宋紅蓮徐 陽孔紹國馬萍煥孟 雷

(1.易門縣動物疫病預(yù)防控制中心,云南易門 651100；2.易門縣浦貝鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)中心畜牧獸醫(yī)組,云南易門 651100；3.易門縣龍泉街道農(nóng)業(yè)中心畜牧獸醫(yī)組,云南易門 651100)

易門縣小反芻獸疫免疫效果的調(diào)查

宋紅蓮1*徐 陽1孔紹國2馬萍煥2孟 雷3

(1.易門縣動物疫病預(yù)防控制中心,云南易門 651100；2.易門縣浦貝鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)中心畜牧獸醫(yī)組,云南易門 651100；3.易門縣龍泉街道農(nóng)業(yè)中心畜牧獸醫(yī)組,云南易門 651100)

為掌握易門縣小反芻獸疫的實際免疫效果，為科學(xué)防控小反芻獸疫疫情提供可靠依據(jù)，采用C-ELISA對易門縣龍泉街道、浦貝鄉(xiāng)轄區(qū)內(nèi)的山羊規(guī)模養(yǎng)殖場（戶）、散養(yǎng)戶不同的飼養(yǎng)方式、品種、年齡段羊群，共調(diào)查8戶，587只羊，采集60份樣品進(jìn)行小反芻獸疫免疫效果血清抗體檢測，檢測結(jié)果顯示，小反芻獸疫免疫后7 d，不同的飼養(yǎng)方式、品種、年齡段的免疫抗體轉(zhuǎn)陽率均達(dá)90%以上。調(diào)查結(jié)果表明，易門縣采用疫苗免疫產(chǎn)生的抗體轉(zhuǎn)陽率達(dá)到國家免疫合格要求，疫苗免疫對易門縣小反芻獸疫防控有效。

小反芻獸疫 免疫抗體 檢測

小反芻獸疫（PPR）又名小反芻獸偽牛瘟，是由小反芻獸疫病毒引起的一種急性、烈性、接觸性傳染病，易感群發(fā)病率高達(dá)100%，嚴(yán)重暴發(fā)時，死亡率達(dá)100%。目前，該病尚無有效治療方法，主要通過早期診斷和疫苗免疫進(jìn)行控制。19世紀(jì)40年代，該病首次在科特迪瓦報道以來，先后在多個國家暴發(fā)和流行。2007年7月，國內(nèi)西藏地區(qū)先后發(fā)生4起PPR疫情，感染近5 000只羊。2014年4月，云南首次爆發(fā)PPR疫情。

易門縣隸屬云南省玉溪市，距省城昆明市93 km。97%為山區(qū)，3%為壩區(qū)，屬典型的山區(qū)縣，畜牧業(yè)主要以生豬、家禽、山羊養(yǎng)殖為主，2013年全縣山羊存欄62 663只，出欄46 200只，疫病死亡率1.2%。2014年以前山羊疫病主要有山羊痘、傳染性胸膜肺炎等。2014年4月10日，由于浦貝鄉(xiāng)許家村張某某從市場購進(jìn)產(chǎn)地為安寧溫泉的9只病羊而引發(fā)小反芻獸疫，并有疫情擴(kuò)散趨勢。2014年4月12日，相關(guān)技術(shù)管理部門采取了“緊急免疫、撲殺病羊及同群羊、設(shè)卡檢查”等綜合防控措施。到2014年4月27日，全縣小反芻獸疫免疫552 929只，占存欄數(shù)的89.3%了。為確實掌握易門縣小反芻獸疫免疫效果，評估防控效果，為以后制定防控措施提供科學(xué)依據(jù)，特開展此次免疫效果評價調(diào)查。

1 材料和方法

1.1 疫苗

新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的小反芻獸疫活疫苗，規(guī)格100頭份/瓶，批號2014017-2，每頭份含有的小反芻獸疫弱毒病毒至少為103TCID50。

1.2 主要儀器和試劑

安圖酶標(biāo)儀：型號2010；小反芻C-ELISA試劑盒來自云南出入境檢驗檢疫局。

1.3 樣品來源

易門縣龍泉街道、浦貝鄉(xiāng)轄區(qū)內(nèi)的山羊規(guī)模養(yǎng)殖場（戶）、散養(yǎng)戶不同的飼養(yǎng)方式、品種、年齡段羊群，共調(diào)查8戶，587只羊，樣品來源信息見下表（表1）。

表1 樣品來源信息表

1.4 免疫方法

不分品種、月齡階段（大小）、性別等，按疫苗使用說明書的要求每只羊頸部皮下注射1ml（1頭份）。

1.5 樣品采集及血清分離

分別抽樣采集免疫后7d、10d、14d、21d的同群5只羊的頸靜脈血，用3 000 r/min離心10 min，分離血清，待檢。

1.6 C-ELSIA方法

將抗原稀釋至工作濃度，100 μl/孔包被于空白ELISA板上，37℃孵育1 h；棄液，加入250 μl洗液洗滌3次，拍干；每孔加入40 μl稀釋液，設(shè)立對照孔，其余各孔分別加入10 μl加入待檢血清樣品，在對應(yīng)孔中每孔加入50 μl單克隆抗體工作液；貼膜，室溫連續(xù)振蕩1h；棄液，加入250 μl洗液洗滌3次，拍干；在每孔中加入100 μl工作濃度的酶標(biāo)二抗抗體，室溫連續(xù)振蕩1 h；棄液，加入250 μl洗液洗滌3次，拍干；加入100 μl TMB底物液，室溫避光孵育10 min，加入100 μl終止液。使用450 nm波長酶標(biāo)儀讀取OD值，按說明書判定陰陽性。

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)監(jiān)測結(jié)果

采用C-ELISA檢測結(jié)果，隨機(jī)抽取的不同品種、不同養(yǎng)殖模式、不同年齡段的免疫后的不同天數(shù)的血清抗體轉(zhuǎn)陽率僅有1個規(guī)模場免后7 d在80%（〉70%），其余免疫7 d后抗體轉(zhuǎn)陽率為90%，免疫10 d后抗體轉(zhuǎn)陽率均達(dá)100%，抽檢樣品平均抗體轉(zhuǎn)陽率98.33%（結(jié)果詳見表2和圖1）。結(jié)果表明，使用新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的小反芻獸疫活疫免疫7 d后，抽檢樣品產(chǎn)生的血清抗體即能達(dá)到免疫要求。

表2 小反芻獸疫血清抗體檢測結(jié)果

圖1 免疫后不同時間轉(zhuǎn)陽率趨勢圖

2.2 免疫效果調(diào)查

2.2.1 疫情調(diào)查

免疫前，采樣檢測的8戶養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的587只羊及所在村組其他35戶，852只羊群未發(fā)生凝似小反芻獸疫臨床病例。免疫后7d，檢測點小平地有2戶未免疫的8只山羊發(fā)生小反芻獸疫，占存欄數(shù)13只的61.5%，死亡7只，病死率達(dá)87.5%；采樣監(jiān)測的8戶及其所在村組在免疫前一個月內(nèi)沒有到外地購進(jìn)羊飼養(yǎng)，在免疫后3 d，監(jiān)測點小平地有一農(nóng)戶從市場購入一只帶毒公羊飼養(yǎng)，引發(fā)疫情。免疫20 d后全縣小反芻獸疫免疫密度達(dá)99.2%，至今全縣未發(fā)生疑似小反芻獸疫臨床病例。

2.2.2 不良反應(yīng)調(diào)查

587只羊免疫后24h未出現(xiàn)不食，抽測47只羊的體溫為38.5℃～39.2℃，體溫正常；免疫30d后未有流產(chǎn)、死亡等不良反應(yīng)出現(xiàn)。

3 結(jié)論

（1）不同的飼養(yǎng)方式、品種、年齡階段的山羊，免疫10 d后抗體轉(zhuǎn)陽率高達(dá)100%，疫苗免疫后6個月免疫群未發(fā)現(xiàn)臨床病例，無不良反應(yīng)，結(jié)果表明小反芻獸疫疫苗免疫效果好，適用性強(qiáng)，副反應(yīng)小。

（2）疫苗免疫后一般無不食、流產(chǎn)、死亡等不良反應(yīng)，懷孕母羊免后未見不良反應(yīng)，免疫7 d后抗體轉(zhuǎn)陽率可達(dá)90%，結(jié)果表明小反芻獸疫疫苗免后抗體產(chǎn)生快，疫苗安全性好，可用于緊急免疫。本調(diào)查懷孕期母羊樣本量小，未見不良反應(yīng)可能是隨機(jī)事件，懷孕母羊免后是否安全有待進(jìn)一步調(diào)查。

（3）本調(diào)查調(diào)查范圍易門縣龍泉街道、浦貝鄉(xiāng)轄區(qū)內(nèi)的山羊規(guī)模養(yǎng)殖場（戶）、散養(yǎng)戶不同的飼養(yǎng)方式、品種、年齡段羊群，共調(diào)查8戶，587只羊，疫苗免疫羊群對該病確實有極佳的防治效果，保護(hù)率高。

宋紅蓮（1966-），女，中專，主要從事動物防疫、檢疫、實驗室檢驗工作。*通訊作者。