林思屹 里進(jìn)

人乳頭瘤病毒檢測(cè)與宮頸癌預(yù)防新進(jìn)展

林思屹1里進(jìn)2

目的人乳頭狀瘤病毒（human papilloma virus，HPV）已經(jīng)被證實(shí)是宮頸癌、生殖道和部分口咽部腫瘤的致病因素，其中宮頸癌是女性常見(jiàn)腫瘤，在發(fā)展中國(guó)家宮頸癌的發(fā)病率和死亡率在女性所有腫瘤中均居第2位，僅次于乳腺癌。目前為止，研究已發(fā)現(xiàn)HPV病毒有150～200種型別。很多研究都已表明人乳頭瘤狀病毒感染尤其是高危型HPV是宮頸癌及癌前病變的主要因素，所以病因?qū)W在防治宮頸癌的過(guò)程中就顯得尤其重要?，F(xiàn)文就HPV的致病機(jī)制、相關(guān)疾病的流行病學(xué)特征、最新檢測(cè)手段及其預(yù)防措施做一闡述。

人乳頭瘤病毒；傳染病預(yù)防；分子診斷：疫苗

宮頸癌是世界上眾多癌癥中較少有明確病因的惡性腫瘤，自從1974年德國(guó)病毒學(xué)家哈拉爾德·楚爾·豪森提出人乳頭瘤狀病毒（HPV）感染與宮頸癌發(fā)生存在密切關(guān)系以來(lái)[1]，病因?qū)W在防治宮頸癌的過(guò)程中就顯得尤其重要[2]，本文就HPV的致病機(jī)制、相關(guān)疾病的流行病學(xué)特征、最新檢測(cè)手段及其預(yù)防措施做詳細(xì)闡述。

1 HPV的致病機(jī)制

性接觸傳播是HPV的主要傳播方式，也有少數(shù)通過(guò)消化道或母嬰傳播。HPV具有高度的宿主特異性，主要感染人體特異部位皮膚、黏膜的復(fù)層鱗狀上皮。HPV通過(guò)微小的創(chuàng)口侵入生殖道基底細(xì)胞后，在基底細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，隨基底細(xì)胞的分化成熟逐漸向表層移動(dòng)。HPV的復(fù)制過(guò)程依賴于角質(zhì)細(xì)胞的分化，角化的上皮細(xì)胞很快脫落，不能有效激活免疫系統(tǒng)，因此目前還不能成功體外培養(yǎng)HPV[3]。

從分子機(jī)制上來(lái)看，高危型HPV 導(dǎo)致癌變的主要分子在于E6、E7基因編碼的蛋白，E6蛋白能特異性結(jié)合p53蛋白形成復(fù)合物，促使p53蛋白快速降解，從而導(dǎo)致細(xì)胞周期失控；E7蛋白和pRb有親和性，使G1期進(jìn)入S期所需基因得以轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞周期失控進(jìn)而發(fā)生細(xì)胞永生化。因此，HPV高危型的感染誘發(fā)細(xì)胞惡性增殖，即發(fā)生癌變[4]。

2 HPV與相關(guān)疾病的流行病學(xué)特征

HPV在年輕成年女性中的流行率為40%～80%，并且女性一生中感染HPV概率為80%～90%。據(jù)調(diào)查，我國(guó)人群HPV感染率約為15%，HPV感染率隨年齡變化呈雙峰狀態(tài)，城市和農(nóng)村感染率第一個(gè)高峰都出現(xiàn)在17～24歲，城市第二個(gè)感染率高峰在40～44歲，而農(nóng)村感染率在45～49歲達(dá)第二次高峰[5]。

HPV相關(guān)的疾病有很多，最常見(jiàn)的除了宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）及宮頸癌外，還有泌尿生殖系統(tǒng)疣、尋常疣、扁平疣等良性疾病，以及口咽癌，外陰、陰莖等部位的癌癥，具體參見(jiàn)表1。據(jù)2012年世界衛(wèi)生組織（WHO）公布的數(shù)據(jù)顯示，估計(jì)每年宮頸癌新發(fā)病例約53萬(wàn)人，占所有癌癥死亡女性的7.5%，中國(guó)是宮頸癌高發(fā)地區(qū)，每年新發(fā)病例約6.2萬(wàn)，死亡病例約3萬(wàn)[6]。

3 HPV檢測(cè)方法的進(jìn)展

鑒于HPV檢測(cè)對(duì)于診斷宮頸癌及癌前病變的重要意義，HPV檢測(cè)方法也在不斷改進(jìn)之中，探索快速、靈敏地對(duì)盡可能多的基因型進(jìn)行高通量分型的方法是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。分子檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展使HPV檢測(cè)進(jìn)入了新的時(shí)代，使用PCR技術(shù)進(jìn)行HPV-DNA的檢測(cè)使得標(biāo)本來(lái)源不受限制，且能進(jìn)行HPV分型并確診。這些檢測(cè)方法包括：PCR+膜雜交法（HybriMax）、實(shí)時(shí)熒光PCR法、基因芯片法、流式熒光雜交法（Luminex XMAP）、表面等離子體諧振技術(shù)（Surface Plasmon Resonance，SPR）和電離飛行時(shí)間質(zhì)譜法（MALDI-TOF-MS）。其中，流式熒光雜交法、表面等離子體諧振技術(shù)和電離飛行時(shí)間質(zhì)譜法為近幾年用于HPV的新興檢測(cè)技術(shù)。Luminex公司的XMAP液相芯片技術(shù)核心原理類似流式細(xì)胞技術(shù)，通過(guò)熒光編碼微球技術(shù)和共價(jià)交聯(lián)技術(shù)將擴(kuò)增產(chǎn)物-微球-探針-熒光素雜交成復(fù)合物，經(jīng)Luminex流式儀對(duì)微球逐顆分析，可獲得每種微球的編碼及其對(duì)應(yīng)熒光信號(hào)的種類和強(qiáng)弱。Luminex XMAP液相芯片具有反應(yīng)時(shí)間短、高通量、無(wú)需洗滌等優(yōu)點(diǎn)，受到了國(guó)內(nèi)外臨床實(shí)驗(yàn)室的廣泛歡迎。表面等離子體諧振（SPR）技術(shù)是基于在某些金屬（特別是金、銀）界面上，光能夠激發(fā)產(chǎn)生界面等離子波這一原理而研制的應(yīng)用技術(shù)[7]。近幾年來(lái)，SPR技術(shù)己漸漸從實(shí)驗(yàn)室走向臨床應(yīng)用。SPR技術(shù)采用PCR與SPR芯片核酸雜交相結(jié)合的方法檢測(cè)HPV，并用生物傳感技術(shù)檢測(cè)雜交結(jié)果，提高了檢測(cè)的特異性和靈敏性，重復(fù)性好，但成本較高（需要金薄膜），僅適合大樣本量檢測(cè)[8]。電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）技術(shù)檢測(cè)臨床HPV樣本具有較好的靈敏性和特異性，但目前主要在研究階段，還未進(jìn)入臨床應(yīng)用[9]。

表1 HPV常見(jiàn)的臨床疾病與HPV亞型

4 宮頸癌的預(yù)防

宮頸癌病因較明確，其篩查方法較完善，盡管各國(guó)對(duì)于HPV疫苗注射的指南有所不同，但都基本相似：始終強(qiáng)烈推薦患者在其醫(yī)生的指導(dǎo)下選擇性注射疫苗，效果最理想的是青年女性在第一次性生活之前注射疫苗，理論上來(lái)說(shuō)，男性也應(yīng)該注射HPV疫苗，從而減少HPV的傳播[10]。

此外，要廣泛開(kāi)展預(yù)防子宮頸癌相關(guān)知識(shí)的宣教，增加公眾對(duì)宮頸癌的認(rèn)知，如多個(gè)性伴侶、吸煙、性生活過(guò)早（＜16歲）、性傳播疾病、HPV感染等相關(guān)因素是宮頸癌發(fā)病誘因[11]。通過(guò)普及、規(guī)范子宮頸癌篩查進(jìn)行二級(jí)預(yù)防，但并不是篩查頻率越高越好，要小心仔細(xì)權(quán)衡篩查的預(yù)防作用與潛在的風(fēng)險(xiǎn)，爭(zhēng)取效用最大化的同時(shí)盡量降低風(fēng)險(xiǎn)。由美國(guó)婦產(chǎn)科醫(yī)師學(xué)會(huì)（ACOG）制定并發(fā)表在《Obstetrics & Gynecology》2016年月刊上的最新宮頸癌篩查指南并不建議女性每年進(jìn)行一次宮頸癌篩查，推薦了如下篩查方案[12]：不論女性第一次性生活的年齡如何，不推薦21歲以下的女性篩查宮頸癌，除非是HIV攜帶者；21～29歲女性推薦每3年進(jìn)行一次細(xì)胞學(xué)篩查；30～65歲女性推薦每5年做一次細(xì)胞學(xué)與HPV聯(lián)合篩查，也可繼續(xù)選擇21～29歲的篩查方案；年齡超過(guò)65歲的女性若既往篩查結(jié)果均為陰性，可以停止篩查。由于各地區(qū)宮頸癌流行特征不同，臨床醫(yī)生可以根據(jù)具體情況不同而作出具體調(diào)整。

綜上所述，對(duì)我國(guó)特定地區(qū)人群HPV感染情況及HPV型別分布調(diào)查，有利于該地區(qū)宮頸癌防治工作的開(kāi)展，并且可探索HPV感染率與年齡等危險(xiǎn)因素的關(guān)系、HPV型別與宮頸癌病理類型的特異性，為宮頸癌預(yù)防提供指導(dǎo)性意見(jiàn)。

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Advances in Human Papillomavirus (HPV) Detection and Cervical Cancer Prevention

LIN Siyi1LI Jin21 Clinical Laboratory, The Third People's Hospital of Mianyang, Mianyang Sichuan 621000, China, 2 Clinical Laboratory, Zhongnan Hospital of Wuhan University, Wuhan Hubei 430071, China

HPV has been shown to be anogenital cancers, especially cervical cancer, and some pathogenic factors of oropharyngeal tumours. Cervical cancer is the most common cancer in women in developing countries. The incidence and mortality of women in all tumors were ranked second, second only to breast cancer. It has been found that the HPV type has 150 to 200 kinds. From then on, many studies have found that HPV infection, especially high-oncogenic risk HPV infection, is the major cause of cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia. Thus, etiology plays a signifcant role in the prevention and treatment of cervical cancer. In the following, the mechanism of HPV infection, epidemiology of HPV-related diseases, the latest HPV testing methods and prevention measures will be presented.

HPV, Epidemic prevention, Molecular diagnosis, Vaccine

R737．33

A

1674-9308（2016）35-0043-03

10．3969/j．issn．1674-9308．2016．35．022

武漢大學(xué)自主科研基金（青年項(xiàng)目），2042014kf0143

1 綿陽(yáng)市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 綿陽(yáng) 621000；2 武漢大學(xué)中南醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 武漢 430071

里進(jìn)，E-mail：wb001030@whu．edu．cn