陳 義 綜述，黃 平審校

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院肝膽外科 400016）

肝細胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是世界范圍內(nèi)廣泛分布的排名第5位的最常見的惡性腫瘤。根據(jù)對“the Global Burden of Disease Study 2010”的解析，在全球范圍內(nèi)癌癥相關(guān)死亡的癌癥中，肝癌排名第2；根據(jù)1990～2010年中國健康狀況迅速改變的統(tǒng)計分析，在中國癌癥相關(guān)死亡的疾病中肝癌僅次于肺癌，排名第2。由于早期診斷困難，只有30%～40%的患者能獲得根治性治療［1］。許多研究表明，在肝細胞肝癌中，microRNA 通常以類似促癌基因和抑癌基因的方式執(zhí)行其生物學(xué)功能，參與腫瘤細胞的增殖、凋亡、腫瘤血管形成、浸潤和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為。

近幾年，學(xué)者通過研究發(fā)現(xiàn)，雖然microRNA 很容易降解，但在循環(huán)中卻能穩(wěn)定的表達。Chen等［2］研究證實，microRNA能在血清中穩(wěn)定表達，能抵制核糖核酸酶A 的降解，甚至在pH 為1或13的溶液中保持穩(wěn)定?；诖祟愌芯康陌l(fā)現(xiàn)，從2010年開始，國內(nèi)外學(xué)者對HCC患者循環(huán)中的microRNA 進行研究，取得了一定的成績，并為HCC 診斷開辟了新的研究方向。

1 HCC和microRNA

隨著現(xiàn)代癌癥研究的進展，越來越多的證據(jù)表明，microRNA 參與癌癥發(fā)生、發(fā)展的進程。多種microRNA 在HCC 的不同階段均有異常表達，并作為致癌基因或者抑癌基因參與HCC的多種生物學(xué)行為，包括HCC的發(fā)生、增殖、分化、浸潤、凋亡等諸多環(huán)節(jié)。到目前為止，很多研究都關(guān)注HCC 腫瘤組織與癌旁非腫瘤組織或者正常肝組織中microRNA 表達量的異常，并通過重組DNA 技術(shù)或者RNA 干擾技術(shù)來驗證microRNA 的靶基因及其對細胞生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)作用。研究最多的為miR-21、miR-122和miR-221等。

1.1 HCC中miR-21 調(diào)控機制和作用研究 幾乎在所有的HCC患者腫瘤組織中miR-21 表達上調(diào)［3-5］，證明該microRNA 的表達穩(wěn)定，這也是很多學(xué)者選擇對其研究的原因。Zhu等［3］研究指出，表達量增加的miR-21 抑制其靶基因PDCD4的表達，上調(diào)其下游信號通路關(guān)鍵分子磷酸化原癌基因c-Jun，基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）如MMP-2和MMP-9，促使癌細胞的轉(zhuǎn)移和浸潤。Bao等［4］發(fā)現(xiàn)miR-21抑制抑癌基因PTEN 和硫酸酯酶-1（hSulf-1）的表達，從而激活PI3 K-protein kinase B（AKT）／extracellular signal regulated kinase（ERK）通路和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），促進HCC 細胞的增殖和運動。Karakatsanis等［5］研究發(fā)現(xiàn)，miR-21 還與HCC預(yù)后相關(guān)。

1.2 HCC 中miR-122調(diào)控機制研究 miR-122一直被學(xué)者認為是肝特異性microRNA，占正常肝組織microRNA 表達量的70%［6］。miR-122是研究生物學(xué)標(biāo)記物的理想對象，所以，miR-122備受許多學(xué)者青睞。miR-122 在許多學(xué)者看來是作為抑癌基因存在的，因此，在HCC 組織中其表達量下降，事實上，現(xiàn)在的研究幾乎都支持miR-122在HCC 組織中穩(wěn)定地表達下調(diào)。Xu等［7］研究證明，miR-122在HCC 組織和肝癌細胞株中表達下調(diào)，提高miR-122的表達水平可抑制HCC 細胞的生長和促進其凋亡，具體的靶點為Wnt1／β-catenin通路。由于乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染是造成HCC的2大危險因素，所以，有學(xué)者探查miR-122在HBV 或者HCV 感染的情況下HCC形成過程中的作用。Li等［8］研究指出，HBV mRNA 綁定在miR-122互補區(qū)域，隔絕miR-122，使其靶點PBF［pituitary tumor-transforming gene 1（PTTG1）binding factor］基因表達上調(diào)，促進HCC 細胞的增殖和浸潤。Zhao等［9］研究發(fā)現(xiàn)，HCV RNA 能綁定microRNA-122并形成Ago2-HCV-miR-122復(fù)合物，穩(wěn)定HCV 基因并增強HCV 的復(fù)制。由于HCV RNA 的綁定作用，miR-122的靶點——癌基因cyclin G1（CCNG1）被釋放，促進HCC的形成。

1.3 HCC 中miR-221調(diào)控機制研究 miR-221在人體多種癌癥中表達量增加，而且穩(wěn)定性好，如乳腺癌、結(jié)直腸癌、膠質(zhì)母細胞瘤、胰腺癌、膀胱癌、胃癌及甲狀腺癌等［10-11］。在HCC組織樣本中，約70%的樣本呈現(xiàn)出高表達的情況。Rong等［12］通過體外細胞試驗研究發(fā)現(xiàn)，阻滯miR-221，能抑制HCC 細胞生長，使其停留在G1／S期，促使其凋亡。相似的結(jié)果同樣被Chen等［13］證實。Rong等［12］同時證實miR-221在有轉(zhuǎn)移的樣本中表達量更高，并提示miR-221與較短的復(fù)發(fā)期相關(guān)，其靶基因為CDKN1C／P57和CDKN1B／P27。

2 循環(huán)microRNA 作為HCC腫瘤標(biāo)記物的研究進展

選取HCC 組織標(biāo)本作為研究對象，不僅對HCC 中microRNA 表達量的差異和作用機制的研究有意義，而且對HCC預(yù)后的判斷也有意義。然而，對HCC 的術(shù)前診斷及手術(shù)后效果的術(shù)前預(yù)判價值不大。

現(xiàn)代HCC 診斷標(biāo)記物的缺陷及對HCC 早期診斷的不足，迫切需要新的HCC 標(biāo)記物問世。microRNA 的出現(xiàn)及其與HCC關(guān)系為尋找新的靈敏度和特異度都高的腫瘤標(biāo)記物帶來了希望。

從2008年起，許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)，microRNA 能穩(wěn)定地出現(xiàn)在循環(huán)中，2010年開始就有關(guān)于HCC 患者循環(huán)microRNA 作為腫瘤標(biāo)記物的報告，從此開啟了循環(huán)microRNA 對HCC 診斷價值的論證之路。

2.1 單個microRNA 的診斷價值研究 （1）表達量減少的循環(huán)microRNA。Luo等［14］研究表明，miR-122a在HCC 患者與健康人群的血清中表達量有差別，且在HCC 患者中表達量下降，經(jīng)過驗證，曲線下面積（AUC）為0.707，靈敏度為70.6%，特異度為67.1%，與AFP比較沒有優(yōu)勢，但與HCC 的危險因素（如性別、吸煙史、酗酒、HCC 家族史及HBV 感染）相關(guān)。（2）表達量增加的循環(huán)microRNA。①有潛在價值作為肝病標(biāo)記物的循環(huán)microRNA。Qi等［15］研究指出，miR-122 在區(qū)分HCC和健康人群時，AUC為0.869。取值0.475時，靈敏度和特異度分別為81.6%和83.3%。但不能區(qū)別HCC 和HBV感染患者，故只有可能作為肝病診斷的標(biāo)記物。Gui等［16］用HCC、肝硬化、慢性乙型肝炎、胃癌患者和健康人群血清進行試驗，篩查出miR-885-5p具有肝病特異性，臨界值為1.06時，區(qū)別肝病和控制組，AUC 達0.904，靈敏度為90.5%，特異度為79.2%。建議可把miR-885-5p作為肝?。ò℉CC）有潛力的標(biāo)記物，但并不能把HCC 從肝病中區(qū)別出來。②有潛在價值區(qū)別HCC 和肝病的循環(huán)microRNA，Tomimaru等［17］發(fā)現(xiàn)，miR-21單獨作為標(biāo)記物，區(qū)分HCC 和健康人群，AUC 為0.953，靈敏度為87.3%，特異度為92%；區(qū)分HCC 和慢性肝炎，AUC 為0.773，靈敏度為61.1%，特異度為83.3%。Li等［18］指出，MiR-18a在區(qū)分HBV 相關(guān)HCC組和健康控制組，AUC為0.881，靈敏度為86.1%，特異度為75.0%；在區(qū)分HBV 相 關(guān)HCC 組 和 肝 硬 化 組，AUC 為0.775，靈 敏 度 為77.2%，特異度為70.0%。以上一系列研究可以看出，單個microRNA 在區(qū)別HCC患者和健康人群時，診斷價值高，但在區(qū)別HCC和肝病患者時，診斷價值有限。

2.2 多個microRNA 及microRNA 與其他腫瘤標(biāo)記物聯(lián)合的診斷價值研究 基于單個microRNA 在區(qū)別HCC 和肝病普遍都存在靈敏度或者特異度不高的問題。許多學(xué)者進行多個microRNA 聯(lián)合診斷，或者與傳統(tǒng)HCC 腫瘤標(biāo)記物進行聯(lián)合診斷的研究，試圖找到更加理想的診斷方法。

2.2.1 microRNA 與傳統(tǒng)HCC 腫瘤標(biāo)記物的聯(lián)合診斷價值研究 由于miR-21在區(qū)別HCC和肝病方面存在的不足，Tomimaru等［17］進一步研究發(fā)現(xiàn)，若miR-21與AFP 聯(lián)合，在區(qū)別HCC和對照組時，AUC 為0.971，靈敏度和特異度分別為92.9%和90.0%。Qu等［19］研究表明，miR-16和miR-199a在區(qū)別HCC和慢性肝病方面，比傳統(tǒng)的標(biāo)記物AFP、AFP-L3%和DCP 的靈敏度高，miR-16、AFP、AFP-L3%和DCP 的聯(lián)合靈敏度可達92.4%，特異度為78.5%，并建議把miR-16作為傳統(tǒng)標(biāo)記物的補充。

2.2.2 多個microRNA 聯(lián)合的診斷價值研究 Liu等［20］指出，聯(lián)合miR-130b和miR-15b進行臨床驗證，鑒別HCC，AUC為0.98，靈敏度為98.2%，特異度為91.5%。即使AFP＜20 ng／mL，靈敏度也達96.7%。在AFP 不能診斷的HCC 早期階段，同樣能鑒別出HCC。Li等［21］選取HBV 攜帶者、慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、HBV 陽性HCC 患者及健康人群血清進行試驗，試圖找到診斷HBV 感染和HBV 陽性HCC的標(biāo)記物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-375、miR-92a、miR-10a、miR-223、miR-423、miR-23b／a、miR-342-3p、miR-99a、miR-122a、miR-125b、miR-150和let-7c在HBV 感染者血清中表達量增多，而且還能將HBV 陽性HCC樣本從HBV 樣本中區(qū)分。診斷價值試驗證明，聯(lián)合miR-23b、miR-423、miR-375、miR-23a和miR-342-3p，區(qū)別HBV 陽 性HCC 組 和 控 制 組，AUC 達99.9%。聯(lián) 合miR-10a和miR-125b能將HBV 陽性HCC 從HBV 感染組中區(qū)分出，AUC 為（99.2±0.6）%，靈敏度為98.5%；特異度為98.5%。Zhou等［1］研究指出，miR-122、miR-192、miR-21、miR-223、miR-26a、miR-27a和miR-801聯(lián)合，在AFP＜400ng／mL組，其AUC 為0.879（95%CI為0.839～0.912；靈 敏 度 為77.7%，特異度為84.5%）；在AFP＞400ng／mL 組，AUC 為0.910（95%CI為0.867～0.942，靈敏度為87.7%，特異度為83.5%）。區(qū)分HCC組和慢性乙型肝炎組，AUC 為0.842，靈敏度為79.1%，特異度為76.4%；區(qū)分HCC 組與肝硬化組，AUC為0.884，靈敏度為75%，特異度為91.1%。表現(xiàn)出了比傳統(tǒng)標(biāo)記物更好的診斷價值。

2.3 尿液中循環(huán)microRNA 診斷價值的研究 為了尋求更加簡便、無創(chuàng)的診斷方法，有學(xué)者試圖通過尿液尋找HCC 腫瘤標(biāo)記物。因為HCV 感染是HCC 形成的危險因數(shù)之一，有研究［22-25］選取HCV 陽性HCC、慢性HCV 感染患者和健康人群的尿液進行篩查，將HCV 陽性HCC患者從HCV 感染患者中區(qū)分出，miR-618敏感度為64%，特異度為68.0%；miR-650敏感度為72.0%，特異度為58.0%。雖然研究者在尿液中并沒有發(fā)現(xiàn)理想的腫瘤標(biāo)記物，但其擴展了循環(huán)microRNA 研究的范疇，為進一步的研究樹立了榜樣。上述研究相關(guān)數(shù)據(jù)見表1、表2。

表1 HCC中循環(huán)microRNA 表達量改變

表2 循環(huán)microRNA 及其聯(lián)合對HCC的診斷價值

續(xù)表2 循環(huán)microRNA及其聯(lián)合對HCC的診斷價值

3 展 望

現(xiàn)有HCC腫瘤標(biāo)記物特異度和靈敏度的不足，促使對理想HCC特異性腫瘤標(biāo)記物的尋找。理想的腫瘤標(biāo)記物應(yīng)該具備2大特性，即靈敏度高、特異度高。從表2可見，有的microRNA 顯示出了很好的特異度及靈敏度，如miR-130b、miR-21、miR-122。但實驗仍有不足之處，如miR-130b在區(qū)分HCC患者和健康人群時，ROC 曲線下面積為0.913，靈敏度為87.7%，特異度為81.4%，似乎已經(jīng)比傳統(tǒng)的AFP、DCP 等標(biāo)記物好。但沒有關(guān)于區(qū)分HCC 和HBV 感染、肝硬化及HCV感染的研究。這表明，現(xiàn)在研究認為很有希望成為理想的HCC腫瘤標(biāo)記物的microRNA，從實驗到臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)變，仍有許多工作要做。怎樣篩選最佳microRNA 及其組合，并進行科學(xué)的驗證，是需要解決的問題。

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