★　張偉　焦琳　李海瀾　(江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院　南昌 330006)

懸灸“大椎”穴對哮喘神經(jīng)源性炎癥的影響*

★張偉*第一作者:張偉(1978—)，女，博士，副主任中醫(yī)師，講師。研究方向：腧穴敏化規(guī)律。焦琳李海瀾(江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院南昌 330006)

摘要：目的:探討懸灸“大椎”穴對哮喘大鼠神經(jīng)源性炎癥相關因子的影響。方法:懸灸大鼠“大椎”穴，運用ELISA雙抗體夾心法測定大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的NGF、pERK、NKA、NKB、SP、CGRP等神經(jīng)源性炎癥相關因子的含量。結果:模型組中NGF、pERK、NKA、NKB、SP、CGRP的含量較空白組有非常顯著性升高((P<0.01)，而治療組各因子的含量與模型組比較有非常顯著性降低(P<0.01)。結論:哮喘的發(fā)作可能與神經(jīng)生長因子介導的神經(jīng)源性炎癥有非常密切的相關性，而懸灸“大椎”穴可通過抑制其相關級聯(lián)反應來降低神經(jīng)源性炎癥，從而降低哮喘的炎癥反應。

關鍵詞：懸灸；大椎；哮喘；神經(jīng)生長因子

支氣管哮喘是一種以氣管高反應性和氣管變態(tài)性炎癥為特征的慢性氣管炎癥。在以往的研究中，哮喘的免疫源性因素被研究頗多，但近年來神經(jīng)源性因素的影響漸漸成了研究的熱點，神經(jīng)-免疫的綜合作用可能為哮喘發(fā)作的重要途徑。

神經(jīng)生長因子(NGF)在神經(jīng)源性哮喘的發(fā)作中起到核心的作用。它是第一個被發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)營養(yǎng)因子。它具有促進神經(jīng)細胞存活和生長發(fā)育的作用。NGF可通過與其高親和力受體TrkA結合，通過細胞外調節(jié)蛋白激酶(ERK)途徑，參與合成某些促進哮喘的神經(jīng)肽類物質[1]，如神經(jīng)激肽A(NKA)、神經(jīng)激肽B、(NKB)P物質(SP)、降鈣素基因相關肽(CGRP)等神經(jīng)肽類物質，這些物質會加重氣道炎癥反應、增強氣道高阻性。

本研究擬通過觀察懸灸法對哮喘大鼠的神經(jīng)源性炎癥相關因子的改善作用，探討艾灸治療哮喘的神經(jīng)源性炎癥相關機制。

1材料與方法

1.1動物與分組由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供的清潔級雄性SD大鼠36只，體重200～220g，許可證號：SCXK(湘)2013-0005。由江西中醫(yī)藥大學灸療研究實驗室飼養(yǎng)，良好的通風條件，室溫25℃，空氣濕度為50%。按隨機數(shù)字表法分為對照組、模型組、治療組3組，每組12只。

1.2主要試劑和儀器大鼠NGF、磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶(pERK)、NKA、NKB和SP、CGRP酶聯(lián)免疫吸附試劑盒(上海偉進生物科技有限公司)，超聲霧化器(型號：402AI，上海魚躍醫(yī)療設備有限公司)，酶標儀(型號：Multiskan mk3，芬蘭雷勃公司)，艾條：4mm×10mm(江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院生產(chǎn))。

1.3造模方法[2]大鼠于第1d、第8d腹腔注射10%卵白蛋白(OVA)和氫氧化鋁(AL(OH)3)溶液0.2mL，2次致敏，于實驗第15d起開始霧化吸入1%OVA溶液30min誘喘，霧化流量3mL/min?？瞻捉M用注射用水代替卵清白蛋白液進行注射和霧化吸入。以大鼠出現(xiàn)煩躁、打噴嚏、嗆咳、呼吸幅度加大、頻率加快，腹式呼吸或點頭運動，甚者出現(xiàn)呼吸減慢或節(jié)律不整，行動遲滯或俯伏不動、四肢癱軟、反應遲鈍等癥狀為激發(fā)成功。

1.4艾灸方法造模成功后，開始介入艾灸治療。用固定夾將大鼠固定后，選取大鼠大椎穴，定位取穴按照胡元亮所編《實用動物針灸手冊》，取第七頸椎與第1胸椎之間背部正中。用1支艾條懸于大椎穴上約2cm處先回旋灸2min預熱局部皮膚，再固定于大椎穴施行溫和灸，于實施者將食指放于大椎穴處有溫熱感為宜。每日于早10:00時起，對治療組懸灸30min，共治療7d。

1.5樣本采集及檢測各組大鼠在治療結束2h內，用1%戊巴比妥鈉(90mg/kg)腹膜腔注射麻醉，暴露肺組織，分離氣管，結扎右主支氣管，向左肺勻速注入4mL無菌生理鹽水，反復回抽3次，回收BALF并計量，回收率大于80%，采集BALF后，離心10min(1 000r/min)，取其上清液。NGF、pERK、NKA、NKB和SP、CGRP采用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測。

2結果

2.1各組大鼠BALF中NGF、pERK含量的對比見表1、圖1。

組別NGF/pg·mL-1pERK/U·mL-1空白組37.63±8.1421.13±4.49模型組162.36±37.18●130.47±26.58●治療組83.02±17.69▲52.84±10.61▲

注：與空白組比較，●P<0.01；與模型組比較，▲P<0.01。

結果表明：模型組BALF中NGF、pERK的含量明顯高于空白組(P<0.01)，說明哮喘的發(fā)作與NGF、pERK的含量有顯著相關性；治療組與模型組比較，BALF中NGF、pERK的含量有非常顯著性降低(P<0.01)，說明懸灸治療對降低NGF、pERK的含量具有顯著作用。

圖1　BALF中NGF、pERK含量比較

2.2各組大鼠BALF中SP、CGRP、NKA、NKB含量的對比見表2、圖2。

表2　各組大鼠BALF中

注：與空白組比較，●P<0.01；與模型組比較，▲P<0.01。

結果表明，模型組大鼠BALF中SP、CGRP、NKA、NKB含量明顯高于空白組(P<0.01)，說明SP、CGRP、NKA、NKB參與了哮喘的發(fā)作；治療組BALF中SP、CGRP、NKA、NKB的含量與模型組比較亦有非常顯著性差異(P<0.01)，說明懸灸大椎穴可降低此類神經(jīng)肽類物質的含量，從而減輕哮喘的發(fā)作。

圖2　BALF中SP、CGRP、NKA、NKB含量對比

3討論

哮喘氣道的炎性反應，以往對其免疫源性因素研究頗多，近年來神經(jīng)源性因素的作用越來越被重視。NGF是最早發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)生長因子家族成員，它不僅調控神經(jīng)發(fā)育、存活及維護其功能，也參與免疫炎癥調控，以及復雜的神經(jīng)-免疫相互作用[3]。如它可促使大鼠皮膚血管通透性增強，使肥大細胞數(shù)量增多并促其快速脫顆粒等。所以當病毒、細菌或其他變應原刺激氣道的炎癥細胞時，可促進炎癥細胞釋放NGF，這些NGF可通過一系列的級聯(lián)反應，釋放其下游活性物質-神經(jīng)肽類物質，如NKA、NKB、SP、CGRP等，此類神經(jīng)肽類物質可以促進氣道黏液高分泌、促進炎癥介質釋放、收縮氣道平滑肌及增加氣道高反應性等作用，因而認為它們可能參與哮喘的生理病理過程[4-7]。

目前認為，NGF最可能通過細胞外信號調節(jié)激酶轉導途徑來誘發(fā)哮喘。NGF與其高新和力受體TrkA結合進入細胞內，通過Ras-Raf-MEK一系列級連反應導致ERK磷酸化，激活的ERK進入細胞核，將細胞信號傳導到細胞核內，參與轉錄。有研究[1]初步證實了哮喘豚鼠初級傳入神經(jīng)元(C7-T5脊神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元)的NGF被過度激活，NGF可上調其活化ERK的表達，而應用anti-NGF后，活化ERK的表達下調。過度激活的ERK進入細胞核，激活轉錄因子，參與合成促進哮喘發(fā)作的某些神經(jīng)肽類物質。

支氣管哮喘屬于中醫(yī)學“哮病”“喘證”范疇，中醫(yī)認為哮喘為外因或外邪引觸宿痰，以致肺失肅降，痰阻氣道，氣道攣急所致。其病因主要是由于肺、脾、腎三臟不能布散、運化、蒸騰氣化津液，以致聚濕成痰，伏藏于肺，成為發(fā)病的潛在夙根，因各種誘因而引發(fā)，故其病位雖在肺，但與腎、脾關系密切。督脈為陽脈之海，總督一身之陽，為機體的動力之源，而大椎穴位于督脈第七頸椎棘突下，手足三陽的陽熱之氣由此匯入本穴并與督脈的陽氣上行頭頸，有溫陽補虛、宣肺平喘之功，多治療肺之疾病，如感冒、咳喘、寒熱不調等。艾灸大椎是臨床治療哮喘的常用方法。

本研究發(fā)現(xiàn)，模型組的大鼠BALF中NGF、pERK、NKA、NK、BSP、CGRP含量較空白組有非常顯著性升高(P<0.01)，說明哮喘的發(fā)生可能與NGF引起的神經(jīng)源性炎癥有密切相關，且NGF可能與細胞外信號調節(jié)激酶轉導途徑(ERK途徑)有關，細胞外信號調節(jié)激酶被磷酸化(pERK)后進入細胞核，促進哮喘發(fā)作的神經(jīng)肽類物質(NKA、NKB、SP、CGRP)的釋放；治療組與模型組比較，大鼠BALF中神經(jīng)源性炎癥相關因子含量皆有非常顯著性降低(P<0.01)，說明懸灸大椎穴可以通過降低哮喘大鼠的神經(jīng)源性炎癥來改善氣道的炎性反應和氣道高阻性。

參考文獻

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The Influence of Suspended Moxibustion "Da-zhui" Point on Neurogenic Inflammation of Asthma

ZHANG Wei, JIAO Lin, LI Hai-lan

TheAffiliatedHospitalofJiangxiUniversityofTCM，Nanchang330006,China.

Abstract:Objective：To explore the effect of suspended moxibustion "Da-zhui" point on neurogenic inflammation mechanism of asthma rats. Method：Suspend "Da-zhui" point of the rats,then use the method of ELISA(enzyme-linked immuno sorbent assay) assaying the levels of related factors to neurogenic inflammation such as NGF、pERK、NKA、NKB、SP、CGRP in bronchoalveolar lavage(BALF). Results：The levels of NGF、pERK、NKA、NKB、SP、CGRP of model group were much higher than blank control group (P<0.01),while the levels of correlated factors of treatment group were much lower than model group(P<0.01). Conclusion：The attack of asthma may have close correlation with neurogenic inflammation mediated by nerve growth factor,while moxibustion can reduce neurogenic inflammation by restraining related cascade reaction.

Key words:Suspended Moxibustion；"Da-zhui" Point；Asthma；Nerve Growth Factor

收稿日期：(2015-04-27)編輯：秦小瓏

中圖分類號：R245.8

文獻標識碼：B

基金項目：*江西省自然科學 (20122BAB205092)。