謝英才　鄧碧堅　支李金(廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，廣東　湛江　524001)

尿銅藍(lán)蛋白、血清胱抑素C、視黃醇結(jié)合蛋白聯(lián)合檢測在早期糖尿病腎病中的診斷價值

謝英才鄧碧堅支李金
(廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，廣東湛江524001)

〔摘要〕目的探討尿銅藍(lán)蛋白、血清胱抑素(Cys) C和視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)三者在早期糖尿病腎病(DN)中的診斷價值。方法糖尿病患者參照尿微量白蛋白排泄率(UAER)分成兩組:早期DN組38例(30 mg/24 h＜UAER＜300 mg/24 h)和單純糖尿病組44例(UAER＜30 mg/24 h) ;健康體檢者38例作為正常對照組。比較三組尿銅藍(lán)蛋白、Cys C和RBP水平。結(jié)果三組尿銅藍(lán)蛋白、Cys C、RBP水平均有顯著差異(P＜0.01)，且DN組最高，正常對照組最低;尿銅藍(lán)蛋白、Cys C、RBP三者聯(lián)合檢測對于DN診斷的曲線下面積為0.948，敏感性為91.42％，特異性為90.51％，均顯著高于三者單獨檢測。結(jié)論尿銅藍(lán)蛋白、Cys C、RBP三者聯(lián)合檢測對于早期DN的診斷有著重要的意義。

〔關(guān)鍵詞〕尿銅藍(lán)蛋白;糖尿病腎病;胱抑素C;視黃醇結(jié)合蛋白

第一作者:謝英才(1969-)，男，主任醫(yī)師，碩士，主要從事糖尿病發(fā)病機制與炎癥因子關(guān)系研究。

糖尿病腎病(DN)一般起病較為隱匿，且病情發(fā)展緩慢，而早期的腎臟病變往往可以逆轉(zhuǎn)，大量患者在出現(xiàn)合并水腫現(xiàn)象或明顯的蛋白尿時才會發(fā)現(xiàn)，此時后果往往很嚴(yán)重〔1，2〕。本研究旨在通過檢測早期DN患者中尿銅藍(lán)蛋白、血清胱抑素(Cys) C和視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)的含量，探討這三者的檢測在早期DN中的診斷價值。

1　資料與方法

1.1一般資料2010年8月至2014年2月我院糖尿病患者82例，其中DN組38例，單純2型糖尿病組44例。均符合世界衛(wèi)生組織(WHO) 1999年制定的糖尿病相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。參照尿微量白蛋白排泄率(UAER)分為早期DN組(30 mg/24 h≤UAER＜300 mg/24 h)和單純糖尿病組(UAER＜30 mg/24 h)。排除有心、肺功能障礙、原發(fā)性高血壓病史及由非糖尿病導(dǎo)致的腎功能障礙。隨機選取我院同期接受健康體檢者38例作為正常對照組。三組一般資料無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。見表1。

表1　三組一般資料的比較(±s)

表1　三組一般資料的比較(±s)

早期DN組(n=38)單純糖尿病組(n=44)正常對照組(n=38) 男/女(n)　18/20　16/28　15/23年齡(歲)　52.1±6.6　 52.0±10.3　 52.4±9.8體質(zhì)指數(shù)(kg/m2)　 21.0±2.1　 21.2±3.2　 21.3±3.1高血壓/高脂血癥(n)　 9/10　10/12　7/8

1.2研究方法采用由日本日立公司生產(chǎn)的HITACHI 7600全自動生化分析儀，英國Denley公司生產(chǎn)的洗板機，美國Bio Rad公司生產(chǎn)的酶標(biāo)儀，北京朝陽福利塑料廠生產(chǎn)的微量反應(yīng)板，北京化工廠生產(chǎn)的鄰苯二胺底物;北京中生科技有限公司生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)液和Cys C檢測試劑盒，上海北加生化試劑有限公司生產(chǎn)的RBP檢測試劑盒，Sigma公司生產(chǎn)的人銅藍(lán)蛋白純品，北京生物制品研究所提供的酶標(biāo)羊抗兔抗體，含有0.2％戊二醛PBS緩沖液(包被液)，制備兔抗人尿銅藍(lán)蛋白血清。嚴(yán)格按照各質(zhì)控品的說明書執(zhí)行規(guī)范操作。清晨抽取10 ml的尿樣本，經(jīng)10 min離心處理后提取上清液，使用免疫比濁法對尿微量白蛋白(mAlb)進行測定。2 w前受試者停用所有抗凝血的藥物，經(jīng)過12 h的禁食后，于清晨抽取患者空腹時3 ml靜脈血，離心后將血清提取，保存于－20℃以備檢測，使用透射比濁法對RBP、Cys C進行檢測。酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測尿銅藍(lán)蛋白:用包被液將樣品稀釋(1∶1)，在每個孔內(nèi)加入100 μl的樣品來包被反應(yīng)板，溫育1.5 h，于4℃的冰箱內(nèi)過夜，第2天將板取出并洗滌3次，在每孔中加入3 μg/ml的抗人銅藍(lán)蛋白血清100 μl，溫育3 h，同樣將板取出并洗滌3次，加入酶標(biāo)羊抗兔100 μl，溫育1.5 h，取板洗滌3次，加入鄰苯二胺100 μl，3 min后加入4 mmol/L的硫酸100 μl終止反應(yīng)，對每孔的吸光度值進行測定，并記錄下結(jié)果。觀察各組的mAlb，并計算出UAER。同時記錄尿銅藍(lán)蛋白、Cys C和RBP值，參考范圍:尿銅藍(lán)蛋白: (54±25.2) ng/ml; Cys C: 0.55～1.05 mg/L; RBP:女26.7～57.9 mg/L，男36～56 mg/L。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析。

2　結(jié)果

2.1三組尿銅藍(lán)蛋白、Cys C、RBP比較三組尿銅藍(lán)蛋白、Cys C、RBP水平均有顯著性差異(P＜0.01)，且DN組最高，正常對照組最低。見表2。

表2　三組尿銅藍(lán)蛋白、Cys C、RBP比較(±s)

表2　三組尿銅藍(lán)蛋白、Cys C、RBP比較(±s)

指標(biāo)　　早期DN組(n=38)單純糖尿病組(n=44)正常對照組(n=38)　F值　P值尿銅藍(lán)蛋白(ng/ml) 332.8±91.0　 98.6±26.4　 10.3±6.8　 367.6＜0.01 Cys C(mg/L)　 1.7±0.8　 0.9±0.2　 0.7±0.1　 48.82＜0.01 RBP(mg/L)　 108.7±20.6　 67.3±12.1　 42.4±10.4　 192.2＜0.01

2.2尿銅藍(lán)蛋白、Cys C、RBP對于DN診斷價值將DN組尿銅藍(lán)蛋白、Cys C、RBP水平行ROC曲線分析，提示尿銅藍(lán)蛋白、Cys C、RBP三者聯(lián)合檢測對于DN診斷的曲線下面積、敏感性、特異性均高于三者單獨檢測。見表3和圖1。

表3　尿銅藍(lán)蛋白、Cys C、RBP及三者聯(lián)合對DN的診斷價值

圖1　尿銅藍(lán)蛋白、Cys C、RBP及三者聯(lián)合對DN的診斷價值

3　討論

DN是糖尿病患者中最常見的一種慢性微血管并發(fā)癥，也是糖尿病患者致殘、致死的一個主要原因。據(jù)相關(guān)的研究資料顯示，糖尿病患者中約20％～40％會發(fā)展成DN〔3，4〕。DN的病程越長，病情發(fā)展越嚴(yán)重，早期DN患者的腎臟組織往往存在較強的代償能力，起病隱匿，一般在一段時期無任何明顯的癥狀。如果進入了混合蛋白尿階段，其腎功能的破壞就無法被逆轉(zhuǎn)。目前UAER在30～300 mg/24 h被公認(rèn)為早期DN標(biāo)志。

銅藍(lán)蛋白屬于急性反應(yīng)期的一種蛋白，一旦尿液中出現(xiàn)大量的尿銅藍(lán)蛋白，提示腎小球血管內(nèi)的基底膜電荷的選擇性發(fā)生顯著變化〔5〕。Cys C屬于半胱氨酸蛋白酶抑制劑，在組織的體液和有核細(xì)胞中廣泛存在，不具有組織特異性。機體內(nèi)有著相對恒定的Cys C產(chǎn)生量，不受飲食、年齡、膽紅素、血脂、炎癥等的影響〔6〕。可以清除Cys C的器官只能是腎臟。Cys C的等電點高，而相對分子量較低，可以從腎小球過膜內(nèi)自由通過，且于近曲小管內(nèi)重降解和吸收，故腎小球濾過率(GFR)決定Cys C水平。所以，Cys C是反映GFR的一種內(nèi)源性標(biāo)志物。體內(nèi)的Cys C含量隨著腎小球受損嚴(yán)重程度而上升，同時伴隨發(fā)展的病情而不斷地上升〔7〕。

RBP是一種肝合成的低分子蛋白，在人體血清、尿液以及腦脊液等體液內(nèi)廣泛存在。受視黃醇的刺激，RBP與視黃醇特異性結(jié)合，構(gòu)成了視黃醇-RBP這種復(fù)合物〔8〕，血液中腦脊液、視黃醇、90％的RBP以1∶1∶1比例形成了高分子的蛋白復(fù)合物，使腎小球中RBP的濾過率下降，轉(zhuǎn)送入機體組織內(nèi)，解離復(fù)合物，釋放RBP。剩余的10％ RBP于近端腎小管被重新吸收、分解。尿液中只能排出少量的RBP，一旦腎功能受損，則能在尿液中檢測出RBP〔9〕。本實驗提示對早期DN患者進行尿銅藍(lán)蛋白、Cys C和RBP的聯(lián)合檢測能提高相應(yīng)的確診率，有助于糖尿病患者腎功能受損的早期發(fā)現(xiàn)，有利于治療和預(yù)防DN，降低并發(fā)癥發(fā)生率〔10〕。

4　參考文獻(xiàn)

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〔2014-04-19修回〕

(編輯苑云杰)

基金項目:湛江市科學(xué)技術(shù)委員會項目(No．2008-67)

〔中圖分類號〕R587.1

〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2015) 16-4529-02;

doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2015.16.047