駱志紅,楊華英,孫冬霞,孔衛(wèi)平

(　1.滄州河間張茜榮診所,河北 滄州 062450;2.邯鄲市中醫(yī)院婦科，河北 邯鄲 056001；

3.邯鄲市婦幼保健院病理科，河北 邯鄲 056002)

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年輕宮頸鱗癌組織中微血管形成及c-Myc和COX-2表達(dá)的臨床病理研究

駱志紅1,楊華英2※,孫冬霞3,孔衛(wèi)平3

(1.滄州河間張茜榮診所,河北 滄州 062450;2.邯鄲市中醫(yī)院婦科，河北 邯鄲 056001；

3.邯鄲市婦幼保健院病理科，河北 邯鄲 056002)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.05.055

宮頸鱗癌(squamous carcinoma of cervix,SCC)是僅次于乳腺癌的第二大危害女性健康的腫瘤[1]，宮頸細(xì)胞學(xué)篩查的普遍應(yīng)用使SCC得以早期發(fā)現(xiàn)和治療，其發(fā)病率和病死率有所下降，隨著當(dāng)今社會(huì)性開放程度加劇，SCC發(fā)病年齡有年輕化趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅年輕女性的健康，對(duì)年輕化SCC應(yīng)引起社會(huì)警惕。針對(duì)SCC年輕患者，其術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等仍是治療的難題，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，人們認(rèn)識(shí)到腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移與基因異常有密切關(guān)系，可以認(rèn)為腫瘤就是基因的疾病。本研究采用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(streptavidin-perosidase，SP)法檢測(cè)40例SCC中原癌基因(c-Myc)和環(huán)加氧酶2(cyclo-oxygenase-2,COX-2)表達(dá)及微血管密度(microvessel density,MVD)值情況，分析并探討兩者在其發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的作用,為臨床治療提供幫助。

1材料與方法

1.1材料將2007年1月至2011年12月邯鄲市婦幼保健院和邯鄲市中醫(yī)院手術(shù)切除的SCC組織標(biāo)本398份中選取40例作為SCC組，患者年齡20~25歲，平均(29.5±1.5)歲；術(shù)前均未行放、化療及激素治療。病理分期為Ⅰ期24例、Ⅱ期16例；腫瘤組織為高分化19例、中分化12例、低分化9例；有淋巴轉(zhuǎn)移18例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。同時(shí)選取門診就診并行宮頸錐形切除術(shù)的宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)標(biāo)本31份，作為CIN組，患者年齡20~25歲，平均(31.4±1.7)歲。另選因子宮肌瘤或子宮脫垂而行手術(shù)切除子宮的正常宮頸組織(normal cervical endotheliment,NCE)標(biāo)本10份作為NCE組，患者年齡20~25歲，平均(33.0±1.6)歲。

1.2c-Myc和COX-2表達(dá)檢測(cè)采用SP免疫組織化學(xué)法，按試劑盒說明書操作，取已知乳腺癌組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。常規(guī)免疫組織化學(xué)SP試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20120708996)，鼠抗人c-Myc單克隆抗體和鼠抗人COX-2單克隆抗體均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。每張切片均隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(×400)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為(-)，5%～25%為(+)，>25%～50%為(++)，>50%為(+++)。以+～+++為陽(yáng)性表達(dá)。MVD值(CD34標(biāo)記)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn):按照Wei-dner等[1]的評(píng)判方法，在低倍(×100)視野下找到癌組織間質(zhì)微血管密集部位，換到高倍(×400)視野下計(jì)數(shù)5個(gè)視野的微血管數(shù)，取其平均值為MVD值。

2結(jié)果

2.1c-Myc和COX-2的表達(dá)及MVD的變化3組中c-Myc與COX-2的陽(yáng)性表達(dá)物質(zhì)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒，見圖1、圖2(封三)。SCC組的c-Myc和COX-2表達(dá)高于CIN組和NCE組，CIN組COX-2的表達(dá)高于NCE組(P<0.05)；SCC組MVD高于CIN組和NCE組(P<0.05)。見表1。

表1　各組c-Myc、COX-2和MVD比較

c-Myc：源癌基因；COX-2：環(huán)加氧酶2；MVP：微血管密度；a與NCE組比較，P<0.05；b與CIN組比較，P<0.05；△：χ2值，*：F值

2.2c-Myc和COX-2陽(yáng)性表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的表達(dá)情況在宮頸癌組織中，c-Myc的陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)分化程度和是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，隨著組織異型程度增高，分化水平降低，c-Myc陽(yáng)性表達(dá)越強(qiáng)。COX-2陽(yáng)性表達(dá)與宮頸癌臨床病理分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，亦隨著臨床病理分期的增高和伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，COX-2陽(yáng)性表達(dá)也增強(qiáng)，見表2。

表2　c-Myc和COX-2陽(yáng)性表達(dá)與宮頸癌

c-Myc：原癌基因；COX-2：環(huán)加氧酶2

2.3SCC組中c-Myc蛋白陽(yáng)性表達(dá)組與陰性表達(dá)組MVD的差異SCC組中c-Myc蛋白陰性表達(dá)的MVD值為13.27±5.43，低于c-Myc蛋白陽(yáng)性表達(dá)的MVD值為28.46±9.73，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.994，P<0.01)。

2.4SCC組中COX-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)組與陰性表達(dá)組MVD的差異SCC組中COX-2蛋白陰性表達(dá)的MVD值為16.26±7.37，低于COX-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)的MVD值為37.43±9.47，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.672，P<0.01)。

2.5COX-2和c-Myc在SCC中相關(guān)性分析在SCC組中，COX-2和c-Myc陽(yáng)性表達(dá)呈顯著正相關(guān)(χ2=3.350,P=0.067,r=0.345，P=0.029)，見表3。

表3　COX-2和c-Myc在SCC中相關(guān)性分析　(例)

COX-2：環(huán)加氧酶2;c-Myc：原癌基因；SCC:宮頸鱗癌

3討論

宮頸癌作為最常見的婦科惡性腫瘤之一，危害女性患者的身心健康，有資料顯示宮頸癌患者已出現(xiàn)年輕化的趨勢(shì)[2]，其原因可能與性生活開始年齡提前、年輕女性吸煙者增多有關(guān)[3]。SCC占宮頸癌的80%～85%，本研究將20~35歲的年輕SCC患者作為研究對(duì)象，通過檢測(cè)其組織內(nèi)c-Myc和COX-2的表達(dá)情況及MVD，進(jìn)行分析研究。

c-Myc是1977年被發(fā)現(xiàn)的一種具有惡性轉(zhuǎn)化作用的癌基因，這種基因蛋白在細(xì)胞的增殖分化和細(xì)胞凋亡中起重要調(diào)控作用[4]，這些調(diào)控作用主要是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期G1～S期來完成的，在惡性腫瘤組織中檢測(cè)c-Myc的表達(dá)水平明顯升高，促進(jìn)G1期快速進(jìn)入S期，引起細(xì)胞增殖、惡性轉(zhuǎn)化。另外通過對(duì)小鼠研究發(fā)現(xiàn)c-Myc不僅參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和細(xì)胞的分化等正常生理活動(dòng)，可引起組織過早地形成血管，并且有c-Myc活化的細(xì)胞在惡變成癌時(shí)，能更早形成血管及發(fā)生轉(zhuǎn)移[5]。許多研究表明，在大腸癌、乳腺癌、小細(xì)胞肺癌[6-8]等能檢測(cè)到c-Myc表達(dá)增加、失調(diào)，并且通常與癌腫的侵襲性有著密切相關(guān)。相關(guān)研究證實(shí)，在SCC組織中c-Myc蛋白及信使RNA水平過度表達(dá)[9]，但是在國(guó)內(nèi)c-Myc在年輕SCC組織中的報(bào)道研究少見，本研究重點(diǎn)關(guān)注c-Myc在年輕SCC組織中表達(dá)情況及MVD，研究表明癌基因C-Myc在NCE、CIN和SCC中的表達(dá)情況隨著病情的進(jìn)展而升高，c-Myc在年輕SCC組織中的表達(dá)隨組織學(xué)分化程度增高，表達(dá)率增高，與組織學(xué)分化程度和是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性, 并且c-Myc表達(dá)陽(yáng)性在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的MVD顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)，隨著SCC分化程度的改變MVD也明顯不同(P<0.05)，說明c-Myc在SCC發(fā)展過程中表達(dá)逐漸增高，破壞宮頸組織的基膜，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)，MVD值增高，新生大量微血管，為腫瘤細(xì)胞提供養(yǎng)分，參與腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移,證實(shí)c-Myc蛋白的高表達(dá)可以繼續(xù)促使腫瘤進(jìn)一步發(fā)展。

作為限速酶的一種COX廣泛存在于人體的各種組織細(xì)胞中，COX常見的異構(gòu)酶包括COX-1和COX-2，其中COX-2在致瘤因素的刺激作用下可以表達(dá)，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，COX-2在大多數(shù)人類腫瘤組織細(xì)胞中明顯表達(dá)上調(diào)，通過刺激腫瘤細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)、抑制細(xì)胞凋亡、增加腫瘤細(xì)胞侵襲力在腫瘤組織中發(fā)揮作用[10]。另外有研究發(fā)現(xiàn)，COX-2對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)有上調(diào)作用，有可能促進(jìn)腫瘤組織生長(zhǎng)和腫瘤血管的形成[11]。此外，本研究結(jié)果顯示，從NCE組、CIN組、SCC組， COX-2蛋白表達(dá)逐漸增強(qiáng)(P<0.05)。在年輕SCC組中COX-2蛋白的表達(dá)與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，提示COX-2蛋白高表達(dá)可以促使年輕SCC進(jìn)展，發(fā)生轉(zhuǎn)移，其作用機(jī)制可能通過COX-2蛋白調(diào)節(jié)促進(jìn)增殖、抑制凋亡和促進(jìn)微血管形成等方面參與腫瘤轉(zhuǎn)移的各個(gè)環(huán)節(jié)。

對(duì)于c-Myc和COX-2在年輕SCC組織中的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，兩者呈明顯正相關(guān)(P<0.05)，c-Myc作為Wnt通路中β聯(lián)蛋白下游的靶基因?qū)δ[瘤細(xì)胞增殖分化和凋亡進(jìn)行調(diào)節(jié)，COX-2也可以通過β聯(lián)蛋白調(diào)節(jié)表達(dá)[12]，兩者共同作用于細(xì)胞周期，說明在細(xì)胞的增殖、分化及凋亡方面存在共同作用?？傊?0例年輕SCC組中c-Myc和COX-2處于過表達(dá)狀態(tài)，通過檢測(cè)兩者的表達(dá)情況有助于年輕女性SCC的診斷及病情判斷提供一定參考依據(jù)，但由于本次研究標(biāo)本量不足，以上結(jié)論尚需要進(jìn)一步擴(kuò)大標(biāo)本量進(jìn)行驗(yàn)證。

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摘要：目的研究原癌基因(c-Myc)和環(huán)加氧酶2(COX-2)在宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(CIN)和宮頸鱗癌(SCC)中的表達(dá)及與微血管密度(MVD)的相關(guān)性，探討c-Myc和COX-2在SCC發(fā)生、發(fā)展中的相互關(guān)系及其表達(dá)與臨床病理聯(lián)系。方法選擇2007年1月至2011年12月邯鄲市婦幼保健院和邯鄲市中醫(yī)院手術(shù)切除的SCC組織標(biāo)本40份、CIN標(biāo)本31份，正常宮頸組織(NCE)10份，采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)各組c-Myc和COX-2的表達(dá)情況和微血管密度(MVD)(CD34標(biāo)記)。分析兩者在SCC組中的陽(yáng)性表達(dá)情況及與腫瘤分期早晚、病理分型高低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理指標(biāo)之間的相互關(guān)系。結(jié)果c-Myc在SCC組中的陰性表達(dá)率為62.5%(25/40),顯著高于CIN組和NCE組(P<0.01),在SCC組中c-Myc的表達(dá)與分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.01)。在SCC組中，COX-2陽(yáng)性表達(dá)率為67.5%(27/40),顯著高于CIN組和NCE組(P<0.01),COX-2的表達(dá)與SCC的臨床病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.01)。相關(guān)性分析表明兩者在SCC組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，并且兩者在宮頸癌血管生成中可能具有協(xié)同作用。結(jié)論c-Myc和COX-2在年輕SCC發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，c-Myc和COX-2上調(diào)表達(dá)可作為SCC預(yù)后的判斷指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：子宮內(nèi)膜腫瘤；原癌基因蛋白；環(huán)加氧酶2蛋白；微血管密度；免疫組織化學(xué)

Study on the Expression of c-Myc and COX-2 in Cervix Neoplasms of Young Women and Their Correlation with the Formation of MicrovesselsLUOZhi-hong1,YANGHua-ying2,SUNDong-xia3,KONGWei-ping3. (1.CangzhouHejianZhangQianrongClinic,Cangzhou062450,China; 2.DepartmentofGynaecology,HandanHospitalofTraditionalChineseMedicine,Handan056001,China； 3.DepartmentofPathology,HandanMaternalandChildHealthCareHospital,Handan056002,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression of COX-2 and c-Myc in cervical intraepithelial neoplasia(CIN) and squamous cell carcinoma(SCC) of young women under 35,and their correlation with microvessel density(MVD),so as to explore the correlation of COX-2 and c-Myc with the incidence and progression of SCC,as well as the correlation of their expression with clinical pathology.MethodsCervical tissue samples of 40 young patients with SCC,samples of 31 young patients with CIN and samples of 10 young patients with normal cervical tissues admitted in Handan Maternal and Child Health Care Hospital and Handan Hospital of Traditional Chinese Medicine were selected as research objects,the expressions of COX-2,c-Myc and microvessel density(MVD) labeled by CD43of all the samples were detected by immunohistochemistry S-P method,and the positive expression status of COX-2 and c-Myc in SCC tissues,as well as their relationship with neoplasm staging,pathological type,and lymph node metastasis were analyzed.ResultsThe positive expression rate of c-Myc in SCC was 62.5%(25/40)，which was significantly higher than that in CIN and normal cervical tissues(P<0.01),the expression of c-Myc was correlated with myometrial invasion and lymph node metastasis(P<0.01).The expression rate of COX-2 in SCC was 67.5%(27/40),which was significantly higher than that in CIN and normal cervical tissues (P<0.01),the expression of COX-2 was correlated with the pathological stage of SCC and lymph node metastasis (P<0.01).It turned out that the expression of COX-2 and c-Myc were positively correlated in SCC,and such expression had synergistic effect on the formation of microvessels in cervical carcinoma.ConclusionCOX-2 and c-Myc play important roles in the incidence and progression of SCC,the high expression of COX-2 and c-Myc can be the indicator for the prognosis of SCC.

Key words:Endometrial neoplasms; c-Myc; Cyclooxygenase-2; Microvessel density; Immunohistochemistry

收稿日期：2013-08-23修回日期：2014-09-10編輯：相丹峰

中圖分類號(hào)：R737.33

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)05-0911-03