梁 鵬，周 芳

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院大足醫(yī)院心內(nèi)科，重慶 402360)

慢性心房顫動(chronic atrial fibrillation，CAF)是臨床上常見的心律失常，具有較高的發(fā)病率及死亡率，血栓栓塞和心力衰竭是其最主要的并發(fā)癥［1］，嚴(yán)重影響老年患者的生活質(zhì)量。然而，心房顫動的確切發(fā)生機(jī)制尚不明確，近年研究發(fā)現(xiàn)，炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激與房顫的發(fā)生發(fā)展、自我持續(xù)和復(fù)發(fā)有關(guān)［2，3］。熱休克蛋白(heat shock protein，HSP)是一種細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)的生物標(biāo)志物及細(xì)胞內(nèi)源性保護(hù)蛋白［4］，而胱抑素 C(Cystatin C，CysC)作為一種分泌型蛋白，參與心血管疾病病理生理過程［5］，但兩者與房顫的關(guān)系尚無定論。本文研究擬通過檢測老年患者血清HSP70及CysC水平，探討兩者水平與房顫發(fā)病的相關(guān)性及臨床意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象:選擇2014年1月至2015年1月診治的老年慢性房顫患者100例。入選標(biāo)準(zhǔn):①年齡≥60歲;②心電圖或動態(tài)心電圖診斷為房顫。排除標(biāo)準(zhǔn):①年齡＜60歲;②合并肝腎功能不全、急慢性感染、惡性腫瘤、自身免疫系統(tǒng)及內(nèi)分泌代謝性疾病者;③孕婦及哺乳期婦女。根據(jù)持續(xù)時間，房顫組進(jìn)一步分為三個亞組，及陣發(fā)性房顫組(A組，28例)、持續(xù)性房顫組(B組，31例)及永久性房顫組(C組，41例)。對照組為同期于我院就診的年齡、性別匹配的非房顫老年患者55例。

1.2 房顫定義:陣發(fā)性房顫(paroxysmal AF):房顫發(fā)作時間通常小于7d，多為自限性。持性房顫(persistent AF):房顫發(fā)作時間一般在7d以上，多不能自行終止，需應(yīng)用藥物或電復(fù)律終止。永久性房顫(permanent AF):房顫持續(xù)時間在1年以上，難以復(fù)律或復(fù)律后難以維持竇律。

1.3 血樣采集:所有入選研究對象于清晨空腹抽取靜脈血3～4mL(EDTA抗凝)，以3000r/min離心15min，微量移液器取上清，-80℃保存待成批檢測。

1.4 實驗方法:采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清HSP70濃度，試劑盒為Uscn產(chǎn)品，購自上海超研生物科技有限公司。應(yīng)用免疫比濁法檢測血清CysC水平，試劑盒購自北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司，靈敏度0.1mg/L。實驗步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.5 統(tǒng)計分析:采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，連續(xù)型變量采用±s表示，分類變量采用率表示，多組定量資料比較采用卡方檢驗，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗。應(yīng)用多因素Logistic回歸分析HSP及CysC與房顫的相關(guān)性并計算回歸系數(shù)。變量之間的相關(guān)性分析采用Spearmanz相關(guān)性檢驗。P＞0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般臨床資料:房顫組與對照組基礎(chǔ)臨床資料比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，見表1。

表1 房顫組與對照組一般臨床資料比較n(%)

表2 房顫組與對照組血清HSP70及CysC水平比較±s)

表2 房顫組與對照組血清HSP70及CysC水平比較±s)

注:A組陣發(fā)性房顫，B組持續(xù)性房顫，C組永久性房顫組。*與A組比較P＜0.05，＊＊與A組比較P＜0.01;#與B組比較 P＜0.05

組別 n HSP70(ng/mL) CysC(mg/L)房顫組100 16.07 ±6.28 1.22 ±0.48 A 組 28 14.91 ±4.73 0.98 ±0.29 B 組 31 15.65 ±5.27* 1.12 ±0.32*C 組 41 17.86 ±5.05＊＊# 1.30 ±0.34＊＊#對照組 55 13.55 ±5.73 1.01 ±0.44 t 2.758 2.638 P 0.0148 0.0081

2.2 血清HSP70與CysC比較:與對照組比較，房顫組患者血清 HSP70(t=2.785，P=0.0148)和 CysC(t=2.638，P=0.0081)水平明顯增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。房顫組患者根據(jù)房顫持續(xù)時間分為陣發(fā)性房顫組(A組)、持續(xù)性房顫組(B組)及永久性房顫組(C組)三組，結(jié)果顯示:B組與C組血清HSP70和CysC水平均高于A組(P＜0.05)。C組HSP70及CysC濃度最高，與B組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

2.3 Logistic回歸分析:將房顫組與對照組的自變量進(jìn)行Logistic回歸分析，以除外其他混雜因素對自變量的影響。結(jié)果顯示:血清HSP70和CysC是房顫發(fā)生的獨立預(yù)測因子(見表3)。

表3 房顫組與對照組自變量的logistic回歸分析

2.4 HSP70與CysC相關(guān)性分析:Spearman相關(guān)性分析顯示，房顫組患者血清HSP70與CysC呈顯著正相關(guān)(r=-0.257，P＜0.05)。

3 討論

心房顫動(atrial fibrillation，AF)是最為常見的房性心律失常，研究調(diào)查顯示中國AF患病率為70%，且隨年齡的增長而增加，年齡60歲以上人群中發(fā)病率達(dá)6%，而年齡超過75歲者發(fā)病率高達(dá)10%以上［6］。房顫的發(fā)生機(jī)制十分復(fù)雜，可能主要涉及兩個方面，一是房顫的觸發(fā)因素，包括心動過緩、房性期前收縮或心動過緩、房室旁路和急性心房牽拉等。二是房顫發(fā)生和維持的基質(zhì)［7］。然而，其確切的發(fā)生機(jī)制目前尚不清楚。

最近研究發(fā)現(xiàn)，炎癥通過氧化應(yīng)激影響心房組織重構(gòu)和電重構(gòu)等房顫病理生理的重要過程，從而影響房顫的持續(xù)和復(fù)發(fā)［8］。一方面，心房細(xì)胞及間質(zhì)的炎癥使心房肌細(xì)胞發(fā)生鈣超載，引起心房肌細(xì)胞凋亡，而C-反應(yīng)蛋白等炎癥因子參與清除凋亡的心房肌細(xì)胞，導(dǎo)致心房肌纖維化發(fā)生組織重構(gòu)，心房擴(kuò)大及收縮功能減低進(jìn)一步促進(jìn)房顫持續(xù)，形成惡性循環(huán)。另一方面，炎癥通過氧化應(yīng)激反應(yīng)引起鈉離子通道改變，導(dǎo)致心房規(guī)則、有序的點活動喪失，代之以快速、無序的房顫波，造成心房、心室有效的收縮與舒張功能喪失。

熱休克蛋白(heat shock protein，HSP)又稱應(yīng)激蛋白，根據(jù)分子量大小和氨基酸序列同源性不同，將其分為HSP90、HSP70、HSP60及小 HSP四個家族，HSP具有抗炎、抗氧化、抗細(xì)胞凋亡、協(xié)同免疫等作用。HSP70家族廣泛存在于真核生物中，非應(yīng)激狀態(tài)下以單體形式定位于正常細(xì)胞的胞漿或胞核中，而不與HSP基因上特異DNA片段-熱休克素(heat shock element，HSE)結(jié)合。當(dāng)細(xì)胞受到炎癥刺激時，HSP作為啟動子與HSE結(jié)合，從而啟動HSP70轉(zhuǎn)錄過程。本研究發(fā)現(xiàn)，老年慢性房顫患者血清中HSP水平較對照組明顯升高，與之前Manda等［9］研究結(jié)果一致。

胱抑素C(Cystatin C，CysC)是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，由122個氨基酸殘基組成的低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)，機(jī)體所有的有核細(xì)胞均可持續(xù)穩(wěn)定地產(chǎn)生，其主要功能是參與細(xì)胞外基質(zhì)的重塑和降解。最近研究發(fā)現(xiàn)CysC是心血管疾病發(fā)病率和病死率的獨立預(yù)測因子，而CysC水平更有效地預(yù)測了老年人群中心血管事件和死亡的風(fēng)險。本實驗結(jié)果表明老年慢性房顫患者血清CysC水平明顯升高，并與炎癥因子HSP70存在強(qiáng)相關(guān)性，兩者是房顫發(fā)生的獨立預(yù)測因子。其可能作用機(jī)制如下:①HSP70具有抑制半胱氨酸蛋白酶、應(yīng)激活化蛋白激酶活性及抑制促凋亡基因表達(dá)的作用，CysC協(xié)同HSP70共同抑制心肌細(xì)胞凋亡。②炎癥反應(yīng)刺激HSP70mRNA表達(dá)增加，HSP70通過分子伴侶功能修復(fù)并維持受損蛋白結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，保護(hù)心肌細(xì)胞，進(jìn)而延緩心房組織重構(gòu)。③HSP70還可抑制細(xì)胞膜上快鈉通道開放，延緩心房電重構(gòu)而發(fā)揮抗心律失常作用。④房顫時腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RASS)激活致早期腎功能損傷，血清CysC濃度明顯升高。

［1］ Takahashi N，Kume O，Wakisaka O，et al.Novel strategy to prevent atrial fibrosis and fibrillation［J］.Circ，2012，76(10):2318～2326.

［2］ Lappegard KT，Hovland A，Pop GA，et al.Atrial fibrillation in inflammation in disguise［J］.Scand Immunol，2013，78(2):112～119.

［3］ 陳立媛，嚴(yán)華，陳湘桂，等.炎性細(xì)胞因子及氧化應(yīng)激對心房纖顫的影響［J］.實用醫(yī)學(xué)雜志，2011，27(4):596 ～597.

［4］ 潘宴情，陳鑫.慢性心房顫動患者血清及心肌熱休克蛋白27/60/70的表達(dá)及其意義［J］.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2008，4(36):260～262.

［5］ 張美華，徐清芳，楊敏.B型腦鈉肽、胱抑素C及同型半胱氨酸在早期心力衰竭患者中的診斷價值［J］.醫(yī)藥論壇雜志，2014，11(35):167 ～168.

［6］ 趙燕霞，王蒙琴.心房顫動與炎癥［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2012，9(18):1303～1305.

［7］ Woods CE，Olqin J.Atrial fibrillation therapy now and in the future:drugs，biological and ablation［J］.Cir Res，2014，114(9):1532 ～1546.

［8］ Jacob KA，Nathoe HM，Dieleman JM，et al.Inflammation in new-onset atrial fibrillation after cardiac surgery:a systematic review［J］.Eur Clin Invest，2014，44(4):402 ～428.

［9］ 杜愛玲，季泰令，劉建立，等.心房顫動患者血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑C變化及其與腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的關(guān)系［J］.臨床合理用藥，2011，2A(4):24 ～25.