張延萍 牛睿祺 周冬菊

（河南科技大學(xué)化工與制藥學(xué)院 河南洛陽 471023）

制藥工程專業(yè)實(shí)驗(yàn)開發(fā)
——鞣質(zhì)的提取與含量測定

張延萍 牛睿祺 周冬菊

（河南科技大學(xué)化工與制藥學(xué)院 河南洛陽 471023）

以杠板歸為原料，70%丙酮提取，采用磷鉬鎢酸-干酪素比色法測定鞣質(zhì)含量。在磷鉬鎢酸溶液的配制過程中，使用溴水替代液溴；在含量測定時(shí)，使用26%碳酸鈉溶液替代29%碳酸鈉溶液。通過本實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革，為制藥工程專業(yè)提供一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

杠板歸 磷鉬鎢酸-干酪素 鞣質(zhì) 制藥工程實(shí)驗(yàn)

教改實(shí)驗(yàn)在深化教育改革、全面提高教育質(zhì)量方面起著至關(guān)重要的作用，受到教育界的高度重視。開發(fā)新的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目或新的試驗(yàn)方法是很有必要的［1］。

鞣質(zhì)是植物的次生代謝產(chǎn)物，廣泛存在于植物界中，據(jù)統(tǒng)計(jì)約70%以上的生藥中含有鞣質(zhì)類成分。在醫(yī)藥領(lǐng)域，最初鞣質(zhì)成分被認(rèn)為僅有收斂及蛋白質(zhì)凝固作用，臨床用于止血，止瀉及抗菌抗病毒［2］。近30年，由于新技術(shù)，新方法的應(yīng)用，鞣質(zhì)的研究取得重大進(jìn)展，還發(fā)現(xiàn)其具有抗突變、抗脂質(zhì)過氧化、清除自由基、抗腫瘤、抗艾滋病與降血糖等多種藥理活性［3］。尤其在抗腫瘤治療中顯示出了誘人的前景。

在制藥工程專業(yè)實(shí)驗(yàn)中，涉及的天然產(chǎn)物成分有黃酮、生物堿、香豆素、多糖、揮發(fā)油等，鞣質(zhì)未有涉及［4］，本研究旨在開發(fā)切實(shí)可行、操作簡便的學(xué)生實(shí)驗(yàn)。

一、實(shí)驗(yàn)部分

1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.1 掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法

1.2 掌握磷鉬鎢酸-干酪素法測定鞣質(zhì)含量的原理及方法

2.實(shí)驗(yàn)原理

鞣質(zhì)，是存在于植物體內(nèi)的一類結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的多元酚類化合物。其理化性質(zhì)如下：

2.1 物理性質(zhì)

2.1.1 性狀：鞣質(zhì)多為無定形粉末，呈米黃色、棕色、褐色等，具有吸濕性（很難結(jié)晶）。

2.1.2 溶解性：鞣質(zhì)具有較強(qiáng)的極性，溶于水、甲醇、乙醇、丙酮等親水性溶劑，可溶于乙酸乙酯、乙醚同乙醇混合物，難溶或不溶于無水乙醚、無水氯仿等親油性溶劑

2.2 化學(xué)性質(zhì)

2.2.1 還原性：易被氧化，具有較強(qiáng)的還原性，可以與菲林試劑及福林試劑反應(yīng)。

2.2.2 與蛋白質(zhì)作用：可與蛋白質(zhì)結(jié)合生成不溶于水的復(fù)合物沉淀。利用此性質(zhì)，可使獸皮的蛋白質(zhì)形成致密、柔韌、難以透水的皮革。

2.2.3 與三氯化鐵作用：鞣質(zhì)的水溶液可與三氯化鐵作用呈藍(lán)黑色或綠黑色。藍(lán)黑墨水的制造就是利用鞣質(zhì)的這一性質(zhì)。

2.2.4 與生物堿作用：因具有酸性，可與生物堿結(jié)合生成難溶于水的沉淀。

2.2.5 與鐵氰化鉀的氨溶液作用：鞣質(zhì)的水溶液與鐵氰化鉀氨溶液反應(yīng)呈深紅色，并很快變成棕色［5］。

鞣質(zhì)的量=總多酚-不被吸附的多酚

2.3 主要儀器

中草藥粉碎機(jī)、50目篩、恒溫水浴鍋、UV1200型紫外可見分光光度計(jì)、萬分之一天平、百分之一電子天平、棕色容量瓶（250mL×1個(gè)，50mL×1個(gè)，25mL×6個(gè)）、白色容量瓶（1000mL×1個(gè)）、圓底燒瓶（1000mL×1個(gè)，100mL×1個(gè)）、冷凝管、移液管（10mL×1個(gè)，5mL×7個(gè)，1mL×2）個(gè)，100mL量筒、燒杯（1000mL×1個(gè)，200mL×1個(gè)，50mL×2個(gè)）、100mL具塞錐形瓶、三角漏斗、布氏漏斗和1000mL抽濾瓶。

2.4 試劑

丙酮、鎢酸鈉、鉬酸鈉、硫酸鋰、鹽酸、磷酸、溴水、三氯化鋁（結(jié)晶）、結(jié)晶乙酸鈉、甲醇、無水碳酸鈉均為分析純；干酪素（生化試劑）；沒食子酸對(duì)照品（中國藥品生物制品鑒定所）；市售杠板歸藥材。

2.5 溶液的配制

2.5.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取沒食子酸對(duì)照品25mg，置50mL棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取5mL，置50mL棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0.05mg·mL-1的對(duì)照品溶液。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密量取濃度為0.05mg·mL-1的沒食子酸對(duì)照品溶液1、1.5、2、2.5、3mL，分別置于25ml棕色容量瓶中，各加入磷鉬鎢酸試液1mL，再分別加入水11、10.5、10、9.5、9mL，用26%（質(zhì)量/體積）碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，常溫放置30min，同時(shí)以相應(yīng)的試劑為空白，在760nm處測定吸光度。以沒食子酸溶液濃度為縱坐標(biāo)，以吸光度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.7 鞣質(zhì)含量測定

2.7.1 總酚測定方法

精密量取0.5mL供試品溶液，置于25mL棕色容量瓶中，各加磷鉬鎢酸試液1mL，再分別加水11.5mL，用26%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，常溫放置30min，同時(shí)以相應(yīng)的試劑為空白，在760nm處測定吸光度。計(jì)算總酚含量。

二、結(jié)果與討論

1.溶液的制備

磷鉬鎢酸試液藥典采用加0.2ml液溴煮沸［6］，溶液由墨綠色轉(zhuǎn)為鵝黃色，由于液溴容易揮發(fā)并且毒性較大，本實(shí)驗(yàn)采用20ml溴水替代，可以達(dá)到滿意效果。如放置后變?yōu)榫G色，可加溴水適量，煮沸出去多余的溴即可。

2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以吸光度為橫坐標(biāo)，以沒食子酸濃度（mg·ml-1）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸分析，回歸方程為：C=0.009A-0.001，r=0.999，沒食子酸在0.001～0.006 mg·ml-1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。在溶液配的準(zhǔn)，儀器穩(wěn)定的情況下，此法相關(guān)系數(shù)可以達(dá)到三個(gè)9以上。

三、結(jié)語

本實(shí)驗(yàn)通過70%丙酮提取，磷鉬鎢酸-干酪素比色法測定杠板歸中鞣質(zhì)含量。磷鉬鎢酸溶液配制時(shí)，采用溴水代替液溴；含量測定時(shí)采用26%碳酸鈉溶液代替29%碳酸鈉溶液。實(shí)驗(yàn)操作簡便可行，可以讓學(xué)生掌握鞣質(zhì)的理化性質(zhì)、掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及紫外分光光度計(jì)的使用。此實(shí)驗(yàn)試劑簡單易得，是適合制藥工程專業(yè)實(shí)驗(yàn)的綜合實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

［1］雷解民，陳國先.對(duì)教改實(shí)驗(yàn)復(fù)雜性和方法論的思考［J］.中國教育學(xué)刊，2001，5:47-51

［2］杜國成.中藥鞣質(zhì)成分的藥理作用探析［J］.中國醫(yī)藥科學(xué)，2011，1（16）:27，28

［3］于占洋，金哲雄.鞣質(zhì)抗氧化作用研究進(jìn)展 ［J］.黑龍江醫(yī)藥，2014，1（26）:985，986

［4］天津大學(xué)等編.制藥工程專業(yè)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) ［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

［5］匡海學(xué)主編.中藥化學(xué) ［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2011:337-338

［6］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典 ［M］.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:

張延萍，女，1974年生，博士，副教授，河南科技大學(xué)制藥工程系主任，副主編出版《伏牛山藥用植物志》系列著作。

本研究獲河南科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)開發(fā)基金資助，項(xiàng)目號(hào)：SY1213027