羅效梅，譚 可，廖 涌，熊玉霞，譚 茜，曹 均，王燕妮

（武警重慶總隊醫(yī)院檢驗科，重慶400061）

結(jié)核病每年感染人數(shù)高達（800～1 000）萬，并有近300萬人因此死亡［1］。2010年中國結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查結(jié)果顯示，結(jié)核病年發(fā)病患者約130萬，占全球發(fā)病人數(shù)的14.3%，居全球第2位［2］。結(jié)核病的早期診斷對控制結(jié)核疫情至關(guān)重要。近年來，結(jié)核感染的實驗室診斷不斷取得進展，尤以γ-干擾素（interferon-γ，IFN-γ）釋 放 試 驗（interferon gamma release assay，IGRA）應(yīng)用最為廣泛。目前，國內(nèi)外已有使用IGRA 原理的試劑盒應(yīng)用于臨床［3-4］，基本原理是通過全血培養(yǎng)，應(yīng)用結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激人體T 細胞，檢測結(jié)核感染后T 細胞分泌的特異性細胞因子——IFN-γ來診斷是否存在結(jié)核感染，其對結(jié)核病的診斷具有良好的特異性和敏感度。近年來，有文獻報道采用結(jié)核分枝桿菌特異性抗原也可誘導(dǎo)γ-干擾素誘導(dǎo)蛋白10（γ-interferon-inducible protein 10，IP-10）在活動性肺結(jié)核患者體內(nèi)的高水平表達，與IFN-γ相比，IP-10是否具有較好的特異度和敏感度，各家報道不一［4-5］。本研究應(yīng)用結(jié)核特異性抗原早期分泌性靶抗原6（early secretory antigenic target-6，ESAT-6）和培養(yǎng)液蛋白10（culture filtrate protein 10，CFP10）體外刺激活動性肺結(jié)核病組、非結(jié)核呼吸疾病組及健康對照組全血后，經(jīng)過全血培養(yǎng)，檢測3組人群IP-10和IFN-γ的釋放水平，并使用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）分析二者對活動性肺結(jié)核的診斷效能，研究外周血IP-10釋放試驗對活動性肺結(jié)核的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2011年1月至2012年6月收治的活動性肺結(jié)核病初診患者66 例，診斷標準為2008年修訂的《肺結(jié)核診斷標準》。其中，男39例，女27例；年齡14～83歲，平均（39.6±19）歲。排除標準：自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病、腫瘤性疾病、過敏性疾病、1個月內(nèi)患過其他急慢性感染性疾病、1個月內(nèi)服用過糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑、既往有重大手術(shù)史或近期有外傷史者。選擇同期肺炎、肺癌等其他非結(jié)核肺部疾病住院患者為非結(jié)核肺部疾病組40例患者，其中，男27例，女13例；年齡18～76 歲，平均（43.2±19.6）歲。排除標準：自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病、過敏性疾病、1個月內(nèi)服用過糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑、既往有重大手術(shù)史或近期有外傷史者。對照組40例，來源于本院健康體檢者。其中，男22例，女18例；年齡16～50歲，平均（34.7±9.2）歲。各項常規(guī)檢查均正常，并排除其他器質(zhì)性病變者。

1.2 試劑與儀器 CFP10、ESAT6 蛋白：北京熱景生物有限公司；植物血凝素（PHA）：美國Sigma公司；γ-IFN 和IP-10測定試劑盒：美國BD 公司；酶標檢測儀：深圳雷杜公司產(chǎn)品。

1.3 方法 采集住院患者（住院48h內(nèi)）、健康對照者肝素抗凝血，血量不低于4mL，外周血IFN-γ和IP-10釋放試驗采用參考文獻［6-7］的方法：每培養(yǎng)管加入全血1mL，其中，1管加入PHA 5μg／L，1管ESAT-6和CFP10 10μg／L，1管作為陰性對照，37 ℃，5%CO2培養(yǎng)22～24h，收集上清液-80 ℃保存，嚴格按照說明書測定IFN-γ和IP-10的水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析。多組數(shù)據(jù)間比較采用方差分析，兩組數(shù)據(jù)均值比較采用t檢驗。使用ROC曲線比較分析比較診斷性能，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 活動性肺結(jié)核病組、非結(jié)核呼吸疾病組、健康對照組IP-10和IFN-γ釋放水平 3組人群IP-10和IFN-γ釋放水平見表1。經(jīng)過方差分析，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。兩兩比較，活動性肺結(jié)核病組IP-10和IFN-γ釋放水平顯著高于非結(jié)核呼吸疾病組（P＜0.01）和健康對照組（P＜0.01），健康對照組與非結(jié)核呼吸疾病組組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 3組人群IP-10和IFN-γ釋放水平 比較（±s，pg／mL）

表1 3組人群IP-10和IFN-γ釋放水平 比較（±s，pg／mL）

組別 n IP-10 IFN-γ 66 146.0±167.1 87.2±70.3非結(jié)核呼吸疾病組 40 26.6±9.7 33.3±15.7健康對照組活動性肺結(jié)核病組40 24.2±9.7 30.5±19.5

經(jīng)過t檢驗，活動性肺結(jié)核組，IP-10和IFN-γ釋放水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），IP-10 釋放水平顯著高于IFN-γ。

2.2 IP-10和IFN-γ釋放水平對活動性結(jié)核病的ROC分析 以診斷結(jié)果作為金標準，分析IP-10和IFN-γ釋放水平對活動性結(jié)核病的診斷效率，見圖1。IP-10ROC曲線下面積（the area under the curve，AUC）為0.915（95%CI：0.872～0.958，標準誤：0.022），診 斷 界 值（cut-off）為41.1pg／mL，敏 感 度 為69.2%，特異度為91.2%；IFN-γROC AUC為0.872（95%CI：0.816～0.928，標準誤：0.028），cut-off值為56.8pg／mL 時，敏感度為65.2%，特異度為92.5%。經(jīng)過Z 檢驗，二者ROC AUC比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），二者對活性肺結(jié)核診斷效率無顯著性差異。

圖1 IP-10和IFN-γ釋放水平對活動性結(jié)核病的ROC分析

3 討 論

IP-10又名CXCL10，是由IFN-γ和（或）脂多糖（LPS）所誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種細胞因子，屬CXC 類趨化因子。本研究結(jié)果顯示，活動性肺結(jié)核組全血IP-10釋放水平顯著高于非結(jié)核肺部疾病組和健康對照組，IP-10釋放水平高于IFN-γ，說明全血結(jié)核特異性IP-10釋放水平可用于活動性結(jié)核的診斷，其靈敏度高于IFN-γ，與文獻報道結(jié)果一致。但在IP-10釋放水平上，本研究較國外文獻［5，8］偏低，與王瑩等［6］的研究結(jié)果相似。在已經(jīng)發(fā)表的文獻中，不同研究之間IP-10 的測定結(jié)果差異較大［7-8］，造成差異的原因尚需要進一步研究。有研究顯示，不同的IGRA 試劑盒即QFT-G 和萬泰間，IFN-γ診斷界值有所差異，推斷這種差異的原因可能與下列因素相關(guān)：（1）不同試劑盒間的分析變異；（2）培養(yǎng)方法的差異，誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-γ的結(jié)核特異性抗原有所差異；（3）檢測人群不同。不同文獻間IP-10的差異是否也是相同的原因需要進一步論證。IP-10在國內(nèi)的研究起步較晚，針對不同人群中診斷結(jié)核病的研究資料較少，至今尚未建立診斷結(jié)核病的臨界值及標準化的檢測體系，因此，更需要建立標準的檢測體系和進行大規(guī)模的臨床研究。

ROC曲線分析由于不受患病率和診斷閾值的影響，可對2個診斷試驗的準確度進行綜合比較，因而成為目前公認的診斷試驗最佳評價指標。ROC AUC 可以反映診斷試驗的價值大小，一般認為AUC在0.7～0.9，診斷價值中等，0.9以上診斷價值較高［9-10］。本研究中IP-10診斷活動性結(jié)核病ROC AUC大于0.9，提示IP-10對活動性肺結(jié)核具有較好的診斷效率，與相關(guān)文獻報道一致［9］。就目前的研究而言，均認為IP-10對活動性肺結(jié)核的診斷敏感性較高，但特異度方面不同研究［9］之間卻有較大差異。本研究結(jié)果顯示，IP-10 特異度較高，與王瑩等［7］的研究結(jié)果類似。但是，高結(jié)核病流行區(qū)（如印度等），Syed等［5］的研究特異度卻較低。這種差異可能是由于人群的不同及選取的陰性對照不同所引起的。印度與中國均為結(jié)核病高發(fā)地區(qū)，人群中潛伏性結(jié)核數(shù)量較高［11］，但潛伏性結(jié)核病的診斷缺乏“金標準”，從而最終影響到對照人群的選取，從而造成了診斷特異度的差異。

對于IFN-γ和IP-10診斷活動性結(jié)核病的效率，不同的研究其研究結(jié)果不同。本研究結(jié)果顯示二者對活動性肺結(jié)核的診斷效率上并無顯著性差異，與Wang等［8］的研究結(jié)果相似，但有研究表明IP-10對活動性肺結(jié)核患者診斷效率更高［2-5］。造成這種差異的原因是否與下列因素有關(guān)，需要進一步研究，（1）測定方法：目前，IGRA 實驗所用的刺激抗原及檢測IFN-γ、IP-10的方法都有所不同，判斷陽性的標準也不一樣；（2）研究人群：本研究與Wang等［8］的研究主要針對于成年人，且排除了免疫抑制人群，而有文獻［12］認為IP-10在HIV 等免疫抑制人群以及兒童中，其效能好于IFN-γ；（3）關(guān)于IP-10的診斷價值，文獻報道其主要表現(xiàn)在對潛伏性結(jié)核病的診斷效能好于活動性結(jié)核病［13］，但潛伏性結(jié)核病和活動性結(jié)核病的診斷目前尚無金標準；（4）本研究的數(shù)據(jù)較少，尚需要擴大數(shù)據(jù)研究。因此，IP-10能否用于臨床，其診斷效能是否優(yōu)于IFN-γ，還需大量的臨床研究證明。

［1］ 全國第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查技術(shù)指導(dǎo)組等.2010年全國第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報告［J］.中國防癆雜志，2012，34（8）：485-508.

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