李　琰　張　娟

作者單位:430080 湖北省武漢市普仁醫(yī)院(李　琰)；441021 湖北省襄陽市中心醫(yī)院(張　娟)

MCM7、CDK2及Ki-67蛋白在甲狀腺癌中表達的臨床意義

李琰張娟

作者單位:430080 湖北省武漢市普仁醫(yī)院(李琰)；441021 湖北省襄陽市中心醫(yī)院(張娟)

【摘要】目的探討甲狀腺癌中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白表達的臨床意義。方法收集甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及正常甲狀腺標本各30例，然后用免疫組織化學(xué)SP法來檢測所選甲狀腺組織標本中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白的表達。結(jié)果MCM7、CDK2及Ki-67蛋白在甲狀腺癌中表達的陽性率分別為 100.00%(30/30)、80.00%(24/30)及83.33%(25/30)，三者在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性率均明顯高于甲狀腺腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及正常甲狀腺。甲狀腺癌中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白的表達呈正相關(guān)。結(jié)論MCM7、CDK2及Ki-67蛋白的高表達與甲狀腺乳頭狀癌存在一定的關(guān)聯(lián)，三者表達的檢測可為臨床上早期診斷及評價甲狀腺乳頭狀癌的預(yù)后提供重要的參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】甲狀腺乳頭狀癌；臨床意義；甲狀腺腺瘤；結(jié)節(jié)性甲狀腺；MCM7蛋白；CDK2蛋白；Ki-67蛋白

Clinical Significance of the Protient Expression of MCM7、CDK2 and Ki-67

in Thyroid Cancer

LIYan,ZHANGJuan.WuhanPurenHospital，Wuhan,430080

【Abstract】ObjectiveTo explore the clinical significance of the protient expression of MCM7、CDK2 and Ki-67 in thyroid cancer.Methods30 cases of papillary thyroid cancer patients,30 cases of thyroid adenoma patients,30 cases of nodular goiter patients and 30 cases of normal thyroid patients were collected.Then protein expression of MCM7、CDK2 and Ki-67 were detected by immunohistochemical SP method.ResultsThe positive expression rates of MCM7、CDK2 and Ki-67 were 100.00%(30/30)、80.00%(24/30)and 83.33%(25/30)in thyroid cancer patients.The positive expression rates of MCM7、CDK2 and Ki-67 in thyroid cancer patients were significantly higher than those of thyroid adenoma patients,nodular goiter patients and normal thyroid patients.The expression of MCM7、CDK2 and Ki-67 was positively correlated in thyroid cancer patients.ConclusionPositive expression rate of MCM7、CDK2 and Ki-67 and thyroid cancer have certain correlation.The detection of MCM7、CDK2 and Ki-67 expression can provide important reference for early diagnosis and evaluation of prognosis of papillary thyroid carcinoma in clinical.

【Key words】Papillary thyroid carcinoma;Clinical significance;Thyroid adenoma;Nodular thyroid;MCM7 protein;CDK2 protein;Ki-67 protein

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:0359～0361)

甲狀腺癌為最常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)的惡性腫瘤之一，其病因為環(huán)境、遺傳及激素等多因素相互作用的結(jié)果[1]，甲狀腺癌中有約80%為甲狀腺乳頭狀癌[2]。微小染色體維持蛋白7(MCM7)為MCM蛋白家族的成員之一，MCM家族作為啟動DNA復(fù)制的起始點復(fù)制的準許因子，在DNA合成及細胞增殖方面均起著一定的作用。CDK2是一種在細胞周期起著關(guān)鍵作用的激酶，它激活磷酸化MCM蛋白，兩者在DNA 復(fù)制調(diào)控中起著重要的作用。Ki-67是能反映細胞增殖活性的一種指標，在惡性腫瘤中它的表達會異常升高，是用來鑒別腫瘤的良、惡性常用的參考指標之一[3]。本研究采用免疫組化SP法來檢測4組患者甲狀腺組織中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白的表達，進而探討MCM7、CDK2及Ki-67蛋白在甲狀腺癌中表達的臨床意義。

1材料與方法

1.1　一般資料

收集2010年1月至2013年8月來我院診治的甲狀腺病變組織90例，其中甲狀腺乳頭狀癌(PTC)30例、甲狀腺腺瘤30 例、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫30例。PTC患者的病理診斷均依據(jù)WHO 2006年所規(guī)定的甲狀腺腫瘤的組織學(xué)分類標準來進行。30例 PTC患者中男性4例、女性26例；年齡(38.5±2.1)歲；腫瘤的直徑≤1 cm 17例，>1 cm 13例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移8例。同時選取30例尸解病例(非甲狀腺疾病死亡)中的正常甲狀腺組織作為對照組。所選患者術(shù)前均沒有接受化療、放療和免疫學(xué)治療。

1.2　方法

所有標本均被10%的甲醛溶液固定，并均經(jīng)石蠟進行包埋，接著進行常規(guī)脫水,然后是進行石蠟包埋,然后常規(guī)石蠟切片制成4 μm,微波抗原修復(fù)所有切片，最后按照試劑盒說明書進行免疫組化染色操作步驟。鼠抗人MCM7的單克隆抗體由美國NeoMarkers公司提供，兔抗人CDK2多克隆抗體和鼠抗人Ki-67單克隆抗體由福州邁新公司提供。用已知的子宮頸癌的MCM7、乳腺癌的CDK2及肺鱗癌的Ki-67陽性切片來進行陽性對照，將PBS液當做一抗作陰性對照。

1.3　判定標準

MCM7、CDK2及 Ki-6 免疫組化染色結(jié)果的判斷：隨機觀察10個高倍鏡視野中的1 000個腫瘤細胞，陽性為細胞核看到棕黃色的顆粒，陽性的細胞數(shù)<10%為(-)，≥10%～30%為(+)，≥31%～70%為(++)，>70%為(+++)。

1.4　統(tǒng)計學(xué)方法

所有的數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件來進行處理。對各組間數(shù)據(jù)的比較使用χ2檢驗、秩和檢驗以及Spearman等級的相關(guān)分析等。

2結(jié)果

2.1　MCM7、CDK2及Ki-67蛋白在4組甲狀腺組織中的表達

PTC患者中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白的陽性表達率分別是 100.00%(30/30)、80.00%(24/30)及83.33%(25/30)，三者均明顯高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤及正常甲狀腺組織，見表1。

表1　MCM7、CDK2及Ki-67蛋白在4組甲狀腺組織中的陽性表達(例，%)

注：#為與PTC組相比較，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2　PTC患者MCM7、CDK2及Ki-67蛋白表達情況與臨床參數(shù)之間的關(guān)系

MCM7及CDK2 蛋白的表達與PTC患者的年齡、性別、腫塊的大小及患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均沒有相關(guān)性。Ki-67蛋白表達與PTC患者的年齡、性別、腫塊的大小均沒有相關(guān)性，而與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)聯(lián)，見表2。

表2　PTC患者MCM7、CDK2及Ki-67蛋白陽性表達情況與臨床參數(shù)之間的關(guān)系(例，%)

2.3　PTC患者中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白表達的相互關(guān)系

PTC患者中 MCM7、CDK2 與Ki-67蛋白的表達基本上呈正相關(guān)，見圖1。

圖1　PTC患者中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白表達的相互關(guān)系

3討論

甲狀腺癌作為一種常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)的惡性腫瘤，其發(fā)病率占惡性腫瘤的1%～2%。我國甲狀腺癌的發(fā)病率近年來呈現(xiàn)不斷上升的趨勢，而其中以甲狀腺乳頭狀癌最為明顯[4]。已有研究證實腫瘤是因細胞DNA 鏈的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變后，導(dǎo)致異常的細胞增生失控及分化障礙。MCM異六聚體(MCM2/3/4/5/6/7)是DNA的復(fù)制、合成過程中起著關(guān)鍵的復(fù)制準許因子中的一個重要因素，這種異六聚體同時具有解螺旋酶及ATP酶的活性，在復(fù)制叉延伸起的過程中有重要作用。CDK2與cyclin形成的cyclin-CDK復(fù)合物作為DNA復(fù)制的啟動子參與細胞周期的調(diào)控。Ki-67蛋白除G0期及G1早期外,在細胞增殖活動的其他各期均有表達,以M期的表達最高，因此，Ki-67蛋白是細胞增殖活性的反映，與腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系密切[5]。本院就選取120例不同的患者的甲狀腺組織為研究對象，通過分析各組甲狀腺組織中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白的表達趨勢，來探討MCM7、CDK2及Ki-67蛋白在甲狀腺癌患者中表達的臨床意義。

任占平等[6]的研究結(jié)果顯示正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生、子宮不典型增生和子宮內(nèi)膜樣腺癌患者的內(nèi)膜組織MCM7蛋白的表達呈逐漸上升的趨勢。本研究的結(jié)果顯示MCM7蛋白在甲狀腺乳頭狀癌患者的甲狀腺組織中的陽性表達率為 100.00%，明顯高于甲狀腺腺瘤(20.00%)、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫(23.33%)及正常甲狀腺組織(16.67%)的患者。這可能是因為MCM7 作為MCM 蛋白家族的成員之一，能直接反映MCM 蛋白的表達情況，而MCM蛋白又是一種多功能蛋白，不僅在DNA 復(fù)制及延伸中有重要作用，還在細胞增殖中有非常重要的功能，在惡性腫瘤患者或是有癌前病變的患者的細胞中 MCM7蛋白的表達均處于高表達狀態(tài)。CDK2及Ki-67蛋白在甲狀腺癌患者中表達的陽性率分別為80.00%(24/30)與83.33%(25/30)，兩種蛋白在甲狀腺乳頭狀癌患者的甲狀腺組織中的陽性表達率均明顯高于甲狀腺腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及正常甲狀腺組織，這種結(jié)果與史琳等[7]的研究結(jié)果相符合。本研究結(jié)果提示細胞的正常增殖狀態(tài)下MCM7、CDK2和Ki-67蛋白顯示低表達，反之細胞的異常增殖狀態(tài)下三者顯示高表達。本研究的結(jié)果顯示MCM7及CDK2 蛋白的表達與PTC患者性別、年齡、腫塊的直徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均無相關(guān)性。Ki-67蛋白表達與PTC患者的性別、年齡及腫塊的直徑均無相關(guān)性，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)聯(lián)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTC患者的甲狀腺組織中Ki-67的表達明顯增高。且PTC患者中 MCM7、CDK2 與Ki-67蛋白的表達基本呈正相關(guān)，這種結(jié)果提示三者在人體的DNA復(fù)制起始過程中均行使正性調(diào)控的作用。

綜上所述，MCM7、CDK2和Ki-67蛋白高表達時均提示患者的細胞處于增殖旺盛狀態(tài)，這種高表達的變化與甲狀腺癌存在關(guān)聯(lián)，三者的聯(lián)合檢測在臨床上對甲狀腺癌的早期診斷有一定的參考價值，且在甲狀腺癌患者的預(yù)后方面有一定的臨床提示意義。

參考文獻

[1]史琳,張安文,羅宇,等.甲狀腺癌中MCM7和p27的表達及臨床意義〔J〕.實用腫瘤雜志,2011,26(4):390-393.

[2]李加美,王強修,張珂,等.甲狀腺乳頭狀癌分子標記物研究進展〔J〕.中華臨床醫(yī)師雜志(電子版),2012,23(6):7698-7700.

[3]Ito Y,Miyauchi A,Kakudo K,et al.Prognostic significance of ki-67 labeling index in papillary thyroid carcinoma〔J〕.World J Surg,2010,34(5):3015-3021.

[4]李麗.HBME-1、CK19、Calectin-3、34βE12及Ki67在甲狀腺微小乳頭狀癌中的表達及其臨床意義〔M〕.吉林大學(xué),2012:36.

[5]金東嶺,李蘭梅,劉現(xiàn)軍,等.甲狀腺腫瘤中survivin和Ki-67的表達〔J〕.臨床與實驗病理學(xué)雜志,2009,25(2):154-156.

[6]任占平,石喆,張芫.子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中p27、MCM7 蛋白的表達及意義〔J〕.腫瘤防治研究,2011,38(1):73-76.

[7]史琳,張安文,羅宇,等.細胞周期正性調(diào)控因子的異常表達與甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系〔J〕.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013,33(7):1031-1035.

(編輯：甘艷)

(收稿日期2014-07-08修回日期 2014-09-10)

中圖分類號：R736.1

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2015)03-0359-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.03.013

通訊作者：張娟