二氫鉀、磷酸為分析純；水為超純水；足光散（成都九芝堂金鼎藥業(yè)有限公司，批號(hào)為 150107；廣東一禾藥業(yè)有限公司，批號(hào)為1409106；武漢中聯(lián)集團(tuán)四藥藥業(yè)有限公司，批號(hào)為141120）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[4-9]

色譜柱：迪馬 Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.025 mol／L磷酸二氫鉀（取3.4 g磷酸二氫鉀溶解于1 000 mL水中，用磷酸調(diào) pH至3.0，7∶93）；流速：0.8 mL／min；柱溫：室溫；測(cè)定波長(zhǎng)：220 nm；進(jìn)樣量：5 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取苦參堿對(duì)照品0.010 80 g，置 50 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每 1 mL含 216.00 μg的對(duì)照品貯備溶液。取本品，研磨，混勻，精密稱取1.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入5%濃氨的三氯甲烷（取5 mL濃氨試液，加三氯甲烷至 100 mL）50 mL，密塞，搖勻，稱定質(zhì)量，超聲 30 min，放冷，加5%濃氨的三氯甲烷補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，再精密吸取25 mL濾液，蒸干，加甲醇使溶解并定量轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶中，搖勻，即得供試品溶液。按足光散處方及生產(chǎn)工藝制成缺苦參的陰性樣品，取陰性樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各5 μL，依法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取質(zhì)量濃度為216.00 μg／mL的苦參堿對(duì)照品儲(chǔ)備溶液 0.00，1.00，2.00，5.00 mL，置 10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，得標(biāo)準(zhǔn)曲線系列濃度的對(duì)照品溶液。吸取上述溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積（A）為橫坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（C）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程C=1.400 9 A-1.658 1（r=0.999 9，n=3）。結(jié)果表明，苦參堿質(zhì)量濃度在21.60～216.00 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一苦參堿對(duì)照品溶液5 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.87%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品（批號(hào)為150107）溶液，分別在制備的0，2，4，6，8，10 h時(shí)進(jìn)樣1次。結(jié)果苦參堿峰面積的 RSD為0.95%（n=6），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)（批號(hào)為150107）樣品6份，按供試品溶液制備方法操作，測(cè)定苦參堿含量。結(jié)果苦參堿平均含量為9.970 mg／g，RSD為0.99%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)為150107) 6份，各0.25 g，加入質(zhì)量濃度為216.00 μg／mL的苦參堿對(duì)照品 3 mL（3份），6 mL（3份）中，按2.2項(xiàng)下方法處理，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 苦參堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討論

對(duì)于色譜柱的選擇文獻(xiàn)，多采用氨基柱[10-13]，但因氨基柱不常用，故選擇了較為常見的C18柱。流動(dòng)相先后采用了甲醇-水（55∶45）、甲醇-水-三乙胺（105∶95∶0.05）、甲醇-0.1%磷酸水（55∶45），所得色譜效果均不理想，后采用甲醇-0.025 mol／L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)pH至3.0，7∶93），獲得了較好的色譜效果。

苦參堿的測(cè)定方法有高效液相色譜法[4-13]、薄層掃描法[14]等，本試驗(yàn)中選擇了常見的高效液相色譜法對(duì)足光散中苦參堿的含量進(jìn)行測(cè)定。同時(shí)，該方法的準(zhǔn)確性和重復(fù)性好，可為足光散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供參考。

[1]WS-10344（ZD-0344）2002-2012Z.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].

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Content Determination of Martine in Zuguang Powder By HPLC

Xiao Qi1，Yang Wenwu1，Li Baiqun2，Zhang Qin1，Tian Yi1，Chen Shuang1
(1.Chongqing Wanzhou Institute for Food and Durg Control，Chongqing，China 404000; 2.Depantment of Pharmacy Chong Qing Three Gorges Centre Hospital，Chongqing，China 404000)

Objective To establish a method for content determination of martine in Zuguang Powder by HPLC.Methods The Diamonsil C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)was used with the mobile phase of methanol-0.025 mol／L potassium dihydrogen phosphate(7∶93) at a flow rate of 0.8 mL／min，the detection wavelength was set at 220 nm.Results The test solution peak retention time and peak retention time of the reference solution was consistent with the negative control without the corresponding peaks.Martine was linear within 21.60-216.00 μg／mL（r=0.999 9，n=3），and the average recovery rate of martine was 98.00%（RSD=1.29%，n=6）. Conclusion The method is accurate and better repeatable，and can be used for the content determination of martine in Zuguang Powder.

Zuguang Powder；martine；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)17-0055-02

肖琦（1978-），男，碩士研究生，主管藥師，主要從事食品、藥品、保健食品和化妝品檢驗(yàn)工作，（電話）023-58152309（電子信箱）1600818606＠qq.com；李柏群（1971-），女，大學(xué)本科，副主任中藥師，研究方向?yàn)橹兴幣R床及中藥制劑研發(fā)，本文通訊作者，（電話）023-58103218（電子信箱）bqlicn＠163.com。

2015-03-17)