陳嵐 張震華 謝之微

（上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院藥劑科，上海 盧灣200025）

纈沙坦（Valsartan），化學(xué)名為（S）－N－戊?；璑－｛［2′－（1H－5－四氮唑－基－1，1′－聯(lián)苯）－4－基］－甲基｝－纈氨酸。纈沙坦結(jié)構(gòu)中含1個(gè)手性碳原子，產(chǎn)品為S－構(gòu)型。結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。

圖1 纈沙坦結(jié)構(gòu)Fig 1 Effect of valsartan structure

纈沙坦是一種口服有效的特異性的血管緊張素Ⅱ（AT1）受體拮抗劑［1］，它選擇性地作用于AT1受體亞型，阻斷AngⅡ與AT1受體的結(jié)合（其特異性拮抗AT1受體的作用大于AT2受體約20000倍），從而抑制血管收縮和醛固酮的釋放，產(chǎn)生降壓作用［2］。不作用于血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）、腎素和其它受體，不抑制與血壓和鈉平衡有關(guān)的離子通道；該品對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶沒(méi)有抑制作用，不影響體內(nèi)緩激肽水平，因而導(dǎo)致咳嗽的副作用少于血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑。

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（YBH01882012）以及英國(guó)藥典（BP2012）纈沙坦標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定方法分別為酸堿滴定法及電位滴定法，見(jiàn)表1。采用酸堿滴定法進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，對(duì)滴定終點(diǎn)顏色判斷不明顯，定量誤差較大，重現(xiàn)性差；采用電位滴定法時(shí)，需要N2對(duì)滴定過(guò)程保護(hù)，操作費(fèi)時(shí)，方法復(fù)雜［3］。本文采用高效液相色譜法對(duì)含量進(jìn)行控制，結(jié)果該方法專(zhuān)屬性高，方法簡(jiǎn)便，快速、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，消耗樣品量少。適合作為纈沙坦原料的質(zhì)量控制。本研究中纈沙坦由湖南千金湘江藥業(yè)股份有限公司研制生產(chǎn)。

表1 纈沙坦質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量項(xiàng)下的對(duì)比Table 1 Comparison on assay determination of Valsartan in quality standards

1 材料與方法

1．1 儀器與試藥 Agilent 1260高效液相色譜儀；UV－762紫外分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；BS110S電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。纈沙坦對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為100651－201203，含量99．8%；纈沙坦原料6批（批號(hào)20121001～20121003，20121101～20121103）由湖南千金湘江藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸氫二鈉為分析純；水為二次重蒸水。

1．2 方法

1．2．1 色譜條件 采用 Waters Symmetry C18柱（150mm×4．6mm，5μm），用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈－水－冰醋酸（500∶500∶1）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm；流速為1．0ml／min。理論板數(shù)按纈沙坦峰計(jì)算應(yīng)不低于4000，纈沙坦與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

1．2．2 溶液制備 取本品適量，精密稱(chēng)定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1ml約含纈沙坦0．05mg的樣品溶液；另取纈沙坦對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1ml約含纈沙坦0．05mg的對(duì)照品溶液。

1．2．3 線性關(guān)系及標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密稱(chēng)定纈沙坦10mg，置50ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，分別精密量取2．5、2．5、4、5、6和7．5ml，置100、20、20、20、20和20ml量瓶中，制成5、25、40、50、60和75μg／ml 6個(gè)濃度范圍，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取各溶液10μl，分別注入色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），濃度（μg／ml）為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y＝7．266x＋0．0627，r＝0．9999。纈沙坦在5～75μg／ml濃度范圍內(nèi)線性良好。

1．2．4 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，分別于第二天、第三天重復(fù)上述操作。主峰峰面積的RSD＝1．1%（n＝18）。說(shuō)明儀器精密度良好。

1．2．5 重復(fù)性試驗(yàn) 取“1．2．2”項(xiàng)下方法制備的同一份供試品溶液5份，分別再次重復(fù)測(cè)定5次，計(jì)算含量，RSD＝1．4%。說(shuō)明方法的重復(fù)性良好。

1．2．6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取本品適量，精密稱(chēng)定，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度制成每1ml中含0．05mg的溶液。取上述液作為供試品溶液，置室溫下放置，分別于第0、2、4、6、8、10、12h時(shí)，測(cè)定峰面積，RSD＝0．6%。說(shuō)明樣品溶液穩(wěn)定性良好。

1．2．7 回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取纈沙坦20、25和30mg，分別置50ml容量瓶中，加流動(dòng)相30ml，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取纈沙坦對(duì)照品適量（以干燥品計(jì)），精密稱(chēng)定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml中約含0．05mg的溶液。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中纈沙坦的含量，計(jì)算平均回收率。結(jié)果纈沙坦高、中、低3個(gè)加入量的回收率（n＝3）分別為99．96%（RSD＝1．2%）、100．12%（RSD＝1．6%）、100．08%（RSD＝1．4%），平均值（n＝9）為100．06%。

1．2．8 定量項(xiàng) 取線性試驗(yàn)項(xiàng)下濃度為5μg／ml溶液，逐級(jí)稀釋對(duì)照品溶液，測(cè)定樣品峰的峰高，同時(shí)測(cè)定相同條件下的色譜基線噪聲，取基線噪聲的10倍值為定量限，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，因此本品定量限為0．5ng（0．1%）。

2 結(jié)果

2．1 HPLC測(cè)定纈沙坦含量 取6個(gè)批次的樣品各2份，分別按照“1．2．2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2、圖2。

表2 纈沙坦含量試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Determination results of assay（HPLC）

圖2 RT＝9．659纈沙坦；RT＝7．428丁?；i沙坦Fig．2 RT＝9．659Stan；RT＝7．428Ding Xianji Stan

2．2 酸堿滴定測(cè)定纈沙坦含量 同時(shí)取以上樣品，按照中國(guó)藥典（2010年版）纈沙坦含量測(cè)定方法進(jìn)行酸堿滴定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 纈沙坦含量試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Determination results of assay（titration）

3 討論

3．1 有資料報(bào)道，測(cè)定纈沙坦含量的方法中，HPLC法檢測(cè)分析纈沙坦的波長(zhǎng)為270nm［4］，而藥品纈沙坦試行標(biāo)準(zhǔn)HPLC的檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。在本試驗(yàn)中，依據(jù)紫外分光光度法，在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果在225、230、270nm處波長(zhǎng)都有吸收，然而在225nm處吸收峰最大，因此將230nm設(shè)定成檢測(cè)波長(zhǎng)。在流動(dòng)相不改變的情況下，流速減小，吸收主峰出現(xiàn)時(shí)間推遲，增大流速，吸收主峰出現(xiàn)時(shí)間縮短；且主吸收峰及雜質(zhì)吸收峰的拖尾因子f、分離度R、理論塔板數(shù)n均滿(mǎn)足規(guī)定。改用其他類(lèi)型的C18柱，如 Waters Novpak C18柱（150mm×3．9mm，5μm），Waters Symmetry C18柱（250mm×4．6mm，5μm），在不改變流動(dòng)相的前提下，出峰時(shí)間單純只受柱長(zhǎng)的影響，短柱出峰時(shí)間稍短，長(zhǎng)柱出峰時(shí)間略長(zhǎng)。且主吸收峰及雜質(zhì)吸收峰的拖尾因子f、分離度R、理論塔板數(shù)n均滿(mǎn)足規(guī)定。

3．2 液相色譜法將液體作為流動(dòng)相。經(jīng)典液相色譜法通常使用普通規(guī)格的流動(dòng)相以及固定相在常壓下進(jìn)行輸送待測(cè)樣品，此種色譜法的分離時(shí)間長(zhǎng)且柱效不高［5］。采取高效液相色譜法可分析檢測(cè)對(duì)象廣，柱效高。該方法只要求待測(cè)樣品能被制成溶液即可，不需氣化，因而不受樣品揮發(fā)度的限制。尤其是對(duì)檢測(cè)揮發(fā)度小、對(duì)熱不穩(wěn)定、離子型化合物及摩爾質(zhì)量大的化合物有利，例如抗生素、核酸、甾體、蛋白質(zhì)等［6］。

3．3 高效液相色譜分辯率高于其它色譜法，速度快，十幾分鐘到幾十分鐘可完成［7］，重復(fù)性高，自動(dòng)化操作，分析精確度高。酸堿滴定法是基于酸堿反應(yīng)的滴定分析方法，其操作誤差主要與滴定條件、指示劑、終點(diǎn)判斷以及操作水平等影響因素有關(guān)。

3．4 丁?；i沙坦是纈沙坦原料中主要控制雜質(zhì)之一，其與纈沙坦主要區(qū)別在于正丁酰基。在用滴定法進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，易使含量測(cè)定結(jié)果偏高。采用高效液相色譜進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，纈沙坦與丁酰基纈沙坦有效分離，含量測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，方法專(zhuān)屬性高，簡(jiǎn)便，快速，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，高效液相色譜法專(zhuān)屬性好，準(zhǔn)確，靈敏，用于纈沙坦含量的測(cè)定結(jié)果可靠。

［1］ 劉雪松，劉 偉，門(mén)金玉，等．高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定人血漿中的纈沙坦［J］．中國(guó)新藥雜志，2011，20（14）：1321－1324．

［2］ 姜美華，徐友平，姚國(guó)乾，等．纈沙坦對(duì)心肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響［J］．西部醫(yī)學(xué)，2013，25（4）：493－497．

［3］ 韓俊，馬寶玉，李娟．纈沙坦分散片的制備及含量測(cè)定［J］．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（1）：145－146．

［4］ 荊小燕，王勇軍，徐麗潔，等．高效液相色譜法測(cè)定纈沙坦氨氯地平片中的有關(guān)物質(zhì)［J］．中國(guó)新藥雜志，2013，22（019）：2323－2327．

［5］ 廖洪娟，張 濤．高效液相色譜法測(cè)定纈沙坦片的含量［J］．中國(guó)藥業(yè)，2010，19（9）：36－37．

［6］ 吳娟娟，李玉琴．高效液相色譜法測(cè)定纈沙坦氫氯噻嗪分散片中兩組分含量［J］．現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2012，27（23）：3532－3534．

［7］ 曲建文，周 艷，李樹(shù)波，等．高效液相色譜法檢測(cè)纈沙坦膠囊中對(duì)映異構(gòu)體［J］．中國(guó)藥業(yè)，2012，21（14）：55－57．