盧成林 潘一明 包善華 謝敏

胰腺癌RRM1、ERCC1蛋白表達(dá)及其與吉西他濱化療效果的相關(guān)性

盧成林 潘一明 包善華 謝敏

胰腺癌是人類消化道惡性腫瘤之一，具有發(fā)病隱匿、進(jìn)展快、預(yù)后差等特點(diǎn)。有關(guān)資料表明，胰腺癌的發(fā)病率每年都在上升，其中位生存期不足6個月，5年存活率<1%[1]。多年來，傳統(tǒng)的胰腺癌化療包括單用吉西他濱或以吉西他濱為基礎(chǔ)的治療方案。文獻(xiàn)報道，核糖核苷酸還原酶M1(RRM1)、切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(ERCC1)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及化療耐受有關(guān)[2]。本研究檢測胰腺癌RRM1、ERCC1的表達(dá)，分析其與臨床病理特征以及吉西他濱介入化療效果的關(guān)系。

一、資料與方法

1．研究對象：收集南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院2008年1月1日至2011年12月31日期間收治的行R0手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)為胰腺癌的38例患者，其中男性23例，女性15例，年齡41～76歲。腫瘤病理分型均為腺癌，其中高分化2例，中高分化5例，中分化17例，中低分化13例，低分化1例；腫瘤最大直徑≥3 cm 22例，<3 cm 16例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例；病理分期無ⅠA期患者，ⅠB期9例，ⅡA期14例，ⅡB期12例，Ⅲ期1例，Ⅳ期2例。

2．癌組織RRM1、ERCC1蛋白表達(dá)檢測：采用常規(guī)免疫組化染色法檢測RRM1、ERCC1蛋白表達(dá)。山羊抗兔RRM1、ERCC1單克隆抗體及二步法免疫組化檢測試劑盒PV-6001/PV-6002、DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，按說明書操作。RRM1陽性染色為腫瘤細(xì)胞核、胞質(zhì)均呈棕黃色；ERCC1陽性染色為腫瘤細(xì)胞核呈棕黃色。在400倍鏡下隨機(jī)選擇5個視野，根據(jù)細(xì)胞染色程度和陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行評分。染色程度：不著色為0分，淡黃色1分，黃色2分，棕褐色3分。RRM1陽性細(xì)胞百分比：無陽性細(xì)胞為0分，1%～9%陽性細(xì)胞為1 分，10%～49%陽性細(xì)胞為2分，≥50%陽性細(xì)胞為3分[3]；ERCC1陽性細(xì)胞百分比：無陽性細(xì)胞0分，1%～9%陽性細(xì)胞1分，10%～24%陽性細(xì)胞2分，25～50%陽性細(xì)胞3分，≥50%陽性細(xì)胞4分[4]。將染色程度評分與陽性細(xì)胞百分比評分相乘，≥6分為陽性表達(dá)，<6分為陰性表達(dá)[4-5]。

3．治療方法及隨訪：所選患者均行R0手術(shù)切除治療，術(shù)后病理檢查均為導(dǎo)管腺癌。38例患者術(shù)后1個月后采取吉西他濱介入化療。應(yīng)用改良seldinger技術(shù)經(jīng)股動脈前壁穿刺，DSA下腹腔動脈、腸系膜上動脈造影后置管，選擇性靶血管灌注注射用鹽酸吉西他濱(美國禮來公司)1 000 mg/m2，持續(xù)30 min以上，其中腸系膜上動脈注入藥物總量的2/3，肝動脈或脾動脈注入藥物總量的1/3。觀察穿刺點(diǎn)有無出血，有無血腫形成及右足背動脈搏動情況，介入灌注化療術(shù)后24 h絕對臥床休息，予以水化3 d。介入化療期間及之后未采取其他抗腫瘤治療。出院后通過患者門診復(fù)查、電話隨訪等方法記錄患者的生存狀態(tài)、死亡時間。隨訪截止期為2014年12月31日。

4．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS19.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)，不符合檢驗(yàn)條件的用Fisher確切概率法；RRM1與ERCC1表達(dá)相關(guān)性檢驗(yàn)采用Speraman等級秩相關(guān)分析，應(yīng)用Kaplan-Meier法分析單因素生存期，采用Log-rank法檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

1．胰腺癌組織RRM1、ERCC1蛋白表達(dá)：38例胰腺癌組織RRM1高表達(dá)26例，陽性率為68.4%；ERCC1高表達(dá)16例，陽性率為42.1%(圖1)。26例RRM1陽性表達(dá)中16例ERCC1陽性表達(dá)；12例RRM1陰性表達(dá)中7例ERCC1陰性表達(dá)，兩種蛋白表達(dá)無顯著相關(guān)性(R=0.006，P=0.971)。

圖1 胰腺癌組織RRM1(1A)、ERCC1(1B)蛋白表達(dá)(免疫組化 ×200)

2．胰腺癌組織RRM1、ERCC1蛋白表達(dá)與腫瘤臨床病理參數(shù)的關(guān)系：胰腺癌組織RRM1、ERCC1蛋白表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(表1)。

表1胰腺癌組織RRM1、ERCC1蛋白表達(dá)與腫瘤臨床病理參數(shù)的關(guān)系

臨床病理參數(shù) RRM1(+)(26例)RRM1(-)(12例)P值ERCC1(+)(16例)ERCC1(-)(22例)P值年齡(歲，x±s)60±1162±90．70063±1059±110．369性別(例)0．5990．071 男158716 女11496腫瘤大小(例)0．4570．861 <3cm12479 ≥3cm148913分化程度(例)0．1250．729 低分化1001 中低分化9467 中分化11689 中高分化5014 高分化0211病理分期(例)0．4100．849 ⅠB5436 ⅡA12268 ⅡB7566 ⅢB1001 Ⅳ1111淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(例)0．9380．742 是9467 否1781015

3．RRM1、ERCC1蛋白的表達(dá)與患者生存期的關(guān)系：RRM1陽性患者平均生存時間為(11.3±0.8)個月，中位生存期為11個月；RRM1陰性患者平均生存時間為(16.3±1.6)個月，中位生存期為16個月(圖2)。RRM1陰性患者的中位生存期長于RRM1陽性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.005)。

圖2 RRM1表達(dá)陽性和陰性患者的生存曲線

ERCC1陽性患者平均生存時間為(11.1±1.1)個月，中位生存期為10個月；ERCC1陰性患者平均生存時間為(14.2±1.0)個月，中位生存期為14個月(圖3)。ERCC1陰性患者中位生存期雖長于ERCC1陽性患者，但兩者間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖3 ERCC1表達(dá)陽性和陰生患者的生存曲線

討論

胰腺癌惡性程度高，進(jìn)展快，預(yù)后較差，有效的治療手段仍是手術(shù)切除。由于胰腺癌的一個重要特點(diǎn)就是容易侵犯其周圍的血管，包括門靜脈、肝動脈、腸系膜上動脈等，導(dǎo)致手術(shù)切除率較低?；熞恢笔且认侔┚C合治療的一部分，在胰腺癌傳統(tǒng)化療中應(yīng)用最廣的為氟尿嘧啶(5-FU)、絲裂霉素(MMC)、順鉑(ADM)、鏈脲霉素(STZ)等。由于單藥化療治療胰腺癌療效差，中位生存期多為3～6個月[6]，因此常采用聯(lián)合化療，如FAM(5-FU+ADM+MMC)、SMF(STZ+MMC+5-FU)方案等[7]，效果較前稍有改善。

吉西他濱是一種新型人工合成嘧啶核苷類似物，主要作用于DNA合成期，在細(xì)胞內(nèi)代謝為有活性的二磷酸鹽，競爭性滲入DNA雙鏈，使DNA鏈復(fù)制終止，引發(fā)細(xì)胞凋亡。目前吉西他濱被認(rèn)為是胰腺癌化療的一線藥物，但其效果仍欠佳，考慮為胰腺癌的耐藥性。有研究認(rèn)為，RRM1高表達(dá)是吉西他濱在胰腺癌中耐藥的重要原因[8-9]，應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制RRM1表達(dá)，可提高吉西他濱耐藥細(xì)胞株對吉西他濱的敏感性[10]。

ERCC1基因被證實(shí)在DNA核苷酸切除修復(fù)過程中扮演重要的角色，ERCC1的缺乏會導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生修復(fù)缺陷，而ERCC1過表達(dá)與鉑類藥物治療惡性腫瘤的抵抗及不良預(yù)后有一定關(guān)系[11]。Fuereder等[12]研究發(fā)現(xiàn)，約一半的胰腺癌患者使用吉西他濱、奧沙利鉑聯(lián)合厄洛替尼治療安全有效，其中ERCC1高表達(dá)患者從中獲益更多。

本研究結(jié)果顯示，38例胰腺癌組織RRM1表達(dá)陽性率為68.4%；ERCC1表達(dá)陽性率為42.1%，且兩種蛋白間表達(dá)無顯著相關(guān)性。RRM1與ERCC1的表達(dá)均與患者的年齡、性別、腫瘤直徑的大小、組織學(xué)類型、病理分期無相關(guān)性，與Valsecchi等[13]、柴文剛等[14]研究結(jié)果一致。

Nakagawa等[15]報道，RRM1與吉西他濱化療患者的無病進(jìn)展期及總生存期有關(guān)，可以根據(jù)其表達(dá)情況預(yù)測吉西他濱化療的效果。本研究結(jié)果顯示，胰腺癌中RRM1陰性患者的中位生存期顯著長于RRM1陽性患者，但ERCC1陰性患者的中位生存期雖然長于ERCC1陽性患者，兩者的差異卻無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明RRM1陰性患者使用吉西他濱介入化療的效果要優(yōu)于RRM1陽性患者，為選擇吉西他濱化療的患者提供一個指標(biāo)。

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(本文編輯：屠振興)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.06.014

210008 南京，南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院肝膽胰外科

潘一明，Email:panyiming6620@sohu.com

2015-05-28)